Den cetrimid agar eller cetrimid er et selektivt fast kulturmedium beregnet for isolering av Pseudomonas aeruginosa. Den er basert på å vise produksjonen av karakteristiske pigmenter av denne arten og ble laget av modifiseringen av Tech agar, opprettet av King, Ward og Raney.
Den opprinnelige formelen inneholdt salter av magnesiumklorid, kaliumsulfat, fordøyelse i bukspyttkjertelen av gelatin og agar-agar. Modifiseringen av formelen besto av tilsetning av cetrimid (cetyltrimetylammoniumbromid) og glyserol.
Cetrimide agar frøet med Pseudomonas aeruginosa Kilde: BiotechMichael, fra Wikimedia Commons
Cetrimide agar er nyttig for den mikrobiologiske undersøkelsen av prøver der det er mistanke om tilstedeværelse av Pseudomonas aeruginosa. Det skal bemerkes at denne bakterien er ekstremt viktig, fordi selv om den er en del av den normale miljømikrobiotaen, oppfører den seg ofte som et opportunistisk patogen.
Av denne grunn er et av de vanligste problemene forårsaket av denne bakterien nosokomiale infeksjoner, det vil si de som oppstår i sykehusmiljøet, og angriper pasienter som har et deprimert immunsystem.
På den annen side, på grunn av affiniteten som denne mikroorganismen har med fuktighet, er de mest sårbare forurensningsmålene: assistert pusteutstyr, medisiner, forstøver, vannkilder, klimaanlegg, desinfeksjonsmidler, såpeløsninger, injiserbare løsninger, åpne sår , katetre, urinrør, blant andre.
I denne forstand er cetrimidagar nyttig for å utføre mikrobiologiske kontroller og kulturer til de tidligere nevnte elementene.
Basis
Cetrimid-agar er basert på mediets evne til å fremme veksten av P. aeruginosa, stimulere produksjonen av dets pigmenter og i sin tur hemme veksten av andre mikroorganismer.
Disse egenskapene skyldes funksjonen til hver av komponentene. Den tilstedeværende gelatinpeptonet fungerer som en kilde til nitrogen, vitaminer og mineraler. Glyserol eller glyserin fungerer som en karbonkilde.
For sin del er cetrimid (cetyltrimetylammoniumbromid) stoffet som hemmer veksten av andre bakterier enn P. aeruginosa, inkludert andre arter som tilhører samme slekt.
Hemming skjer fordi cetramid fungerer som et kationisk vaskemiddel, og klarer å destabilisere plasmamembranen til de fleste bakterier, bortsett fra P. aeruginosa og noen andre som klarer å overleve.
På den annen side inneholder den magnesiumklorid og kaliumsulfat. Disse forbindelsene stimulerer fenotypisk uttrykk relatert til evnen til Pseudomonas aeruginosa til å produsere forskjellige pigmenter, inkludert: pyocyanin, pyoverdin, pyorrubin, pyomelanin og fluorescein. Til slutt inneholder den agar-agar, noe som gir den en solid konsistens.
Tolkning
Tolkningen av veksten oppnådd i denne agaren utføres som følger:
Observasjonen av runde, glatte kolonier med vanlige kanter, med produksjon av blågrønnaktig, grønn, brun eller rødlig pigment, pluss utslipp av fruktig lukt (aminoacetofenon), er et antagelig resultat av tilstedeværelsen av denne bakterien i nevnte prøve.
På den annen side er observasjonen av et lyst grønngult pigment på koloniene et tegn på P. aeruginosa når platen blir utsatt for ultrafiolett lys.
Fluorescens av P. aeruginosa-kolonier på cetrimidagar under ultrafiolett lys.
Det skal bemerkes at hver observerte farge skyldes produksjonen av et spesifikt pigment. Det blågrønne pigmentet tilsvarer produksjonen av pyocyanin, det grønne til pyoverdin, det rødlig til pyorubin, det brune til pyomelanin og den lyse gulgrønne fluorescensen under UV-lys til fluorescein.
Forberedelse
Vei ut 43 g av det dehydrerte mediet og løst opp i destillert vann. Tilsett 10 ml glyserol. Ta blandingen til en varmekilde. La det koke noen minutter til fullstendig oppløsning.
Autoklaver ved 121 ° C i 15 minutter. La stå og server i sterile petriskåler når temperaturen er rundt 50 ° C.
La stivne, vende, bestille i plaqueros og oppbevare i kjøleskap til bruk. Cetrimide agarplater skal tas ut av kjøleskapet på forhånd til såing og la dem komme i romtemperatur.
Den endelige pH for mediet skal være 7,2 ± 0,2.
Fargen på det dehydrerte mediet er beige og preparatet er ugjennomsiktig hvitt.
applikasjoner
Alle slags prøver der det er mistanke om tilstedeværelse av Pseudomonas aeruginosa, kan sås på cetrimidagar. Derfor er det nyttig på alle områder av mikrobiologi (miljø, industri, klinisk, vann og mat).
Det er av stor betydning å analysere sykehusmiljøer og dermed kunne iverksette korrigerende tiltak, siden denne mikroorganismen når pasienter gjennom forurenset utstyr, medisiner, løsninger og forsyninger som brukes av pasienten.
På denne måten kan mikroorganismen smitte nedre luftveier, urinveier og sår hos immunsupprimerte pasienter.
Kolonitelling av P. aeruginosa kan også gjøres i mikrobielle grensetester.
sådd
Cetrimide agar kan brukes som en primær kultur. Platen er inokulert på en av kantene og derfra distribueres den ved utmattelse til resten av platen. Flytende prøver kan overflatesåes med en drigalski-slikkepott.
Platene inkuberes aerobt ved 37 ° C i 24 timers inkubasjon.
begrensninger
-En liten prosentandel av Pseudomonas aeruginosas-stammer produserer ikke pyocyanin, så en falsk negativ kan tolkes.
-Noen Pseudomonas-arter av klinisk betydning hemmes i dette mediet.
- Uavhengig av karakteristikkene som er beskrevet for Pseudomonas aeruginosa, må de bekreftes med ytterligere identifikasjonstester. En test som ikke bør gå glipp av er oksidasetesten, den må gi positive.
-Noen Enterobacteriaceae kan vokse i dette mediet og utvikle et gult pigment, men det skiller seg fra Pseudomonas aeruginosa ved at når platen blir utsatt for ultrafiolett lys er det ingen fluorescens.
- Serratia marcescens klarer å utvikle og produserer et rosa pigment.
-Hvis platene podet med cetrimidagar blir utsatt for en tid ved romtemperatur, kan P. aeruginosa-stammene miste fluorescensen observert under ultrafiolett lys, men egenskapen gjenvinnes hvis de inkuberes igjen ved 37 ° C.
QA
For å analysere den gode ytelsen til cetrimidagar, kan kontrollstammer brukes, slik som: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 og Staphylococcus aureus ATCC 25923.
De forventede resultatene er:
- God vekst for P. aeruginosa, med blågrønt pigment og positivt fluorescein.
- S. maltophilia og S. aureus vil være delvis til fullstendig hemmet.
- Escherichia coli forventes å bli fullstendig hemmet.
referanser
- Callicó A, Cedré B, Sifontes S, Torres V, Pino Y, Callís A, Esnard S. Fenotypisk og serologisk karakterisering av kliniske isolater av Pseudomonas aeruginosa. VacciMonitor. 2004; 13 (3): 1-9.
- Conda Pronadisa Laboratories. Cetrimide agar base. 2014. Tilgjengelig på: condalab.com
- Britannia Laboratories. Cetrimide agar. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
- BD Laboratories. BD Pseudosel agar (Cetrimide agar). 2013. Tilgjengelig på: bd.com
- Francisco Soria Melguizo Laboratory, CA Cetrimide agar. 2009. Tilgjengelig på: http://f-soria.es