Den agar BIGGY er et fast medium selektivt og differensielt kultur. Den ble designet for å isolere og hjelpe til med identifisering av de viktigste Candida-artene. Navnet BIGGY kommer fra forkortelsen på engelsk Bismuth Glucose Glycine Yeast.
Den opprinnelige formelen ble opprettet av Nickerson, og det er grunnen til at dette mediet også kalles Nickerson agar. For øyeblikket er det sammensatt av gjærekstrakt, glycin, dekstrose, ammoniumcitrat, vismutcitrat, natriumsulfitt og agar.
Grafisk fremstilling av BIGGY-agar. Kilde: Flickr.com
BIGGY-agar er formulert for differensiering av artene Complex C. albicans, C. tropis, C. krusei og C. kefyr, men andre arter vokser også som Candida glabrata, C. parapsilosis, C. guilliermondii, Trichosporun sp, Geotrichum candidum og Saccharomyces cerevisiae.
Den har god følsomhet og spesifisitet, men sammenlignet med andre medier med en lignende funksjon, er den på andreplass og blir overgått av CHROMagar. Av denne grunn foretrekker mange laboratorier sistnevnte, selv om det er mye dyrere.
Det skal være klart at bruk av BIGGY-agar, så vel som andre lignende midler, hjelper en rask presumptiv identifisering, men aldri bekreftende. Derfor må ytterligere identifikasjonsmetoder være tilgjengelige; for eksempel Vitek 32 og API 20 identifikasjonssystemer.
Basis
BiGGY-agar regnes som et delvis selektivt medium for isolering av gjær, spesielt av slekten Candida, selv om andre slekt kan vokse.
Det er også et differensialmedium, avhengig av hvilken art som er involvert, vil forskjellige egenskaper bli observert når det gjelder utseende, farge, form og størrelse. Det regnes som et kromogent medium, på grunn av utviklingen av forskjellige farger i koloniene.
Fargen på gjærkoloniene skyldes tilstedeværelsen av vismutsulfitt i agaren. Nickerson innså at gjær av slekten Candida utfører en ekstracellulær reduksjon av vismutsulfitt, og omdanner den til vismutsulfid (et uoppløselig svart stoff). Dette resulterer i lysebrune til svarte kolonier.
Denne agaren inneholder gjærekstrakt og dekstrose, som gir kilden til basiske næringsstoffer og energi for utvikling av gjær. Glycin er et gjærvekststimulerende middel, mens det hemmer veksten av visse bakterier.
I samme forstand fungerer ammonium og vismutcitrat, så vel som natriumsulfitt, som hemmere for bakterievekst. Agar er midlet som gir middels solid konsistens.
Forberedelse
Vei ut 45 g av det dehydrerte kulturmediet og oppløst i en liter destillert vann. Rist og varm blandingen, kokende i 1 minutt til fullstendig oppløsning. Dette kulturmediet er ikke autoklaverbart.
Hell av 20 ml på sterile petriskåler ved avkjøling til ca. 45 ° C i vannbad.
Fargen på det dehydratiserte mediet er gulaktig grått og det fremstilte mediet er en gulaktig hvit gel, der et svakt flokkulerende bunnfall kan observeres.
PH-verdien bør være 6,8 ± 0,2.
Det tilberedte mediet skal oppbevares i kjøleskap (4 ° C) og beskyttes mot lys. Siden det er et medium som ikke kan autoklaveres, bør det brukes så snart som mulig. Bruken anbefales før 3 dager etter tilberedningen.
Bruk
Platene inkuberes ved romtemperatur (25 ° C) i 24, 48 og 72 timer, og inkubasjonstiden kan forlenges opp til 5 dager.
Hver art av Candida utvikler visse egenskaper som gjør at de skiller hverandre fra hverandre. Produsentene av mediet beskriver følgende egenskaper for hver art:
-Candida albicans-kompleks: utvikler seg på denne agar som glatte, runde, brune eller svarte kolonier, med en liten mycelial grense. Med unntak av at den mørke fargen ikke diffunderer til midten.
-Candida tropis: lyse, små, mørkebrune kolonier med et svart senter og en svak mycelial grense. Den mørke fargen diffunderer mot midten, et kjennetegn som er typisk for denne arten, etter å ha blitt inkubert i 72 timer.
-Candida krusei utvikler store, flate, grove utseende kolonier med en brun til svartaktig grense.
-Candida parakrusei: mellomstore kolonier, mesteparten av tiden grov, flat. Fargen kan variere fra lys mørk rødbrun til lys rødbrun. Kolonienes grense har omfattende, gulaktig mycel.
-Candida stellatoidea: utvikler medium, flate kolonier, mørkebrun, nesten svart. Mycelial utvikling er veldig knapp.
En studie utført av Yücesoy og Marol i 2003, viste at CHROMagar-medium har bedre følsomhet og spesifisitet for differensiering og identifisering av forskjellige Candida-arter enn BIGGY-agar.
QA
For sterilitetskontroll inkuberes uinokulerte plater ved 25 ° C, i mørket i 24 til 48 timer, forventes det at det ikke er noen vekst av noe slag eller fargeendring.
ATCC-stammene som anbefales for kvalitetskontroll av mediet er:
Candida albicans ATCC 60193 kompleks, Candida glabrata ATCC 2001, Candida krusei ATCC 34135. I alle av disse forventes vekst som beskrevet ovenfor.
Følgende stammer kan også brukes:
Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 og Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. I de to første forventes total hemming, men i tilfelle delvis voksende kolonier vil være kremfarget.
Når det gjelder S. aureus, forventes det å bli fullstendig hemmet, men hvis den vokser delvis, er koloniene hvite.
begrensninger
Noen bakterier kan vokse i dette mediet og kan til og med bli mørke i fargen ved å simulere en Candida-koloni, men når du smører kolonien og observerer den under et mikroskop, blir den lett forkastet.
Tabell: Kjennetegn på koloniene til noen gjær på BIGGY-agar i henhold til arbeidet til Yücesoy M og Marol S.
Kilde: Yücesoy M, Marol S. Ytelse av CHROMAGAR candida og BIGGY agar for identifisering av gjærarter. Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2003; 2 (8): 1-7
referanser
- Yücesoy M, Marol S. Ytelse av CHROMAGAR candida og BIGGY agar for identifisering av gjærarter. Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2003; 2 (8): 1-7.
- MCD LAB. Teknisk datablad BIGGY Agar. Tilgjengelig på: mcdlab.net/
- Lab Neogen. BIGGY Agar. Tilgjengelig på: foodsafety.neogen.com
- Conda Pronadisa Laboratories. STORT agar. Tilgjengelig på: condalab.com
- BD Laboratories. BD BiGGY Agar (Bismuth Glucose Glycine Yeast Agar). 2011. Tilgjengelig på: bd.com