CLED AGAR: BEGRUNNELSE, BRUK OG FORBEREDELSE - BIOLOGI - 2025

Den CLED-agar (Cystin-Laktose-elektrolytt-manglende) er et fast kulturmedium differensial, som brukes for diagnose av urinveisinfeksjoner. Sammensetningen av kulturmediet er designet for god vekst av urinpatogener og er ideell for kvantifisering av kolonidannende enheter (CFU).

CLED-kulturmediet er ikke-selektivt, siden Gram-negative og Gram-positive mikroorganismer kan vokse i det. Men dette er ikke et problem, siden de fleste UTI-er er forårsaket av bare en type mikroorganisme.

CLED agar

Ved polymikrobielle infeksjoner kan man få 2 eller 3 forskjellige bakterier, men det er veldig sjeldent og mesteparten av tiden er det forurensede prøver.

Blant de Gram-negative bakteriene som kan vokse i dette mediet er baciller som tilhører familien Enterobacteriaceae og andre enteriske baciller, uropatogenene som oftest isoleres i urinprøver er følgende: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, blant andre.

På samme måte er blant de Gram-positive bakteriene som kan vokse i dette mediet Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp og til og med gjær, slik som Candida albicans-komplekset.

På grunn av mediumets kjemiske sammensetning tillater det imidlertid ikke vekst av noen krevende kjønnsorganiske patogener, for eksempel Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, blant andre.

CLED Agar Rationale

CLED-kulturmediet har kjøttekstrakt, bukspyttkjertelhydrolysat av kasein og hydrolysat av gelatin som energikilde. De gir næringsstoffene for utvikling av krevende bakterier.

Den inneholder også cystin, en aminosyre som tillater vekst av coliforms, som kan skilles ut fra deres lille størrelse.

På samme måte inneholder den laktose som et gjærbart karbohydrat, og derfor er dette mediet forskjellig. å kunne skille de gjærende bakteriene fra ikke-laktosegjæringen.

Fermenterende bakterier får pH i mediet til å endre seg på grunn av produksjonen av syrer, utvikle gule kolonier, mens ikke-fermenterende bakterier ikke genererer endringer i mediet, derfor tar de på seg fargen på den opprinnelige agaren, grønn.

Fermenteringsreaksjonen avsløres takket være tilstedeværelsen av pH-indikatoren, som i dette mediet er bromotymolblått.

På den annen side hemmer den lave elektrolyttkonsentrasjonen av mediet den typiske invasive veksten av slekten Proteus, kalt den svermende effekten. Dette gir en fordel i forhold til andre medier, siden det tillater telling av CFU-er, inkludert hvis Proteus-slekten er til stede.

Imidlertid hemmer den lave konsentrasjonen av elektrolytter veksten av noen arter av slekten Shigella, dette er en ulempe sammenlignet med andre medier.

Begrunnelse for CLED-agar (Bevis)

Det er en variant eller modifisering av dette mediet laget av Bevis, som inkorporerte sur fuchsin (Andrades indikator) i den opprinnelige komposisjonen. Det fungerer sammen med bromotymolblått for å skille gjæring fra ikke-gjærende bakterier.

Forskjellen mellom konvensjonelt og modifisert medium er fargen som koloniene tar på seg. Når det gjelder laktosegjærende bakterier, blir koloniene rødoransje med en rosa eller rød glorie, mens de ikke-gjærende er blågrå.

applikasjoner

CLED-agar brukes utelukkende til såing av urinprøver. Bruken av dette mediet er spesielt hyppig i europeiske laboratorier, mens det i Amerika er mindre brukt.

Prøvesamling må oppfylle visse parametere for å oppnå pålitelige resultater, inkludert:

• Ikke ta antibiotika før prøvetaking.
• Ta helst urinen først om morgenen, siden den er mer konsentrert, når det ikke er mulig å ta prøven med invasive metoder.
• Vask kjønnsorganene godt før du tar prøven.
• Kast den første strømmen med vannlating og legg deretter beholderen.
• Samle 25 til 30 ml urin i en godt merket steril beholder.
• Ta med deg umiddelbart til laboratoriet omgitt av is.
• Det må behandles innen 2 timer etter utstedelse eller nedkjøles ved 4 ° C i maksimalt 24 timer.

Seeding urinprøver

Urinprøven skal fortynnes 1:50.

For fortynning, plasser 0,5 ml pasienturin og fortynn med 24,5 ml steril fysiologisk løsning.

Mål ut 0,1 ml av den fortynnede urinen og overflatespredningen med en drigalski-spatel på CLED-mediet. Dette er den beste såningsmetoden for å telle kolonier. Av denne grunn brukes det i urinprøver, siden resultatene må uttrykkes i CFU / ml.

For å kvantifisere de oppnådde koloniene, fortsett som følger: tell koloniene på platen og multipliser med 10 og deretter med 50. Dette gir deg mengden CFU / ml urin.

Tolkning

Teller over 100 000 CFU / ml - Indikerer urininfeksjon

Teller under 1000 CFU / ml- Ingen infeksjon

Teller mellom 1000-10.000 CFU / ml - Tvilsom, mulig forurensning, gjenta prøvetaking.

ID

Koloniene som er dyrket på CLED-agar, bør ha en Gram, og avhengig av mikroorganismens morphotintorale egenskaper, utføres en viss subkultur.

For eksempel, hvis det er en Gram-negativ bacillus, blir den sådd på en MacConkey-agar, der gjæringen eller ikke av laktose er bekreftet. I tillegg er en næringsagar festet for å utføre oksidasetesten.

I tilfelle Gram avslører Gram-positive kokker, kan den subkultureres på salt mannitol-agar og på næringsagar. I det siste utføres katalasetesten. Til slutt, hvis gjær blir observert, blir det sådd på Sabouraud agar.

Mange laboratorier unngår bruk av CLED-medium og foretrekker bare å bruke blodagar, MacConkey og næringsagar fremfor urinprøver.

Forberedelse

I en kolbe med en liter destillert vann løses 36,2 g CLED agarpulver opp. Etter 5 minutters ståhet, varmer du den resuspenderte agaren, og blandes kontinuerlig til å koke i 1 minutt.

Deretter steriliseres ved 121 ° C i 15 minutter i autoklaven. På slutten av tiden fjernes den fra autoklaven og får avkjøles til en temperatur på 45 ° C. Deretter serveres 15-20 ml i hver steril petriskål.

Tallerkenes serveringsprosedyre må utføres inne i en laminær strømningshette eller foran Bunsen-brenneren for å unngå forurensning.

Platene som serveres, lar stå stivne, anordnes i et omvendt stativ og oppbevares i kjøleskap (2-8 ° C) til bruk.

Den endelige pH for det tilberedte mediet bør være 7,3 ± 0,2.

referanser

1. Anbefalinger for mikrobiologisk diagnose av urininfeksjon. chil. infectol. 2001; 18 (1): 57-63. Tilgjengelig på: scielo.org.
2. Panchi J. Identifikasjon av det mikrobielle middelet som forårsaker urinveisinfeksjoner hos pasienter som gjennomgår blærekateterisering. 2016. Studenterarbeid for å kvalifisere seg til bachelorgraden i klinisk laboratorium. Det tekniske universitetet i Ambato. Ecuador.
3. Britannia Laboratories. CLED medium. Tilgjengelig på: britanialab.com.
4. Renylab Laboratories. Bruksanvisning, CLED Agar. 2013 Tilgjengelig på: es.renylab.ind.br.
5. Cultimed Laboratories. Grunnleggende manual for mikrobiologi. Tilgjengelig på: ictsl.net.
6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Díaz MD, Vicente T, Bouza E. CLED-agaralternativet i urinkulturrutine. En prospektiv og komparativ evaluering. Diagnose Microbiol Infect Dis. 1992; 15 (4): 287-90.
7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktisk klinisk mikrobiologi. University of Cadiz, 2. utgave. UCA Publications Service.