BILE ESCULIN AGAR: BEGRUNNELSE, TILBEREDNING OG BRUK - BIOLOGI - 2026

Den galle eskulin agar er et selektivt og differensielt medium fast kultur. Den brukes som en diagnostisk test for å bestemme evnen til en viss mikroorganisme å vokse i et medium som inneholder galle og også for å bryte ned glukosid-esculin til esculetin og glukose.

Denne diagnostiske testen brukes til å skille arter av slekten Streptococcus som tilhører gruppe D (galle esculin positive), fra andre grupper av Streptococcus som reagerer negativt på denne testen.

Galle-esculin-agarplate, frøet med en Enterococcus-stamme (test positiv). Kilde: Ingen maskinlesbar forfatter gitt. Philippinjl antok (basert på opphavsrettskrav).

Det skal bemerkes at noen Streptococcus fra viridans-gruppen kan hydrolysere esculin, men ikke er i stand til å vokse i nærvær av galle i en konsentrasjon på 40%, derfor er reaksjonen for denne gruppen negativ i dette mediet.

På den annen side er galle-esculinmediet også nyttig for diagnostisering av Listeria monocytogenes eller Aerococcus sp-arter, siden disse mikroorganismer er galle-esculin-positive.

Esculin Bile Agar består av pepton, kjøttekstrakt, oksegalle, esculin, jerncitrat, agar og destillert vann. Noen kommersielle hus inkluderer natriumazid i sammensetningen av mediet.

Mediet kan fremstilles på laboratoriet hvis du har alle forbindelsene hver for seg, eller det kan fremstilles fra det kommersielle dehydratiserte mediet.

Basis

Esculin med galle inneholder peptoner og kjøttekstrakt, begge forbindelser gir de nødvendige næringsstoffene for vekst av mikroorganismer.

Den inneholder også esculin; Denne forbindelsen er et glykosid dannet ved forening av et enkelt monosakkarid (glukose) med en forbindelse som kalles 6,7-dihydroxycoumarin eller esculetin (aglucone), bundet av en acetal eller glukosidisk binding.

Testen er basert på å vise om bakteriene er i stand til å hydrolysere esculin. Hvis dette skjer, brytes esculin ned i esculetin og glukose. Esculetina reagerer med jernet som er tilstede i mediet, og danner en mørkebrun, nesten svart forbindelse.

Dette betyr at jernholdig citrat fungerer som en reaksjonsutvikler. Denne egenskapen gjør Bile Esculin Agar til et differensialmedium.

For sin del er galle en hemmer som forhindrer vekst av noen mikroorganismer, derfor må bakterien, før splitting av esculin, kunne vokse i nærvær av galle. Derfor regnes dette mediet som selektivt.

Bakteriene som kan utvikle seg i dette miljøet er hovedsakelig de som lever i tarmmiljøet.

I denne forstand tilfører noen kommersielle selskaper natriumazid til mediet for ytterligere å hemme veksten av enteriske Gram-negative baciller, noe som øker selektiviteten til mediet for vekst av Streptococcus.

Til slutt gir agaren den faste konsistensen til mediet, og vann er løsningsmidlet til forbindelsene.

Forberedelse

Hjemmelaget tilberedning av galle esculin agar

Å veie:

5 g peptoner

3 g kjøttekstrakt

40 g storfekjøtt

1 g esculin

0,5 g jerncitrat

15 g agar

1000 ml destillert vann

Ved tilsetning av natriumazid veies 0,25 g / liter og tilsettes blandingen.

Løs opp komponentene i liter destillert vann, varm til forbindelsene er helt oppløst. Fordel 5 ml i 16 x 125 mm testrør. Autoklav ved 121 ° C, 15 pund trykk i 15 minutter.

Fjern fra autoklaven og vipp rørene på en støtte, slik at agaren stivner i et bredt fløytebeb.

Oppbevares i kjøleskap til bruk. Ta den til romtemperatur før såing.

Galle-esculin-agarplater kan også fremstilles; i dette tilfellet autoklaveres hele blandingen i en kolbe og fordeles deretter i sterile petriskåler. La dem stivne og oppbevare i kjøleskapet.

PH i mediet må være 6,6 ± 0,2.

Fremstilling av galleesculinagar fra et kommersielt medium

Vei mengden som er angitt av innsatsen. Dette kan variere fra et forretningshus til et annet. Følg deretter den samme fremgangsmåten som er beskrevet ovenfor.

PH i mediet bør være 6,6 ± 0,2. Fargen på det dehydrerte mediet er lys beige og det tilberedte mediet er mørkt rav.

Kommersiell galde-esculin-medium. Kilde: Foto tatt av forfatteren MSc. Marielsa Gil.

applikasjoner

Galle-esculin-mediet brukes hovedsakelig for å skille gruppe D Streptococcus (galde-esculin-positiv), fra resten av Streptococcus-gruppene (galde-esculin-negativ).

Ved å kombinere den hypersaltede buljongveksttesten med galle-esculin-testen kan man identifisere en spesiell gruppe av gruppe D Streptococcus kalt Enterococcus.

Denne spesielle gruppen Streptococcus tilhører gruppe D av den nevnte slekten, og de er i stand til å hydrolysere esculin i nærvær av galle som resten av medlemmene i gruppe D, men de er også i stand til å utvikle seg i et hypersaltert medium (BHI med klorid av 6,5% natrium), en egenskap som utgjør forskjellen.

Derfor kalles streptokokker som hydrolyserer esculin galle, men ikke vokser i hypersalt buljong, ikke-enterokokker gruppe D streptokokker.

sådd

Inokuler mediet fortrinnsvis fra en ren Todd-Hewitt 24 timers buljong.

Tilsett 2 dråper til overflaten av mediet med en Pasteur-pipette og spred i mediet med en platinusløyfe.

Inkuber ved 35 ° C i 48 timer, mens inkubasjonstiden er oppfylt, kan den overvåkes for å se om det er en positiv reaksjon. Hvis reaksjonen på slutten av tiden forblir negativ, kan den inkuberes i opptil 72 timer.

Tolkning

Positiv reaksjon : utseende av en mørkebrun, nesten svart farge i fløytebinet (i tilfelle av rørprøven) eller sverting av agaren rundt koloniene (i tilfelle platetesten).

Negativ reaksjon : ingen svertning av mediet forekommer, eller det er svart utseende i mindre enn halvparten av røret etter 72 timers inkubasjon. På den annen side bør bakterievekst i mediet uten utseendet til den svarte fargen betraktes som en negativ test.

QA

For å evaluere kvaliteten på mediet må en Enterococcus faecalis ATCC 29212-stamme være tilgjengelig som en positiv kontroll og en Streptococcus-stamme som ikke tilhører gruppe D som en negativ kontroll.

begrensninger

-Media som ikke inneholder natriumazid tillater vekst av enteriske Gram-negative baciller. Noen av dem kan sverte midten.

- Noen kommersielle hus legger til lav konsentrasjon av galle (10%), og av denne grunn kan noen Streptococcus som ikke tilhører gruppe D utvikle seg i mediet og hydrolysere esculin, noe som kan generere feil i tolkningen.

referanser

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. utg. Redaksjonell Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 utg. Redaksjonell Panamericana SA Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Biokjemiske tester for identifisering av bakterier av klinisk betydning. 3. utg. Redaksjonell Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
4. Lab. Britannia. Esculin galle med azidagar. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
5. "Bile Esculin Agar." Wikipedia, The Free Encyclopedia. 22 aug 2017, 17:30 UTC. 22. april 2019, 17:35. es.wikipedia.org.
6. Laboratorios Bd. Bile Esculin Agar Slants. 2015. Tilgjengelig på: bd.com
7. Neogen Laboratories. Galle esculin agar. Tilgjengelig på: foodsafety.neogen.com