SAFRANIN: EGENSKAPER, BRUK, TEKNIKKER, TOKSISITET - KJEMI - 2026

Den safranin er en meriquinoide fargestoff, oppkalt etter sin kjemiske struktur som har to benzenoidringer og fra 2 kinonoide ringer, den sistnevnte er de som gir fargen rød.

Det kalles også dimetyl safranin eller basisk rød 2 i sin korte form, siden det vitenskapelige navnet er 3,7-diamino-2,8-dimetyl-5-fenyl-fenaziniumklor dimetyl safranin og den kjemiske formelen er C ₂₀ H ₁₉ N ₄ cl.

Kjemisk struktur av safranin som indikerer benzenoid- og kinoidringer / vandig oppløsning av safranin. Kilde: NEUROtiker redigert av MSc. Marielsa Gil / LHcheM

Det er en variant som kalles trimetyl-safranin, men det er ingen signifikant forskjell mellom de to stoffene.

Safranin er et monokromatisk fargestoff og er, avhengig av egenskapene til den kjemiske formelen, et positivt ladet stoff. Derfor har det en tilhørighet til negativt ladede strukturer. Disse strukturene vil være farget rødt.

Denne egenskapen gir det anvendelse i mange histologiske teknikker for å beise forskjellige cellulære strukturer, både av eukaryote og prokaryote organismer.

Safranin brukes som kontrastfargestoff i viktige og velkjente teknikker for rutinemessig bruk i bakteriologi. Disse teknikkene er: Gram-Hucker-flekken, Schaeffer Fulton-flekken for sporer eller flekker av bakteriekapsler, blant andre.

kjennetegn

Fargen på safran (et krydder hentet fra stigmas av Crocus sativus-blomsten) var inspirasjonen til å navngi dette fargestoffet. Fra begrepet safran kommer navnet safranin. Dette skyldes den store likheten mellom safranens farge og fargen som fargestoffet gir.

Safranin er tilgjengelig som krystaller eller pulver, begge presentasjonene er oppløselige i vann. Safraninfargestoffet er luktfritt. Flekker strukturer røde. Strukturer som tiltrekker seg safraninfargestoff kalles safranofile.

Strukturelt safranin er sammensatt, det har to benzenoidringer i endene, og i sentrum er de to quinoidringene der N ⁺ kation er funnet . Sentrum av strukturen er systemet som har ansvaret for å gi fargen. På grunn av denne egenskapen er denne fargestoffet klassifisert i kategori II.

Bruk

Safranin brukes til å beise forskjellige strukturer. Fremhever spesielt Kulchitsky-celler som er tilstede i mage-tarmkanalen, også kalt enterokromaffin-celler.

Den er i stand til å farge mikroorganismer som tilhører Rickettsiaceae-familien. På samme måte brukes den i forskjellige teknikker, for eksempel Koster-metoden, en modifisert som brukes til å flekker bakterier av slekten Brucella.

På den annen side brukes safranin i Schaeffer Fulton sporefargingsteknikk og i Gram-Hucker-farging. I begge teknikkene fungerer safranin som et kontrastfargestoff.

I den første tar sporene fargen av malakittgrønn og resten av strukturene er røde av safranin. I det andre mister de Gram-negative bakteriene fargen på den fiolette krystallen i misfargingstrinnet, derfor er safranin den som farger de Gram-negative bakteriene røde.

I tillegg brukes safranin i bakteriologi for å fremstille Brucella agar media med en fortynning av safranin 1: 5000. Dette mediet tjener til å skille Brucella suis-artene fra resten av arten. Brucella melitensis og Brucella abortus vokser på dette mediet, men B. suis er hemmet.

I det agroindustrielle feltet er safranin brukt med 2,25% og fortynnet 1:10 for å beise stamprøver fra sukkerrørplanten.

Denne planten er ofte påvirket av bakterien Leifsonia xyli subsp. xyli, som skader plantens xylem. De fargede stilkene blir evaluert for å bestemme funksjonen til xylemkarene.

Teknikker innen bakteriologi

Castañeda beis for farging

En blod- eller vevsutstrykning blir plassert i en bufferløsning (fosfatbuffer pH 7,6). La tørke spontant og dekk deretter med metylenblått i 3 minutter og forsett med safranin. Rickettsiae er blåfarget, i kontrast til den røde bakgrunnen.

Koster flekk modifisert for

Det smøres og flammes i lighteren for fiksering. Deretter tildekkes det med en blanding av 2 deler mettet vandig safranin med 3 deler 1 mol / L KOH-oppløsning i 1 minutt. En vask utføres med destillert vann og tettes med 1% karbolisk metylenblått.

Hvis prøven inneholder bakterier av slekten Brucella, vil de vises oransje på blå bakgrunn.

Bakteriell kapselfarging

En blanding av bakteriesuspensjon lages med India blekk og safranin tilsettes. Under mikroskopet vil det vises en rødlig glorie rundt hver bakteriekapsel med svart bakgrunn.

Sporfarging

En spredning lages med bakteriesuspensjonen. Da er den fikset til varme. Den er dekket med 5% malakittgrønn, ofte flammende inntil damputslipp. Prosessen gjentas i 6-10 minutter. Til slutt vaskes den med vann og tettes med 0,5% safranin i 30 sekunder. Bacilliene farger røde og sporer grønne.

Gram-Hucker beis

Det smøres med bakteriesuspensjon og festes i varmen. Dekk lysbildet med krystallfiolett i 1 minutt. Deretter plasseres lugol som en god løsning i 1 minutt. Deretter blekes det med acetonalkohol og tilsluttes til slutt med safranin i 30 sekunder.

Gram-positive bakterier flekker blåaktig fiolett og Gram-negative bakterier rød.

Noen laboratorier har sluttet å bruke Gram-Hucker-teknikken for å ta i bruk den modifiserte Gram-Kopeloff-teknikken. I sistnevnte erstattes safranin av grunnleggende fuchsin. Dette er fordi safranin sårer flekker av artene Legionella, Campylobacter og Brucella.

Teknikker innen histologi

Kulchitsky cellefarging (enterokromaffiner)

Vevsseksjoner fra mage-tarmkanalen er farget med sølvklorid. Deretter farges det av med natriumtiosulfat og til slutt blir dekket med safranin.

Kulchitsky-celler skilles ved tilstedeværelsen av svartbrune granuler.

Artrose beis

Fordi safranin har en positiv ladning, binder den veldig bra til karboksyl- og sulfatgruppene av glykosaminoglykaner. Dette er en del av proteoglykanene som utgjør leddbrusk. På denne måten er det mulig å identifisere hvorvidt det er tap av brusk når det farges med safranin O.

Tapet av bruskvev kan måles ved å bruke Mankin-skalaen eller også kalt artroseskalaen.

Teknikken blir forklart nedenfor: det histologiske avsnittet er nedsenket i et brett med Weigerts jernhematoksylinløsning, deretter ført det gjennom sur alkohol og vasket med vann.

Fortsett fargeleggingsprosessen ved å dyppe lysbildet i raskt grønt, det vaskes med eddiksyre og nedsenkes det i safranin O. For å fullføre prosessen, dehydreres det ved å bruke alkoholer i forskjellige konsentrasjoner i stigende rekkefølge. Det siste trinnet krever xylen eller xylen for at prøven skal avklares.

Objektglassene er kondisjonert med Canada balsam eller lignende som observeres under mikroskopet.

Med denne teknikken er kjernene farget svart, beingrønt og brusk der proteoglykanene er røde.

Flekk for identifisering av makroalger

Pérez et al. I 2003 foreslo en enkel og billig teknikk for å fargestykke makroalger. Prøvene blir fremstilt i parafinhistologiske seksjoner. Seksjonene er fikset med 1% glyserin, slik at de kan tørke fullstendig. Den blir deretter plassert i xylol for å fjerne parafinet.

Seksjonen blir rehydrert ved å føre den gjennom en serie brett som inneholder etanol i forskjellige konsentrasjonsgrader (synkende rekkefølge), i 2 minutter i hver.

Deretter farges det i 5 minutter med en 3: 1-blanding av 1% safranin med 1% toluidinblått, begge fremstilt med 50% etanol. Tre dråper pikrinsyre tilsettes blandingen, som fungerer som en mordant.

Da blir dehydrert ved å passere gjennom alkoholskuffene igjen, men denne gangen på en stigende måte. Til slutt skylles den med xylol og prøven tilberedes med Canada balsam som skal observeres.

toksisitet

Heldigvis er safranin et fargestoff som ikke representerer noen fare for de som takler det. Det er en ufarlig fargestoff, den er ikke kreftfremkallende og den er ikke brannfarlig.

Direkte kontakt med huden eller slimhinnen kan forårsake en liten rødhet i området, uten store komplikasjoner. For dette anbefales det å vaske det berørte området med rikelig med vann.

referanser

1. García H. Colorante safranina O. Tekniker i helse, 2012; 1 (2): 83-85. Tilgjengelig på: medigraphic.com
2. Gil M. Gram beis: fundament, materialer, teknikk og bruksområder. 2019. Tilgjengelig på: lifeder.com
3. Gil M. Spore-farging: begrunnelse, teknikker og bruksområder. 2019. Tilgjengelig på: lifeder.com
4. Safranina. " Wikipedia, The Free Encyclopedia. 7 mar 2017, 10:39 UTC. 3. august 2019, 20:49 en.wikipedia.org
5. Pérez-Cortéz S, Vera B, Sánchez C. Nyttig fargeteknikk i den anatomiske tolkningen av Gracilariopsis tenuifrons og Gracilaria chilensis (Rhodophyta). Act Bot. Venez. 2003; 26 (2): 237-244. Tilgjengelig på: scielo.org.
6. Aleika kirke, Peralta Esther Lilia, Alvarez Elba, Milián J, Matos Madyu. Forholdet til funksjonen til xylem-karene og tilstedeværelsen av Leifsonia xyli subsp. xyli. Pastor Veg-beskyttelse. 2007; 22 (1): 65-65. Tilgjengelig på: scielo.sld