Rose Bengal er en laboratorietest basert på en antigen-antistoffreaksjon for diagnose av brucellose. Teknikken tillater påvisning av spesifikke antistoffer mot Brucella abortusbakterien i humane serumprøver. Resultatet kan rapporteres kvalitativt eller semikvantitativt.
Den kvalitative formen uttrykker om pasienten er positiv eller negativ for testen, det vil si om det er antistoffer eller ikke. I mellomtiden rapporteres den semikvantitative rapporten i IU / ml og indikerer omtrentlig mengde antistoffer som er til stede. Det skal bemerkes at antistoffer bare vil bli produsert hvis pasienten har vært i kontakt med mikroorganismen.
Rose Bengal-reaksjon i en agglutineringsplate. Kilde: hentet fra videoen https://youtu.be/igAVQ-GiyGY
På grunn av sin store enkelhet, høye følsomhet og spesifisitet, er det en av seroagglutinasjonsteknikkene som er mest brukt i medisin som en første test for diagnose av denne sykdommen.
Noen forskere har sammenlignet effektiviteten av Rose Bengal-testen med andre teknikker, for eksempel seroagglutinasjon (feberantigener) og har observert at selv om det er god sammenheng, så de isolerte tilfeller der den febile antigen-testen var negativ og Rose de Positiv bluss.
Forskjellen som ble oppnådd skyldtes det faktum at disse pasientene hadde en underklasse av IgG-antistoffer mot Brucella abortus med bedre bindingsevne ved sur pH, derfor kunne de reagere med Rose Bengal-reagenset, men ikke med det med feberantigener.
I denne forstand har de antydet at reagensene i den feberlige antigen-teknikken blir modifisert til en sur pH-verdi, slik at de kan oppdage denne type tilfeller.
Basis
Rose Bengal Reagent består av en antigen suspensjon. Den består av S99-stammen av Brucella abortus, fortynnet i en sur laktatbuffer (pH 3,6), pluss fenol og Rose Bengal-fargestoffet.
Derfor er det i prøven det som søkes anti-Brucella antistoffer, hvis disse er til stede, vil de reagere med reagensantigenet og en makroskopisk synlig agglutineringsreaksjon vil bli observert. Testen oppdager enten IgM-antistoffer eller IgG-antistoffer.
Dette betyr at den kan oppdage sykdommen både i det akutte stadiet der IgM-antistoffer råder eller i dets kroniske stadium der IgG-antistoffer dominerer.
Dette representerer en fordel siden den øker følsomheten til testen, men samtidig er det en ulempe siden den ikke skiller mellom et trinn og et annet, fordi reaksjonen med IgM og IgG antistoffer er identiske.
Testen må alltid utføres sammen med en negativ kontroll og en positiv kontroll. Den negative kontrollen inneholder animalsk serum uten antistoffer, og den positive kontrollen inneholder serum av animalsk opprinnelse med 50 IE / ml anti-Brucella antistoffer.
Bruk
Brucellose er en alvorlig sykdom som har en tendens til å være kronisk og farlig, så det er veldig viktig at den diagnostiseres tidlig. Det er en zoonose, og mennesker kan bli smittet ved direkte kontakt med forurenset materiale, der de mest utsatte menneskene er veterinærer og dyrepleiere.
Smitte kan også oppstå ved å spise infisert rå kjøtt, blant andre infeksjonsformer.
Denne sykdommen angriper lokalt eller systemisk. Den systemiske formen er den mest alvorlige, siden forskjellige organer kan bli påvirket, inkludert retikulum endotelialsystem (lever, milt, benmarg), hud (cellulitt og lymfadenopati), luftveier (lungebetennelse), muskel-skjelettsystem (leddgikt, sacroiliitis og spondylitis), blant andre.
Rose Bengal-testen er en veldig nyttig teknikk for å utføre en initial screening, fordi den er veldig billig, enkel å bruke og har stor spesifisitet og følsomhet.
Tilfeller av falske negativer og falske positive er veldig sjeldne, og kan forekomme hos personer med henholdsvis meget lave antistofftiter (<25 IE / ml) eller ekstremt høye (> 1000 IE / ml).
Prosess
materialer
-Rose Bengal Kit
-Agglutinasjonsplate hvit bakgrunn
-50 ul pipette
-Rotator (valgfritt)
-Vortex
Teknikk (kvalitativ metode)
Kommersielle Rose Bengal-sett har reagenser som er klare til bruk.
-Temperer reagensene før du begynner å jobbe.
-Agglutinasjonsplatene har sirkler tegnet, hver for en annen prøve. Bruk 3 sirkler, den første for negativ kontroll, den andre for prøven, og den tredje for den positive kontrollen.
-Sett en dråpe eller 50 ul av kontrollene og prøven i den tilhørende sirkelen.
-Bland Rose Bengal-reagenset med en virvel. Plasser en dråpe ved siden av de tidligere plasserte.
-Blanding med tannpirkere av tre (bruk en for hvert eksemplar eller kontroll). Lag sirkulære bevegelser og spred slik at du dekker hele sirkelen.
Kilde: bilder hentet fra Video: https://youtu.be/igAVQ-GiyGY. Redigert bildeoppsett.
- Plasser platen på en automatisk rotator ved 80 til 100 o / min, eller roter manuelt i 4 minutter. Les beviset på slutten av denne tiden.
-Bekreft at kontrollene ga som forventet. Sammenlign reaksjonen av testprøven med kontrollene. Rapporter som positiv hvis agglutinasjon blir observert og som negativ hvis det ikke er agglutinasjon.
En positiv test indikerer at pasienten har en mengde lik eller større enn 25 IE / ml anti-Brucella antistoffer.
Tolkning av en positiv (med agglutinasjon) og negativ (uten agglutinasjon) reaksjon. Kilde: Citrulline. Redigert bilde.
Teknikk (semi-kvantitativ)
Hvis prøven i den kvalitative reaksjonen er sterkt positiv, kan den semi-kvantifiseres. For dette blir serielle doble fortynninger av prøven laget med fysiologisk saltløsning. Prosedyren tidligere beskrevet blir utført med hver fortynning.
Det tolkes også ved å observere agglutineringen makroskopisk. Resultatet vil være titeren på den høyeste fortynningen der et positivt resultat ble observert.
For å beregne den omtrentlige verdien av anti-Brucella antistoffer, brukes følgende formel:
25 IE / ml x reaksjonstiter = IE / ml
Eksempel, hvis en pasient i den semikvantitative testen tester positiv ved fortynningen ½, ¼ og 1/8 og begynner å være negativ fra 1/16 fortynningen og utover, betyr dette at pasienten har en titer på 8 .
Bruke formelen:
25 IE / ml x 8 = 200 IE / ml
QA
-Settene har en utløpsdato, og den må respekteres. Bør ikke brukes hvis reagenset er utløpt.
-Under bruk, må du forsikre deg om at reagenset ikke inneholder faste partikler, da dette er et tegn på forverring.
-Hold mellom 2 og 8 ° C.
- Ikke frys, denne handlingen skader reagensen irremediably.
- Gjennomfør alltid testen sammen med de negative og positive kontrollene.
-Teknikken tåler serumprøver med en viss grad av lipemi og hemolyse, men det anbefales ikke å bruke overdreven lipemisk og hemolysert sera, begge forholdene endrer resultatene av testen.
-Gjør alltid reagenser til romtemperatur før du starter analysen.
-Tolk ikke reaksjoner som tar lengre tid enn anbefalt tid, da dette genererer rapporten om falske positiver, siden reagenset etter en viss tid faller ut, og simulerer en positiv reaksjon.
-Teknikken er 100% sensitiv og har en spesifisitet på 98%.
-Etter en semikvantifisering på 1000 IE / ml er det muligheten for å observere en prozoneffekt (falsk negativ på grunn av overflødig antistoff sammenlignet med antigenmengden).
referanser
- Rubio M, Barrio B og Díaz R. Verdi av Rosa de Bengala, Coombs og motimmuno-elektroforesetester for å diagnostisere tilfeller av human brucellose der serumagglutinasjon er negativ. Institutt for mikrobiologi. Klinisk mikrobiologitjeneste. University Clinic. Universitetet i Navarra. 406-407. Tilgjengelig på: elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas
- "Brucellose." Wikipedia, The Free Encyclopedia. 6 des 2019, 14:37 UTC. 18. des 2019, 18:09 no.wikipedia.org.
- Monlab Laboratories. Monlab Bengal Rose - test. 2016. Tilgjengelig på: monlab.es/
- Carrillo C, Gotuzzo E. Brucellosis. Pastor Peru. Med. Eksp. Public Health 1997; 14 (1): 63-66. Tilgjengelig på: scielo.org
- Morales-García R, García-Méndez N, Regalado-Jacobo D, López-Merino A, Contreras-Rodríguez A. Klinisk, serologisk og polymerasekjedereaksjon oppfølging av en familie med brucellose. Pastor chil. Infectol. 2014; 31 (4): 425-433. Tilgjengelig på: scielo.conicyt.