Den agar Endo eller Endo medium er et fast medium, differensial og med en viss grad av selektivitet kultur. Den opprinnelige formelen ble opprettet av Endo i 1904 for å skille laktosegjæring fra ikke-gjærende bakterier. Opprinnelig ble det designet for isolering av Salmonella typhi, men senere snakket målet med mediet om å søke etter coliforms.
Prinsippet til Endo Agar har holdt seg, men formuleringen har gjennomgått utallige endringer gjennom årene. For tiden består mediet av peptisk fordøyelse av dyrevev, laktose, dipotassiumhydrogenfosfat, natriumsulfitt, basisk fuchsin og agar.
A: Virgin Endo Agar B: Seeded Endo Agar, i midten av agaren kan du merke den metalliske glansen fra en E. coli-stamme. Kilde: A: Strolch1983 / B: LenkaM
Hovedbruken av mediet har vært knyttet til isolering og differensiering av Gram-negative baciller som tilhører Enterobacteriaceae-familien og til andre nære familier.
I lang tid ble det brukt til påvisning av coliforms i vann, meieriprodukter og matprøver, men i dag har bruken av dette mediet blitt fortrengt av andre med lignende funksjoner. Noen mikrobiologiske laboratorier bruker imidlertid denne agaren for isolering av Enterobacteriaceae fra prøver av klinisk opprinnelse.
Basis
Endo agar inneholder peptoner som tjener som en kilde til aminosyrer, nitrogen, karbon og energi, nødvendig for vekst av krevende mikroorganismer.
På den annen side tilveiebringes den litt selektive karakteren til agaren ved tilsetning av natriumsulfitt og basisk fuchsin; begge komponentene hemmer veksten av de fleste Gram-positive bakterier delvis eller totalt.
Differensialkarakteren er gitt ved tilstedeværelsen av det gjærbare karbohydratet, som i dette tilfellet er laktose og basisk fuchsin, som også fungerer som en pH-indikator.
Gram-negative bakterier som vokser på denne agaren og er i stand til å fermentere laktose vil danne sterke rosa kolonier; å være patognomonisk av Escherichia coli, dannelse av mørkerøde kolonier med en iriserende grønnaktig metallisk glans. Dette skyldes den høye produksjonen av syrer fra karbohydratgjæring.
Det skal bemerkes at mediet rundt koloniene også får en sterk rosa farge. Mens ikke-laktosegjærende Gram-negative stenger danner lyserosa kolonier som ligner på middels eller fargeløs.
Dipotassiumhydrogenfosfat balanserer pH i mediet og agar er komponenten som gir den faste konsistensen.
Forberedelse
Endo agar
Vei ut 41,5 g av det dehydrerte mediet og oppløs i 1 liter destillert vann. Varm opp blandingen med hyppig omrøring til mediet har løst seg helt opp. Steriliser i en autoklav ved 121 ° C, ved 15 kg trykk, i 15 minutter.
Når du fjerner det fra autoklaven, la det avkjøles til en temperatur på omtrent 45-50 ° C, rist blandingen for å homogenisere før servering. Hell 20 ml i sterile petriskåler.
La platene stivne, vend inn og oppbevar i en plaquero eller pakk med mørkt papir før de oppbevares i kjøleskapet. Det er veldig viktig å beskytte det tilberedte mediet mot direkte lys. En god praksis er å forberede det nøyaktige beløpet du trenger.
Hvis platene oppbevares i kjøleskap, bør platene få lov til å varme seg opp før bruk.
PH i mediet bør være mellom 7,2 og 7,6, og fargen på det tilberedte mediet er lys rosa.
M-Endo agar-variant
Det er en annen versjon av Endo agar (m-Endo) som følger formelen til McCarthy, Delaney og Grasso, som inneholder flere forbindelser og varierer i form av preparat.
Denne varianten inneholder: laktose, tryptose, enzymatisk fordøyelse av kasein, enzymatisk fordøyelse av dyrevev, natriumklorid, dibasisk kaliumfosfat, natriumsulfitt, gjærekstrakt, monobasisk kaliumfosfat, basisk fuchsin, natriumdeoksykolat, laurylsulfat natrium og agar.
I dette tilfellet veies og suspenderes 51 g av det dehydratiserte mediet i 1 liter destillert vann som inneholder 20 ml etanol.
Varm litt under omrøring til mediet har løst seg helt opp. Den skal ikke overopphetes og bør ikke autoklaveres. Når blandingen er homogen, server du i sterile petriskåler og la stivne.
Bruk
I noen land brukes det fortsatt til å telle totale og fekale koliformer i mat- og vannprøver, spesielt tilstedeværelsen av Escherichia coli som den viktigste indikatoren på fekal kontaminering.
M-Endo Agar anbefales av American Public Health Association (APHA) for overvåking og kontroll av desinfeksjons- og avløpsrenseprogrammer, samt for evaluering av drikkevannets kvalitet.
Den mest benyttede metoden er membranfiltrering, etter berikelse av prøven med Laurylsulfat i 2 til 4 timer.
Det kan også brukes som en erstatning for EMB-agar i den mikrobiologiske analysen av mat og vann med den mest sannsynlige tallteknikk (MPN), spesifikt i den komplette bekreftelsesfasen for å bekrefte tilstedeværelsen av E. coli fra uklare EC-buljonger.
QA
Kjente eller sertifiserte kontrollstammer blir sådd for å vurdere kvaliteten på den forberedte Endo agar-batch.
Blant stammene som kan brukes til dette formålet, er: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteo mirC1500003 .
Stammene frøes ved utmattelse og inkuberes ved 37 ° C i 24 timer i aerobiose.
De forventede resultatene er:
- For Escherichia coli: sterke røde kolonier, med metallisk glans.
- For E. cloacae og K. pneumoniae bør koloniene være rosa mucoid.
- Når det gjelder S. typhimurium, S. flexneri og P. mirabilis, er koloniene vanligvis lyserosa eller fargeløse.
- Til slutt forventes E. faecalis å bli delvis hemmet, derfor må veksten være dårlig med veldig små, sterke rosa kolonier.
begrensninger
-Endo medium har lav selektiv kraft, derfor er det mulig at noen Gram-positive mikroorganismer som Staphylococcus, Enterococcus og til og med gjær kan vokse.
-Andre baciller som ikke tilhører Enterobacteriaceae-familien, kan utvikle seg i dette mediet, for eksempel Pseudomonas sp og Aeromonas sp. Egenskapene til disse stammene er fargeløse uregelmessige kolonier.
-Dette tilberedte mediet er veldig følsomt for lys, og derfor forringes indikatorsystemet ved langvarig eksponering for det, og irreversibelt skader mediet.
-Komponentene i mediet regnes som kreftfremkallende, derfor bør direkte kontakt unngås.
-Dehydratiserte mediet er veldig hygroskopisk og må oppbevares i sin opprinnelige beholder ved romtemperatur, tett lukket og i et tørt miljø.
referanser
- BD Laboratories. Endo Agar. 2013. Tilgjengelig på: bd.com
- Neogen Laboratories. M Endo Agar. Tilgjengelig på: foodsafety.neogen.com
- Endo Agar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 7. september 2017, 08:27 UTC. 28. feb 2019, 22:55. Tilgjengelig på: en.wikipedia.
- MercK Laboratory. Endo agar. 2019. Tilgjengelig på: merckmillipore.com
- Tekniske arklaboratorier. M –Endo Agar LES. 2015. Tilgjengelig på: liofilchem.net