BHI AGAR: FUNDAMENT, FORBEREDELSE OG BRUK - BIOLOGI - 2026

Den BHI agar eller Brain Heart Infusion agar-medium er et nærings fast kultur. På spansk omtaler vi det som hjerneinfusjonsagar. Det er et ikke-selektivt kulturmedium, noe som betyr at alle typer Gram-positive og Gram-negative bakterier kan utvikle seg, samt noen gjær- og filamentøse sopp.

Det er sammensatt av en infusjon av legghjerne og hjerte, peptisk hydrolysat av dyrevev, pankreashydrolysat av kasein, natriumklorid, glukose, dinatriumfosfat og agar.

BHI-plater. Kilde: Foto tatt av forfatteren MSc. Marielsa Gil.

Det skal bemerkes at BHI-agar er et av de mest brukte kulturmediene i bakteriologilaboratorier. Det kan brukes uten kosttilskudd som primærkultur, subkultur av kolonier oppnådd på andre selektive medier eller for vedlikehold av stammer på laboratoriet.

På den annen side er det et ideelt medium som skal brukes som base i fremstillingen av anriket medium, for eksempel blodagar og sjokoladeagar. Begge er ideelle for å isolere krevende mikroorganismer fra ernæringsmessig synspunkt. Det skal imidlertid bemerkes at ettersom det inneholder glukose, er det ikke egnet til å observere hemolysemønstre.

På samme måte kan BHI-agar brukes til fremstilling av spesielle medier for isolering av vanskelige å dyrke patogene mikroorganismer i vanlige medier, blant dem: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae og Histoplasma capsulatum.

Med det antibiotiske tilsetningsstoffet blir BHI-agar et selektivt medium for isolering av sopp.

Basis

Det er et næringsrikt kulturmedium for å isolere moderat krevende mikroorganismer, og berikelsen av det kan økes med tilsetning av blod og andre kosttilskudd.

Det er et ikke-selektivt kulturmedium, derfor tillater det vekst av de fleste Gram-positive og Gram-negative bakterier, samt noen sopp. Imidlertid kan det gjøres selektivt med tilsetning av antibiotika.

Mediet inneholder infusjon av legg hjerne og hjerte, peptisk hydrolysat av dyrevev og bukspyttkjertelhydrolysat av kasein; Alle disse forbindelsene fungerer som kilder til vitaminer, aminosyrer, nitrogen og karbon.

Glukose er et karbohydrat som gir energi til mikroorganismer når de har fermentert det. I mellomtiden opprettholder natriumklorid og dinatriumfosfat osmotisk balanse og gir en pH nær nøytralitet. Til slutt gir agaren den middels faste konsistensen.

Forberedelse

Vei 52 gram av det dehydrerte mediet og oppløst i en liter destillert vann. Ta blandingen til en varmekilde til den koker, og rør ofte under oppløsningsprosessen.

BHI-agarplater eller kiler kan tilberedes uten tilsetningsstoffer.

kiler

Til klargjøring av kiler, server du preparatet til halvparten av hvert rør er fylt, dekker og steriliserer i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter, når du forlater det, legg på en base til de stivner. Oppbevar senere i kjøleskapet til bruk.

BHI-kiler for bakterioteca. Kilde: Foto tatt av forfatteren MSc. Marielsa Gil.

plater

Den oppløste blandingen autoklaveres ved 121 ° C i 15 minutter, etter at den lar den avkjøles til 50 ° C, og 20 ml av mediet serveres i sterile petriskåler. De får stivne, vendes og oppbevares i kjøleskapet til bruk. La platene komme til romtemperatur før såing.

PH i mediet må være på 7,4 ± 0,2.

Det rå mediet er beige i fargen og det tilberedte mediet er lys ravfarget.

Forberedelse av blodagar

Etter sterilisering av mediet, avkjøl til en temperatur på omtrent 45 til 50 ° C, tilsett deretter blodet (50 ml), bland forsiktig til homogenisering og server aseptisk 20 ml i hver petriskål. Hvis det dannes bobler på platen, bør den lettere flammen føres raskt over boblene for å eliminere dem.

På samme måte kan spesielle medier fremstilles ved å tilsette de tilsvarende tilsetningsstoffer når blandingen når en temperatur på 45 til 50 ° C.

Mediumet forblir kirsebærrødt.

applikasjoner

Bruk uten kosttilskudd

BHI-agaren uten tilsetningsstoffer er nyttig som en primærkultur og for såing av rene stammer av lite eller middels krevende mikroorganismer for deres etterfølgende identifikasjon.

Ettersom det er et lysfarget medium, er det ideelt for å observere pigmenter, og siden det ikke inneholder forstyrrende stoffer, kan noen biokjemiske tester, som oksydase og katalase, utføres på det, eller andre biokjemiske tester kan monteres fra kolonier fra dette agar.

På samme måte blir BHI-agarkiler mye brukt til å opprettholde stammer i en viss tid på laboratoriet (bakterioteca).

Plater eller kiler som er kimet av overflaten med bakteriestammer, inkuberes ved 37 ° C i 24 til 48 timer. I mellomtiden vil temperatur og inkubasjonstid i sopp avhenge av typen sopp som blir søkt.

Som basisagar for utarbeidelse av andre medier

Med denne basen kan berike og selektive medier tilberedes.

beriket

Dets viktigste funksjon er å tjene som grunnlag for forberedelse av blodagar for rutinemessig bruk i mikrobiologiske laboratorier. Spesielt er BHI-basen som bidrar til isolering av Streptococcus sp. Imidlertid har det ulempen å ikke være egnet til å observere hemolysemønstre fordi den inneholder glukose.

Det brukes også til fremstilling av kanin- eller hesteblodagar for isolering av Haemophilus sp. For best resultat kan et anrikningstilskudd (IsoVitaleX) legges til.

Hvis prøvene kommer fra luftveiene, kan bacitracin tilsettes agaren for å hemme den medfølgende floraen og øke sannsynligheten for utvinning av Haemophilus sp.

Alternativt kan blodagar (lam eller menneske) med cystint Telluritt tilberedes for å isolere Corynebacterium diphtheriae. På samme måte er det nyttig å tilberede kaninblodagar, med tilsetning av cystin og glukose for isolering av Francisella tularensis.

Såingen av blodagarplatene utføres ved utmattelse og de inkuberes ved 35-37 ° C i 24-48 timer i mikroaerofilisitet (5-10% CO ₂ ).

selektiv

Dette mediet med tilsetning av antibiotika kan erstatte Sabouraud agar for isolering av sopp.

Kombinasjonen av BHI-agar med kloramfenikol - gentamicin eller penicillin -, streptomycin og hesteblod er ideell for isolering av Histoplasma capsulatum.

Avhengig av mikroorganismen som skal isoleres, anbefales inkubering ved 35-37 ° C eller ved romtemperatur ved aerobiose. Noen ganger er inkubasjon nødvendig i begge temperaturområder, ved bruk av 2 plater for dette.

Noen sopp som Trichophyton mentagrophytes må inkuberes ved romtemperatur i opptil 7 dager.

QA

Fra hver forberedt batch anbefales det å inkubere en plate eller kile ved 37 ° C i 24 timer og kontrollere at det ikke er noen vekst; Det er spesielt viktig når du tilbereder blodagar, fordi det er et lett forurenset medium.

På den annen side kan kvaliteten på mediet evalueres ved å inokulere kjente eller sertifiserte standardstammer og observere deres utvikling.

For å evaluere BHI-agar uten tilsetningsstoffer, kan stammer av Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 eller Candida albicans ATCC 10231 brukes i 24 til 48 timer. I alle tilfeller forventes det en tilfredsstillende vekst.

Stammer av Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 eller Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 kan sås for å evaluere blodagarplater.

Bakteriestammene inkuberes ved 37 ° C i mikroaerofilisitet i 24 timer, mens soppen inkuberes ved romtemperatur i et fuktig kammer i opptil 7 dager. Det forventes tilfredsstillende vekst i alle tilfeller.

referanser

1. Britannia Laboratories. Brain Heart Infusion Agar. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com.
2. BD Laboratories. Brain Heart Infusion (BHI) Agar. 2013. Tilgjengelig på: bd.com.
3. Laboratorios Difco Francisco Soria Melguizo, SA Brain Heart Infusion Agar. 2009.
4. Neogen Laboratory. Brain Heart Infusion Agar. Tilgjengelig på: foodsafety.neogen.com
5. Gil M. Blodagar: fundament, bruk og forberedelse. 2018. Tilgjengelig på: lifeder.com.
6. Wikipedia-bidragsytere. Hjerneinfusjon. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 19. september 2018, 03:58 UTC. Tilgjengelig på: wikipedia.org. Åpnet 2. mars 2019.
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 utg. Redaksjonell Panamericana SA Argentina.