BAIRD PARKER AGAR: FOUNDATION, KLARGJØRING OG BRUK - BIOLOGI - 2026

Den agar Baird Parker er et fast medium selektivt og differensielt kultur. Det ble opprettet i 1962 for påvisning og telling av koagulasepositive stafylokokker (Staphylococcus aureus).

Det består av bukspyttkjertelhydrolysat av kasein, kjøttekstrakt, gjærekstrakt, litiumklorid, glycin, natriumpyruvat, kalium Telluritt, agar og eggeplomme-emulsjon.

Typiske Staphylococcus aureus-kolonier på Baird Parker agar. Kilde: Daizy John

Baird Parker Agar er basert på S. aureus evne til å redusere telluritt og produsere lecitinase. Begge egenskapene genererer en koloni med spesifikke egenskaper for denne arten. Derfor er det svært effektivt å oppdage denne mikroorganismen.

De typiske koloniene til S. aureus er svarte eller mørkegrå, med en fargeløs kant og en lys glorie som omgir dem, og skiller dem fra andre mikroorganismer. Dette patogenet finnes i kliniske prøver, farvann, kosmetikk og rå eller tilberedt mat.

Diagnosen eller deteksjonen er av største betydning på grunn av de mange patologiene den gir, for eksempel matforgiftning, skoldet hudsyndrom, giftig sjokksyndrom, abscesser, hjernehinnebetennelse, septikemi, endokarditt, blant andre.

Basis

Nærende kraft

Pankreashydrolysat av kasein, kjøttekstrakt og gjærekstrakt er kildene til næringsstoffer, vitaminer og mineraler som er nødvendige for generell mikrobiell utvikling, mens pyruvat og glycin er forbindelser som favoriserer den spesifikke veksten av Staphylococcus aureus.

selektiv

Baird Parker Agar er selektiv fordi den inneholder stoffer som hemmer veksten av den medfølgende floraen, samtidig som den fremmer utviklingen av S. aureus. Inhiberende forbindelser er litiumklorid og kalium-telluritt.

Differensial

Dette mediet gjør det mulig å skille S. aureus fra resten av de koagulase-negative Staphylococci. S. aureus har muligheten til å redusere telluritt til fritt metallisk svart tellur, og danner svarte eller mørkegrå kolonier.

På samme måte tilveiebringer eggeplommen underlagene for å demonstrere tilstedeværelsen av enzymet lecitinase og lipase. S. aureus er lecitinase-positiv, og derfor vil en tydelig glorie observeres rundt kolonien, noe som indikerer at lecithin ble hydrolysert.

I denne forstand indikerer utseendet på denne agaren av blanke svarte eller mørkegrå kolonier med en lys glorie rundt seg tilstedeværelsen av S. aureus.

Hvis det dannes en nedbørssone, er det indikasjon på lipaseaktivitet. Noen stammer av S. aureus er lipasepositive og andre negative.

I tilfelle S. aureus er lipasepositiv, vil et ugjennomsiktig område bli observert rundt den svarte eller mørkegrå kolonien, etterfulgt av en lys glorie på grunn av virkningen av lecitinase.

Kolonier av andre bakterier enn S. aureus som er i stand til å vokse på dette mediet, vil utvikle fargeløse eller brune kolonier uten omkringliggende glorie.

Atypiske svarte kolonier kan også sees med eller uten en fargeløs kant, men uten en lett glorie. Disse koloniene skal ikke tas med i betraktningen, de tilsvarer ikke S. aureus.

Forberedelse

Eggeplommeemulsjon

Ta et friskt kyllingegg, vask det godt og legg det i 70% alkohol i 2 til 3 timer. Egget åpnes deretter aseptisk og det hvite skilles forsiktig fra eggeplommen. Etterpå tas 50 ml av eggeplommen og blandes med 50 ml steril fysiologisk løsning.

Kalium telluritt 1% vekt / volum

Noen kommersielle hus selger 1% kalium Tellurite klar til bruk. Det tilsettes mediet før mediet stivner.

For å fremstille denne løsningen på laboratoriet veies 1,0 g kalium-telluritt og løses opp i en del vann. Deretter fullføres vannmengden til den når 100 ml. Løsningen må steriliseres ved filtreringsmetode.

Utarbeidelse av kulturmedium

Vei ut 60 g av det dehydrerte mediet og oppløs i 940 ml destillert vann. La blandingen sitte i omtrent 5-10 minutter.

Tilfør varme ved å røre mediet ofte for å forbedre oppløsningsprosessen. Kok opp et minutt. Steriliser i autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter.

La stå til den når en temperatur på 45 ° C og tilsett 50 ml av eggeplommeemulsjonen og 10 ml 1% telluritt. Bland godt og hell 15-20 ml på sterile petriskåler.

La stivne, bestill omvendt i plakater og oppbevar i kjøleskap til bruk.

Den endelige pH-verdien til det tilberedte mediet må være 6,8 ± 0,2.

Før du så en prøve, vent til platen når romtemperatur. Se platene ved å stri eller ved å se på overflaten med en Drigalski-slikkepott.

Fargen på det dehydrerte mediet er lysbrun og fargen på det tilberedte mediet er lys rav.

Bruk

Kliniske prøver

De kliniske prøvene blir sådd direkte, og en del av materialet blir tappet ut i den ene enden av platen, og derfra blir det stripet av utmattelse. Inkuber i 24 til 48 timer ved 35-37 ° C.

Matprøver

Vei 10 g av matprøven og homogeniser i 90 ml 0,1% peptonvann, derfra tilberedes fortynninger om nødvendig. Inokuler platene i tredobling med 0,3 ml av de tilberedte løsningene, og så på overflaten med en Drigalski-slikkepott. Inkuber i 24 til 48 timer ved 35-37 ° C.

Denne metodikken gjør det mulig å telle de oppnådde typiske koloniene og er ideell når det er mistanke om nærvær av S. aureus over 10 CFU per g / ml prøve.

Hvis mengden S. aureus mistenkes å være liten eller det er mye medfølgende flora, foreslås det å berike prøven i trypticase soyabuljong med 10% NaCl og 1% natriumpyruvat. Dette vil fremme veksten av S. aureus og hemme utviklingen av den medfølgende floraen. Grumsete rør blir sådd på Baird Parker agar.

Vannprøver

I et sterilisert vakuumfiltreringssystem filtreres 100 ml studievann, og deretter fjernes den 0,4 mikron mikroporøse membranen med en steril tang og plasseres på en Baird Parker-plate. Inkuber i 24 til 48 timer ved 35-37 ° C. Denne teknikken gjør det mulig å telle typiske S. aureus-kolonier.

QA

Kjente stammer som Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 eller Proteus mirabilis ATCC 43071 kan brukes til å evaluere kvaliteten på Baird Parker agar.

Når det gjelder S. aureus ATCC-stammer, er det kjent å redusere telluritt, og de er lipase- og lecitinase-positive. Derfor må det være en tilfredsstillende utvikling og vokse konvekse kolonier med svart senter og fargeløs kant, med en ugjennomsiktig glorie og en lett ytterste glorie.

På sin side forventes S. epidermidis å utvikle seg dårlig på dette mediet, med brungrå til svarte kolonier, uten en lett glorie.

For E. coli og P. mirabilis forventes den å bli fullstendig eller delvis hemmet. Ved vekst vil brune kolonier utvikle seg uten et ugjennomsiktig område eller en lett glorie.

anbefalinger

-Mediet skal ikke varmes opp etter at telluritten og eggeplommen er tilsatt.

-Preparasjonen av eggeplommeemulsjonen og dens tilsetning i midten er et veldig sårbart trinn for forurensning. Ekstrem forsiktighet må tas.

-Hvis det er tilstedeværelse av typiske kolonier av S. aureus, bør det bekreftes ved å montere en koagulasetest på nevnte stamme.

-Hvis det er tvilsomme resultater med koagulase, bør andre bekreftende tester monteres.

-Vær forsiktig så du ikke forveksler tilstedeværelsen av typiske S. aureus-kolonier med atypiske svarte kolonier.

referanser

1. Wikipedia-bidragsytere. Baird-Parker agar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 15. mars 2017, 19:36 UTC. Tilgjengelig på: wikipedia.org/ Tilgang 18. februar 2019.
2. BD Laboratories. Baird Parker Agar. 2006. Tilgjengelig på: bd.com
3. Britannia Laboratories. Baird Parker agar base. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
4. Francisco Soria Melguizo Laboratories. 2009. Baird Parker Agar. Tilgjengelig på: http://f-soria.es/Inform
5. Britannia Laboratories. Kalium-telluritt. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Transport av enterotoksigene Staphylococcus aureus type A, i nasopharyngeal utstryking i mathåndterere. Rev Med Chile 2017; 145: 1559-1564
7. Venezuelansk Standard Covenin 1292-89. (1989). Matvarer. Isolasjon og oppregning av Staphylococcus aureus. Tilgjengelig på: sencamer.gob.ve