SJOKOLADEAGAR: BASIS, BRUK OG TILBEREDNING - BIOLOGI - 2026

Den sjokolade-agar er et fast kulturmedium anriket, ikke - selektive og ikke - differensial. Det brukes hovedsakelig til isolering av mikroorganismer som er krevende fra ernæringsmessig synspunkt, selv om alle typer bakterier kan vokse i det.

Av denne grunn øker nytten av det særlig ved såing av prøver som normalt er sterile, slik som CSF og leddvæske. Selv om det også er inkludert i det valgte middel for såing av polymikrobielle prøver, men i disse tilfellene er tilsetning av antibiotika som hemmer den samtidige floraen nødvendig.

Sjokoladeagar med bakterievekst

Dette mediet har en karakteristisk brun farge veldig lik sjokolade, derav navnet. Preparatet er veldig likt blodagar, bare i dette tilfellet må blodet varmes opp for at de røde blodlegemene skal bryte sammen.

Forberedelsen, som blodagar, er veldig delikat, siden den lett er forurenset. Av denne grunn foretrekker mange laboratorier å skaffe seg dette mediet som allerede er utarbeidet av kommersielle selskaper som garanterer dets kvalitet.

Basis

Dette mediet består av en næringsrik agarbase og oppvarmet blod. Hemolyse av røde blodlegemer gir faktor X (hemin) og faktor V (NAD), nødvendig for vekst av noen mikroorganismer, for eksempel slekten Haemophilus. Det er også veldig nyttig for isolering av Neisserias sp.

Som blodagar, kan forskjellige medier brukes som base-agar avhengig av behovet. Blant mediene som brukes er hjerneinfusjon og trypticase soyagar, selv om de mest anbefalte er Columbia agar, Müeller Hinton, GC agar og Thayer Martin agar.

Noen varianter av sjokoladeagar inkluderer et kommersielt tilgjengelig forsterket tilskudd kalt Isovitalex eller Polivitex.

Disse tilskuddene inneholder vitamin B ₁₂ , L-glutamin, adenin, guaninhydroklorid, p-aminobensoesyre, nikotinamidadenininukleotid (NAD), tiaminpyrofosfat, jernnitrat, tiaminhydroklorid, cysteinhydroklorid, L-cystin og glukose.

Det er viktig å merke seg at sjokoladeagar er mer beriket enn blodagar, men det tillater ikke observasjon av hemolysemønstre.

applikasjoner

Kilde: pixnio.com. Forfatter:
Pete Seidel, Amanda Moore, MT, Todd Parker, PhD, Audra Marsh, USCDCP

Sjokoladeagar tilberedt med Columbia agar

Dette mediet inneholder pankreas fordøyelse av kasein og hjerte, peptisk fordøyelse av kjøtt, natriumklorid, agar, gjærekstrakt og maisstivelse. Den er også rik på vitaminer, mineraler og essensielle aminosyrer.

Denne oppvarmede blodbasen er ideell for isolering av bakterier i slekten Neisseria. På den annen side, hvis et supplement til Brucella i tillegg tilsettes mediet, kan den nevnte mikroorganisme isoleres. Resultatene forbedres ved hjelp av hesteblod.

Sjokolade agar tilberedt med GC base agar (for gonococci)

Dette mediet inneholder peptoner, maisstivelse, monobasiske og dibasiske buffere, natriumklorid og agar.

De fleste kommersielt tilberedte sjokoladeagarpresentasjoner kommer med denne basen og inneholder ikke oppvarmet blod, men snarere en syntetisk blanding av hemin og et kjemisk tilskudd av vekstfaktorer, vitaminer, mineraler, aminosyrer, faktor V og glukose.

Sjokoladeagar tilberedt med Müeller Hinton agar

Det brukes til å teste den antimikrobielle følsomheten til snelle mikroorganismer, for eksempel Streptococcus pneumoniae ved bruk av 5% oppvarmet saueblod.

Det brukes også til den primære isolasjonen av Neisserias og Haemophilus, men i det spesielle tilfellet av isolasjonen av Haemophilus, er bruk av hesteblod å foretrekke, da det er en rik kilde til faktor X og V.

På den annen side, hvis prøven som skal sås kommer fra et ikke-sterilt område, anbefales tilsetning av antibiotika for å hemme den normale floraen i området.

Eksempel på luftveisprøver der det er mistanke om tilstedeværelse av bakterier i slekten Haemophilus, bacitracin brukes til å hemme veksten av Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus og saprophytic Neisserias.

Når det gjelder genital chancre-prøver, der det er mistanke om Haemophilus ducreyi, har en sjokolade-agar tilberedt som følger blitt brukt med suksess: Müeller - Hinton-agar med 5% sjokolades hesteblod, 1% Isovitalex berikelse og 3 ug / ml vankomycin.

Sjokoladeagar tilberedt med Thayer Martin agar

Dette mediet er spesielt for isolering av Neisseria gonorrhoeae. Den må inneholde antibiotika for å hemme den medfølgende floraen. Lammets blod brukes.

Forberedelse

Du bør se indikasjonene for tilberedning av basisagaren som skal brukes. De finnes på baksiden av beholderen til det dehydrerte mediet. De beskriver generelt hvor mye du må veie for å tilberede en liter kulturmedium.

Den nøyaktige mengden som trengs kan tilberedes i laboratoriet, den kan være mer eller mindre enn en liter.

beregninger

En regel på tre brukes for å beregne hvor mye du må veie for å forberede ønsket volum. Eksempel:

Hvis det for 1 liter er nødvendig å veie 40 gr og laboratoriet krever 800 ml, sies det:

1000 ml ----------- 40 gr

800 ml -----------– X

Formelen vil være som følger:

X = 32 gr (mengde som skal veies for 800 ml).

Vei og oppløs

Den nødvendige mengden veies og legges i en kolbe med vannet.

Varm opp over moderat varme og bland forsiktig med roterende bevegelser til det dehydrerte mediet helt oppløses, slik at det koker i 1 minutt.

Sterilisere

Kolben plasseres i autoklaven for å sterilisere mediet ved 121 ° C i 20 minutter.

Blodaggregat

Når du forlater autoklaven, får det stå til temperaturen på mediet er omtrent mellom 56 til 70 ° C for å plassere blodet og blande til mediet blir brunt.

Hvis du legger til kosttilskudd, er det på tide å gjøre det. Deretter blandes og serveres 20 ml til hver steril petriskål.

Hele prosedyren bør gjøres i en laminær strømningshette eller rundt Bunsen-brenneren.

La stå til de stivner og oppbevarer omvendt i kjøleskapet.

En annen måte å tilberede sjokoladeagar uten å bruke blod på

Basemediet blir fremstilt som beskrevet ovenfor, det kommersielt oppnådde dehydrerte hemoglobin blir oppløst og sterilisert i autoklaven.

Begge løsningene får avkjøle seg til 50 ° C, skjøtes sammen og tillegget tilsettes. Bland under aseptiske forhold og server deretter i sterile petriskåler.

QA

Det er viktig at blodet plasseres ved den angitte temperaturen, da det er det ideelle å lysere de røde blodlegemene og samtidig opprettholde faktor V, som er varmefølsom.

Ingen bobler skal være igjen på overflaten av agaren. Fra hver batch på 100 plater skal en eller to plater inkuberes i ovnen ved 37 ° C i 24 timer for å bekrefte deres sterilitet.

For best resultat bør sjokoladeagar brukes kort etter tilberedning.

Kontroll av bakteriestammer bør oppbevares i laboratoriet for å evaluere effektiviteten til det ferske mediet for vekst av de viktigste rasende mikroorganismer av klinisk betydning.

referanser

1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktisk klinisk mikrobiologi. University of Cadiz, 2. utgave. UCA Publications Service.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 utg. Argentina. Redaksjonell Panamericana SA
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. (5. utg.). Argentina, Redaksjonelt Panamericana SA
4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. Mulighet for å bruke GC-Biocen Agar basiskulturmedium i mikrobiologilaboratoriet. Rev Cubana Med Trop, 2004; 56 (3): 237-238. Tilgjengelig på: scielo.sld.
5. Wikipedia-bidragsytere. Sjokoladeagar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 17 desember 2018, 19:54 UTC. Tilgjengelig på: en.wikipedia.org.