MAI GRÜNWALD-GIEMSA FLEKK: BEGRUNNELSE, TEKNIKK OG BRUKSOMRÅDER - BIOLOGI - 2026

Den May Grünwald-Giemsa eller Pappen flekken er en differensialfarveteknikk som blander Giemsa og mai Grünwald reagenser. Det brukes til differensiering av normale og unormale blodceller i perifert blod- og benmargsutstryk, samt for farging av histologiske seksjoner og cytologiske prøver.

Begge reagensene -Giemsa og May Grünwald- er avledet av farging av Romanowsky-typen, en teknikk som er basert på kombinasjonen av sure og basiske fargestoffer.

Smetning som viser en segmentert nøytrofil og en milleocyt i tilfelle av kronisk myeloid leukemi, farget med May Grünwald Giemsa-flekken. Dr Ramon Simon-Lopez (https://es.m.wikipedia.org/wiki/Archivo:LMC-1.JPG) gjennom Wikipedia.org.

Giemsa forbedret teknikken ved å stabilisere blandingen av eosin, metylenblått og derivater derav med glyserol. I stedet bruker May Grünwald eosin og metylenblått, og bruker metanol som løsningsmiddel. Denne strategiske kombinasjonen har gitt utmerkede resultater.

Selv om det i forhold til observasjon av cellemorfologi virker på en lignende måte som Giemsa og Wright-flekkene, forbedrer denne teknikken de tidligere ved å raffinere flekker av parasittene som forårsaker malaria, Chagas sykdom, leishmaniasis og trichomoniasis.

I tillegg har det vist seg å være en veldig nyttig teknikk for cytologisk undersøkelse av spermatisk væske. Det har skilt seg ut ikke bare ved å vise de morfologiske egenskapene til sæd, men også ved å tillate differensiering av leukocytter, epitelceller og spermatogenese celler med stor effektivitet.

Basis

Teknikken følger grunnlaget for Romanowsky-flekker, der sure fargestoffer har selektiv affinitet for basiske cellulære komponenter og sure komponenter tiltrekker seg grunnleggende flekker.

Forklart på en annen måte har både cellestrukturer og fargestoffer positive eller negative elektriske ladninger; som kostnader frastøter og forskjellige kostnader tiltrekker seg.

For eksempel er basiske fargestoffer som metylenblått positivt ladet og tiltrekkes av negativt ladede strukturer. Derfor farger dette fargestoff kjernene som er rike på DNA og RNA som har negativt ladede fosfatgrupper.

Granulater av segmenterte basofiler og cytoplasmer av RNA-holdige mononukleære hvite blodceller er også farget.

På samme måte har surfargestoffet en negativ ladning, og det er grunnen til at den binder seg til positivt ladede strukturer som erytrocytter og granuler av segmenterte eosinofiler. Når det gjelder granulatene med segmenterte nøytrofiler, fikser disse begge fargestoffene.

Ulike fargestoffer

I denne teknikken eksisterer en kombinasjon av reaksjoner mellom ortokromatisk og metakromatisk fargestoff. Ortokromatika (eosin og metylenblått) binder seg til cellestrukturen som de er relatert til og gir en stabil farge som ikke varierer.

På den annen side, metakromatene (derivatene av metylenblått azurblått A og blått B), varierer sin opprinnelige farge når de er festet til den spesifikke strukturen, og det kan til og med være en rekke nyanser.

Til slutt krever trinnet som May Grünwald-løsningen tar tilstedeværelse av vann, siden uten dette vil fargestoffet trenge gjennom strukturene, men ikke fikse. For at dette skal skje, må fargestoffet bli polært eller ionisere, og dermed kunne utfelle og binde seg til beslektede strukturer.

Teknikk

materialer

- Skyv lysbilder.

- Fargebroer.

- May-Grünwald-løsningen.

- Giemsa flekk.

- Destillert vann.

Kan Grünwald farge konsentrert løsning

0,25 g eosin-metylenblått (flekk ifølge May Grünwald) må veies ut og oppløses i 100 ml metanol. Deretter blandes preparatet i 1 time og får hvile i 24 timer. På slutten av tiden filtreres den.

For å anvende teknikken må May Grünwald-fargestoffet fortynnes som følger: for 200 ml fortynnet fargestoff måles 30 ml av den konsentrerte oppløsningen, tilsett 20 ml bufferoppløsning og 150 ml destillert vann justert til pH7,2-7,3 . Senere blir det blandet og filtrert.

Giemsa flekkekonsentrat

0,5 g azurblått eosin-metylenblått (flekk i henhold til Giemsa) må veies, oppløses i 50 ml metanol og 50 ml glyserin tilsettes til blandingen.

For å utføre teknikken, fortynn 1:10 med bufferløsning og la den hvile i 10 minutter. Det kan filtreres om nødvendig.

Fremstilling av bufferløsningen ved pH 7,2

De bør veies:

- 40 mg kaliumdi-hydrogenfosfat (KH2PO4).

- 151 mg di-natriumhydrogenfosfat 12-hydrat (Na2HPO4).

Begge forbindelser oppløses i 100 ml vann.

Prosedyre for flekk ved flekker i blod eller benmarg

Det er to modus: en klassiker og en rask.

Klassisk modus

1. Dekk smørene i 2 til 3 minutter med den fortynnede May-Grünwald-oppløsningen.
2. Vask med buffret destillert vann for å fjerne den forrige oppløsningen.
3. Dekk til med den samme buffrede vaskeoppløsningen og la stå i 1 minutt. Tanken er at det forrige fargestoffet er festet til strukturene, og at cellene samtidig blir hydrert.
4. Tilsett 12 dråper fortynnet Giemsa-tinktur i det buffrede vannet og blåse for å blande og homogenisere. La den hvile i 15 til 20 minutter.
5. Vask utstryk med buffret destillert vann og sett på lufttørk.
6. Fokuser og se de fargede blodcellene under et lysmikroskop ved å bruke 40X-målet. Om nødvendig kan 100X brukes.

Rask modus

1. Dekk smøret med utvannet May Grünwald-flekk i 1 minutt.
2. Vask med buffret destillert vann.
3. Dekk til med bufret vann og la det hvile i 1 minutt.
4. Tilsett den fortynnede Giemsa-flekken og la stå i 5 minutter.
5. Vask med buffret destillert vann og la lufttørke.

Teknikkene som er beskrevet her er en retningslinje, men det bør tas i betraktning at prosedyrene og fargetidene varierer i henhold til det kommersielle selskapet som distribuerer reagensene. Det anbefales å følge trinnene strengt indikert av hvert kommersielt hus.

Teknikk for fargelegging av spermatisk væske

1- Dekk smøre med et tynt lag av May Grünwald-oppløsningen i 4 minutter.

2- Fjern fargestoffet og vask med destillert vann.

3- Legg et lag fortynnet Giemsa (1:10) i destillert vann i 15 minutter.

4- Fjern fargestoffet og vask med destillert vann.

5- La tørke og se under mikroskopet.

Forventet farger med May Grünwald Giemsa-flekken

Viktige spesifikasjoner

Teknikken krever at reagensene og vaskeoppløsningene har en pH justert til 7,2 -7,3, slik at affinitetene til fargestoffene for cellestrukturene ikke blir forvrengt og den forventede endelige fargen ikke varierer.

applikasjoner

Denne teknikken brukes av kliniske laboratorier for å farge perifert blod og beinmargsutstryk, vevsseksjoner og cytologier.

På det hematologiske feltet er denne teknikken av vital betydning i studiet av avvik fra celler når det gjelder form, størrelse og antall. Det er et veldig verdifullt verktøy for diagnostisering av visse sykdommer, for eksempel leukemier og anemier.

I tillegg er det av enestående nytteverdi når man leter etter parasitter i de hematologiske (Plasmodium sp og Trypanosoma cruzi) eller histologiske (Leishmanias sp) områdene.

Vaginal cytologi

Når det gjelder vaginal cytologi, er denne teknikken spesielt fordelaktig for observasjonen av Trichomonas vaginalis. Dette er et viktig funn, siden dets tilstedeværelse simulerer karsinom på bilder som senere forsvinner når parasitten elimineres.

Sædprøve

Det har vært et ideelt verktøy for å studere sædprøver, siden det gir verdifull informasjon om sædkvaliteten.

Dataene den tilbyr har hovedsakelig å gjøre med antall og morfologi, så vel som med de ledsagende celler som kan være til stede og som er av vital betydning, for eksempel kimceller, leukocytter og epitelceller.

Med denne analysen er det mulig å beskrive abnormiteter som er observert i sædcellene i hodet, nakken, midtstykket og hovedstykket.

I tillegg kan de også bidra til å vise tilfeller av hemospermia (tilstedeværelse av røde blodlegemer i sæd) og leukospermi eller piospermia (økt antall leukocytter i sæd).

referanser

1. Costamagna S, Prado M. Validering av den ferske testen, May Grünwald-Giemsa og Gram-flekker og kulturmedier for diagnose av Trichomonas vaginalis. Parasitol. 2001; 25 (1-2): 60-64. Tilgjengelig i: scielo.
2. Merck KGaA Laboratory. Mai Grünwald eosin metylenblått for mikroskopi.
3. "May-Grünwald-Giemsa flekken." Wikipedia, The Free Encyclopedia. 15 nov 2018, 14:37 UTC. 8. januar 2019, 04:29: no.wikipedia.org
4. Glasskjemikalier Panreac Laboratory. Reagenser for histologiske teknikker, hematologi og mikrobiologi. Tilgjengelig på: glasschemicals.com
5. Retamales E, Manzo V. Anbefaling for flekker av blodutstryking for å lese hemogrammet. National and Reference Biomedical Laboratory. Institute of Public Health of Chile.
6. Sarabia L. Spermiogram i henhold til WHO-kriteriene. Utviklingsanatomi og biologi. School of Medicine. University of Chile. Tilgjengelig på: pp.centramerica.com