MAISMELAGAR: BAKGRUNN, TILBEREDNING OG BRUK - BIOLOGI - 2026

Den maismelagar er et fast kulturmedium, lav nærings kraft, nyttig for subdyrking av visse sopper og for å demonstrere chlamydosporer i stammer av Candida albicans kompleks. På engelsk er det kjent som Corn Meal Agar.

Det konvensjonelle cornmealmediet har en veldig enkel sammensetning, den inneholder cornmeal, agar-agar og vann. På grunn av det lave ernæringsnivået, er det ideelt for bruk i vedlikehold av soppstammer i moderate perioder, spesielt svarte sopp.

A. Grafisk fremstilling av Candida albicans Complex på maismel-agar. B. Klamydosporer av Candida albicans-komplekset sett under mikroskopet, dannet på maismel-agar. Kilde: A. GrahamColm / B. Av: CDC / Dr. William Kaplan, Courtesy: Public Health Image Library.

Sporulering av Candida albicans-komplekset foretrekkes i dette mediet, hvis 1% av Tween 80 tilsettes under fremstillingen av agaren. Dannelsen av klamydosporer er karakteristisk for denne arten og praktisk talt den eneste som påvirker mennesker.

Det er andre arter som danner klamydosporer, men det er usannsynlig at de påvirker mennesker, for eksempel Candida australis, som er til stede i pingvindråper, eller C. clausenii, som er en saprofyt som sjelden forekommer. På samme måte kan unntaksvis artene C. stellatoidea og C. Tropisis danne dem.

På den annen side favoriserer tilsetning av glukose til maismelmediet dannelsen av pigmenter i Trichophytom rubrum-stammer.

Det er viktig å fremheve at det er sopp som ikke danner hyfer eller pseudohyphae i maismelagar, for eksempel Cryptococcus neoformans, som skiller seg fra andre slekter.

Cornmeal agar kan lages hjemme i laboratoriet, eller kommersielle medier kan også brukes.

Basis

Cornmeal er underlaget, agar er størkningsmiddelet, og vann er løsningsmidlet.

Cornmeal agar kan suppleres med tween 80 (sorbitan monooleat eller polysorbate polyester 80). Denne forbindelsen reduserer overflatespenningen til mediet på grunn av dets emulgerende kraft.

Det skaper også et fiendtlig miljø som hemmer overdrevet cellemultiplikasjon og stimulerer veksten av hyfer, og som også favoriserer produksjonen av klamydosporer; sistnevnte betraktet strukturer av motstand. Denne strukturen hjelper til med å identifisere Candida albicans-artene.

På sin side øker glukose i dette mediet pigmentdannelsesevnen til noen sopp.

Det skal bemerkes at kornmelmediet med glukose ikke er nyttig for demonstrasjon av klamydosporer i Candida albicans-komplekset.

Forberedelse

Hjemmelaget Cornmeal Agar-tilberedning

Vei ut 47 g gult maismel og oppløs i 500 ml destillert vann. Varm opp til 60 ºC, mens du rører preparatet i en periode på omtrent 1 time. Filtrer deretter gjennom et stykke gasbind og bomull, eventuelt kan det filtreres igjen ved å føre preparatet gjennom et Whatman No. 2-filterpapir.

Fyll opp volumet til 1000 ml med destillert vann. Tilsett 17 g agar-agar, varm til den er oppløst. Autoklav i 15 minutter ved 121 ºC.

Serveres i sterile petriskåler. Oppbevares i kjøleskap.

Fargen på det tilberedte mediet er hvitaktig med et klumpete utseende.

Hvis du vil tilberede maismel med glukose til preparatet beskrevet ovenfor, tilsett 10 g glukose.

Kommersiell maismel-agar

Vei 17 g av det dehydrerte mediet og oppløst i 1 liter destillert vann. Blandingen kan varmes opp, ristes forsiktig for å oppløses fullstendig. Steriliser i en autoklav ved 121 ºC, ved 15 lb, i 15 minutter.

Hell i sterile petriskåler. La stivne. Vend og oppbevar i kjøleskapet til bruk. Temperert før bruk.

PH bør være 6,0 ± 0,2 ved 25 ºC.

Maismel-agar med Tween 80

For å overholde ISO 18416, må maismelagar tilberedes som følger:

Vei 65 gram per liter og tilsett 10 ml Tween 80. Varm opp og kok i noen minutter til den er oppløst, og pass på at du ikke overopphetes for mye. Steriliser ved 121 ºC i 15 minutter.

Maismel agar med glukose

For å forbedre den kromogene kraften til Trichophyton rubrum-kolonier og skille dem fra T. mentagrophytes, kan 0,2% glukose tilsettes den opprinnelige formelen. Du trenger ikke å ha Tween 80, da glukose hemmer dannelsen av klamydosporer.

Bruk

Hovedsakelig er bruken av cornmeal-agar beregnet på studier av Candida-stammer, og hjelper dem med å identifisere gjennom den karakteristiske observasjonen av klamydosporer i albicans-artene. Det vil si at bruken av denne agaren fungerer som en hjelpemetode for identifisering av disse gjærene.

Både saprofytiske og patogene arter kan utvikle seg på denne agaren, men hver danner karakteristiske mycelstrukturer. For eksempel produserer ikke arter av slekten Torulopsis mycel og reproduserer bare ved blastoconidia.

På samme måte produserer Trichosporon og Geotrichum arthroconidia på maismelagar, og det er noen ganger vanskelig å skille mellom det ene og det andre.

Arthroconidia av slekten Geotrichum produserer en forlengelse av hyphene som ligner en hockeystokk.

Produksjon av pigmenter ved bruk av maismelagar supplert med glukose er nyttig i identifiseringen av Trichophytom rubrum.

sådd

Mistenkelige Candida-kolonier oppnådd i det primære kulturmediet - Sabouraud agar - fra kliniske prøver, kosmetikk, jordsmonn, er blant annet subkulturert på maismel-agar. Mediet blir podet og inkubert ved 22 ° C i 24 til 48 timer. Inkubasjonstiden kan forlenges om nødvendig.

Chlamydospore demonstrasjon

For dette formålet må maismelagaren med Tween 80 inokuleres ved bruk av Dalmau-teknikken. Denne metoden består i å ta en del av den mistenkte kolonien med platinahåndtaket og gjøre tre parallelle kutt i midten, og holde håndtaket på 45º. Kuttene skal skilles med en avstand på 1 cm fra hverandre.

Deretter blir en tidligere flammet dekke-gjenstand plassert på stripene som er sådd, slik at halvparten blir dekket og den andre blir avdekket.

Inkuber de såede platene ved 30 ° C i 48-72 timer og undersøk deretter under mikroskopet gjennom dekkglippen.

Opprettholdelse av soppstammer

For vedlikehold av stammer oppbevares de såede og dyrkede platene i kjøleskap (4 til 8 ºC). På denne måten kan de vare flere uker og brukes til undervisnings- eller forskningsformål.

QA

For sterilitetskontrollen inkuberes en plate uten inokulering ved romtemperatur, det forventes at det ikke vil være noen vekst eller fargeendring.

For kvalitetskontroll kan kjente stammer sås slik som: Staphylococcus aureus, ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922, Aspergillus niger ATCC 16404, Candida albicans ATCC 1023, Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763.

De forventede resultatene er delvis hemming for S. aureus og E. coli. Mens det forventes en tilfredsstillende vekst i resten av stammene.

Aspergillus niger vokser med svarte og sporulerte kolonier i en omtrentlig tid på 5 dager med inkubasjon.

Candida albicans gjærkolonier med produksjon av klamydospor.

Saccharomyces cerevisiae produserer store gjærceller.

begrensninger

Det dannes et gult bunnfall på bunnen av platen som ikke bør forveksles med kolonier.

referanser

1. Neogen Laboratories. Corn Meal Agar. Tilgjengelig på: foodsafety.neogen.com.
2. Kultur Media Microkit. Corn Meal Agar. Tilgjengelig på: Medioscultivo.com.
3. Linares M, Solís F. Yeast Identification Guide. Tilgjengelig på: http: //www.guia.revibero.
4. Urcia F, Guevara M. past. Perú Med.Exp. Folkehelse, 2002; 19 (4): 206-208. Tilgjengelig på: Scielo.com
5. Casas-Rincón G. Generell mykologi. 1994. 2. utg. Central University of Venezuela, Library Editions. Venezuela Caracas.
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 utg. Redaksjonell Panamericana SA Argentina.
7. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. utg. Redaksjonell Panamericana SA Argentina.
8. Castillo E. Sammenlignende studie av noen makro- og mikroskopiske metoder for isolering og gjenkjennelse av slekten Candida. Colombianske pastor fra farmasøytiske kjemiske vitenskaper. 1970; 3 (1): 33-57. Tilgjengelig på: Ciencias.unal.edu.co