CZAPEK AGAR: BEGRUNNELSE, KLARGJØRING, BRUK OG BEGRENSNINGER - BIOLOGI - 2026

Den Czapek (CZA) er et selektivt fast medium er spesielt utviklet for dyrking saprophytic bakterier og sopp. Den ble opprettet av botanikeren Friedrich Johann Franz Czapek, av polsk opprinnelse, og den amerikanske kjemikeren Arthur Wayland Dox; av denne grunn er denne agaren også kjent som Czapek-Dox-medium.

Det opprinnelige mediet var flytende, men agar ble senere tilsatt for å gjøre det til et fast medium. Czapek-medium består av natriumnitrat, bipotassium-fosfat, magnesiumsulfat, kaliumklorid, jernholdig sulfat, sukrose, agar og destillert vann.

Czapek agar A. Aspergillus parasiticus B. Aspergillus fumigatus Kilde: A. Medmyco / B. Foto: Dr. David Midgley. Wikipedia.com

PH til Czapek agar er 7,3, men det er en variant til hvilken 10% melkesyre tilsettes, hvis pH forblir på 3,5. Dette syremediet brukes til dyrking av syrofile mikroorganismer.

På den annen side modifiserte noen kommersielle hus sammensetningen av Czapek agar ved å endre magnesiumsulfat og bipotassiumfosfat med glyserofosfat; denne modifikasjonen forhindrer at magnesiumfosfatbunnfall observert med den konvensjonelle formel dannes. På samme måte er det en annen variant som gjærekstrakt tilsettes.

Endelig anbefales Czapek agar av American Public Health Association APHA for studien av Actinomycetes sp, Aspergillus sp, Paecilomyces sp og Penicillium sp. Disse artene er preget av å være miljømikroorganismer og opportunistiske patogener.

Basis

Dette mediet inneholder sukrose; dette karbohydratet fungerer som karbonkilde, mens natriumnitrat er nitrogenkilden, men i motsetning til andre medier, er det tilførte nitrogenet uorganisk.

Av denne grunn anses Czapek-mediet som selektiv, siden bare mikroorganismer som kan bruke uorganiske forbindelser som eneste nitrogenkilde, kan vokse.

Som et regulerende stoff for osmolariteten til mediet er bipotassium fosfat. For deres del gir magnesiumsulfat, kaliumklorid og jernsulfat essensielle mineraler for vekst av saprofytiske (frittlevende) mikroorganismer. Denne formelen danner et bunnfall av magnesiumfosfat.

Til slutt er agar-agar forbindelsen som gir den faste konsistensen til mediet, og vann er løsningsmidlet for alle komponentene.

Med den modifiserte Czapek-agarformelen er det ingen dannelse av bunnfall, og det forbedrer vekstytelsen til noen sopp.

Den ekstreme surheten til Acid Czapek Agar gjør det til et mer selektivt medium, og tillater bare vekst av surt fille mikroorganismer som er i stand til å bruke uorganisk nitrogen. I mellomtiden forbedrer Czapek-gjæragar ytelsen til visse sopp.

Forberedelse

Medium Czapek-Dox

Vei opp 49 g av det dehydrerte kulturmediet og løst opp i destillert vann. Påfør varmen til den koker. Rist blandingen ofte til den er helt oppløst.

-Czapek Agar kiler

Fordel den oppløste blandingen i rør og autoklaver ved 121 ° C i 15 minutter. Når du fjerner fra autoklaven, homogeniser før du legger ned rørene og la stivne.

-Czapek agarplater

Autoklaver den oppløste blandingen ved 121 ° C i 15 minutter og la den avkjøle til 50 ° C, homogeniseres og hell 20 ml i sterile petriskåler. La stivne, vende og oppbevare i kjøleskapet til bruk.

PH skal forbli på 7,3 ± 0,2. Fargen på det dehydratiserte mediet er hvitt og det tilberedte mediet er lys gul, svakt uklar på grunn av tilstedeværelsen av et flokkulerende bunnfall.

Czapek medium ved sur pH

Tilbered som allerede beskrevet, men tilsett 10 ml steril 10% melkesyre for hver liter tilberedt medium. Det modifiserte Czapek-mediet skal ha pH 3,5 ± 0,2.

Modifisert Czapek Medium

Vei ut 45,4 g av det dehydrerte mediet og oppløs i 1 liter vann. Resten av preparatet er det samme som beskrevet ovenfor. Fargen på det dehydrerte mediet er hvitt og det tilberedte mediet er hvitaktig. Den endelige pH for mediet er 6,8 ± 0,2.

Czapek-gjærmedium

Også kalt Czapek Yeast Extract Agar (CYA). Den inneholder elementene i den klassiske Czapek agar pluss gjærekstrakt.

Bruk

Czapek-mediet brukes til å søke etter saprofytiske mikroorganismer i prøver av jord, grønnsaker, korn, luft, insekter, blant andre.

Czapek-agar ved sur pH brukes for vekst av surtfile mikroorganismer, mens modifisert Czapek-agar er spesielt nyttig for dannelse av klamydosporer i arter av Candida albicans-komplekset.

Endelig er Czapek-gjæragar veldig nyttig for isolering av Aspergillus og Penicillium.

sådd

-Czapek agar

For å søke etter Actinomycetes i jorden, fortsett som følger: prøven behandles med fenolisert vann i 30 minutter, og deretter sås 1 ml av suspensjonen på Czapek agar. Inkuber ved 28 ° C i 5 til 7 dager.

For prøver av vegetabilsk, korn og insekt plasseres de direkte på agaren. Du kan også lage fortynninger og frø 0,1 ml på agaroverflaten.

-Modifisert Czapek agar

For såingen brukes en rett sløyfe eller nål, den impregneres med vattpinnen og agaren inokuleres ved å lage en punktering til den berører platens base. Inkuber i 24 timer ved 28 ° C og undersøk under et mikroskop over og under platen for å se om det har dannet klamydosporer.

Inkubasjonstemperatur og -tid

Inkubasjonstemperaturen og -tiden varierer avhengig av typen mikroorganisme som skal isoleres. Plater inkuberes vanligvis i en til to uker i et temperaturområde fra 20 til 25 ° C.

Imidlertid er det spesifikke forhold for noen stammer. For eksempel vokser de fleste arter av slekten Aspergillus optimalt ved 30 ° C; A. A. fumigatus vokser imidlertid ved 50 ° C.

Når det gjelder inkubasjonstiden en eller to uker er normalt, men Candida albicans kan utvikle seg i løpet av 24 til 48 timer ved 25 ° C.

Kjennetegn på noen kolonier på dette mediet

-Penicillium atrovenetum

Det utvikler seg i 12 dager inkubasjon ved 27 ° C. Deres kolonier er små (25 mm).

Koloniene har et fløyelsaktig utseende, med en definert hvit kant og en blågrønn fargetone i midten som blir grå når den eldes. Baksiden av kolonien er oransje, noe som gjør midten til samme farge på grunn av pigmentproduksjon.

-Aspergillus niger

Det utvikler seg med hvitt til gult mycel og svarte sporer.

-Candida albicans

Kremet lys beige kolonier utvikler seg. I modifisert Czapek agar danner det klamydosporer.

-Aspergillus parasiticus

Et mørkegrønt mycel utvikles på 7 dager ved 25 ° C.

QA

For å evaluere kvaliteten på kulturmediet kan sertifiserte kontrollstammer plantes, for eksempel: Aspergillus niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.

Aspergillus niger utvikler et hvitt til gult mycel og svarte sporer på omtrent 5 dager, mens Candida albicans vil ha en tilfredsstillende vekst i 24 timers inkubasjon ved 25 ° C; kolonier er kremfarget.

begrensninger

Noen studier har avdekket at for utvinning av Actinomycetes er agaren med best utbytte potetdekstroseagar, med Czapek agar på andreplass, men for utvinning av Aspergillus og Penicillium er Czapek agar den som gir den høyeste utvinningsgraden.

referanser

1. Dávila M, et al. Antagonistiske aktinomyceter mot fytopatogene sopp av landbruksmessig betydning. Pastor Mex. Vitenskap. Agríc 2013, 4 (8): 1187-1196. Tilgjengelig på: scielo.org.
2. Luna M, Lozada Y, Hvete Á. Isolering av Aspergillus niger-stammer, produserende ochratoxin A, i lagret grønn kaffe (Coffea arabica). Pastor Mex. Mic. 2010; 32: 63-68. Tilgjengelig på.scielo.org.
3. Wikipedia-bidragsytere. Czapek medium. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 13. januar 2019, 20:30 UTC. Tilgjengelig på: en.wikipedia.org
4. Conda Pronadisa Laboratories. Modifisert Czapek-Dox Agar. Tilgjengelig på: condalab.com
5. Kultur Media Microkit. Czapek-Dox Agar. Diosponible på: Medioscultivo.com