Den agar Hektoen eller Hektoen ente agar fast medium er et selektivt og differensielt kultur. Det ble opprettet på Hektoen Institute av King og Metzger for isolering av enteropatogene bakterier i Shigella- og Salmonella-slekten.
Mediet er sammensatt av proteosepepton, gjærekstrakt, gallesalter, laktose, sukrose, salisin, natriumtiosulfat, natriumklorid, jerncitrat, ammoniumcitrat, bromotymolblått, surt fuksin og agar. Denne formuleringen gjør det mulig å differensiere Shigella- og Salmonella-slektene fra resten av bakteriene som er i stand til å vokse i dette mediet.
A. Virgin Hektoen agar B. Seeded Hektoen agar. Kilde: Flickr.com/Den opprinnelige opplasteren var Philippinjl på fransk Wikipedia.
Selv om det er andre medier med samme funksjon som Hektoen agar, har det en større fordel sammenlignet med andre medier, spesielt når du vil gjenopprette Shigella-arter.
Arten av begge kjønn forårsaker alvorlige gastrointestinale problemer hos mennesker på grunn av inntak av forurenset mat; derfor er overføring fekal - oral. Derfor er bruk av Hektoen agar hovedsakelig indikert i den mikrobiologiske analysen av avføring og matprøver.
Basis
Hektoen Agar inneholder peptoner og gjærekstrakt som en kilde til næringsstoffer, og gir de essensielle elementene for mikrobiell utvikling.
Imidlertid har den også gallesalter som virker ved å hemme veksten av noen bakterier, spesielt Gram-positive og noen Gram-negative. Det er av denne grunn at det regnes som et selektivt medium.
På den annen side er Hektoen agar et differensialmedium. Denne egenskapen tildeles ved tilstedeværelsen av fermenterbare karbohydrater så som laktose, sukrose og salisin, sammen med pH-indikatorsystemet, representert av bromotymolblått og surt fuchsin.
Alle bakterier som kan vokse på dette mediet som ikke tilhører slekten Salmonella og Shigella, vil utvikle laks eller oransje kolonier, med unntak av slekten Proteus. Dette skyldes gjæringen av en eller flere av de tilstedeværende karbohydratene, som surgjør mediet, som får pH-indikatoren til å snu.
Slekten Shigella og Salmonella er på sin side ikke i stand til å gjære noe av karbohydratene som er til stede, og bruker bare peptoner som energikilde, som alkaliserer mediet og derfor er koloniene deres blågrønne.
Bakterier som er i stand til å danne hydrogensulfid (fargeløs gass), kan også skilles i dette mediet. Natriumtiosulfat fungerer som kilden til svovel mens jerncitrat er utvikleren. Begge forbindelser muliggjør dannelse av et svart bunnfall av jernsulfid som viser reaksjonen.
Det svarte bunnfallet i sentrum av kolonien med en gjennomsiktig glorie rundt seg gir et fiskøyneutseende. Denne egenskapen antyder tilstedeværelsen av slekten Salmonella.
Endelig opprettholder natriumkloridet den osmotiske balansen, og agaren gir mediet den faste konsistensen.
Forberedelse
Vei 76 g av det dehydrerte mediet og oppløst i en liter destillert vann. Rist blandingen kraftig og la den hvile i 10 til 15 minutter. Den kan varmes opp og kokes, og gir roterende bevegelser til den er fullstendig oppløst. Dette mediet er ikke autoklavert.
Når mediet når en temperatur på omtrent 45 ° C, helles et volum på 20 ml direkte i sterile petriskåler.
Agaren får stivne. På den tiden er de klare til bruk. Det anbefales å bruke dem umiddelbart. Hvis dette ikke er mulig, oppbevares de i kjøleskapet til bruk.
Plater bør tas ut av kjøleskapet på forhånd før såing for å bringe dem til romtemperatur.
PH i mediet bør være 7,5 ± 0,2. Fargen på det dehydrerte mediet er lilla og det tilberedte mediet er brungrønn.
Bruk
Bruk av Hektoen agar anbefales ved leting etter bakterier av Shigella- og Salmonella-slekten i avføring og matprøver.
Muligheten for å isolere disse bakteriene økes betraktelig hvis prøven tidligere er anriket i spesielle buljonger, som selenittbuljong, cystin selenittbuljong, tetrathionatbuljong, etc.
Inokulatet må være sterkt og såingen gjøres ved å stryke. Platene inkuberes ved 37 ° C i 24 til 48 timer i aerobiose.
Inkubasjon i 48 timer anbefales fordi karakteristikken til koloniene er tydeligere for deres tolkning og differensiering på dette tidspunktet.
QA
For å utføre kvalitetskontroll på dette mediet brukes sertifiserte bakteriestammer, slik som: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 og Shigella sonnei ATCC 25931.
De forventede resultatene er som følger: Salmonella typhimurium og Salmonella enteritidis skal utvikle blågrønne kolonier med eller uten svart senter. Mens Shigella-artene vil vokse som blågrønne kolonier.
Stammer av Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 og Staphylococcus aureus ATCC 25923 kan også inkluderes.
I disse tilfellene er de observerte egenskapene følgende: E. coli og K. pneumoniae vil utvikle laks-oransje kolonier i dette mediet, med et bunnfall i samme farge rundt seg. Mens Proteus vil utvikle blågrønne kolonier med eller uten svart senter.
Mens S. aureus og E. faecalis må hemmes, klarer E. faecalis av og til å vokse som veldig små, gule kolonier.
På den annen side, siden dette mediet ikke autoklaveres, er det viktig å evaluere steriliteten til mediet. Derfor, fra hver tilberedt batch, skal en til to uinokulerte plater inkuberes ved 37 ° C i 24 timer i aerobiose.
Det er klart det ikke forventes noen vekst av noe slag på tallerkenen.
begrensninger
-Proteus-artene kan utvikle seg i dette mediet, og egenskapene til koloniene deres kan forveksles med Salmonella- eller Shigella-artene. Av denne grunn må enhver mistenkelig koloni bekreftes med biokjemiske tester.
-Det er nødvendig å følge bruken av dette mediet med andre mindre selektive agarer, fordi hvis den ønskede mikroorganismen finnes i lave konsentrasjoner, kan det hende at den ikke utvikler seg i dette mediet.
-Ikke overopphetes under forberedelse, da overdreven varme endrer sammensetningen av mediet.
- Uvanlig kan det dukke opp kolonier av laktosegjærende Salmonella som kan gå upåaktet hen.
referanser
- Wikipedia-bidragsytere. Hektoen enteric agar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 13. mars 2019, 23:38 UTC. Tilgjengelig på: .wikipedia.org / Tilgang 16. mars 2019.
- BD Laboratories. BD Hektoen Enteric Agar (HE Agar). 2013. Tilgjengelig på: bd.com
- Britannia Laboratories. Hektoen Enteric Agar. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
- Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Hektoen agar. Tilgjengelig på: f-soria.es
- Difco & BBL Manual, Hektoen Enteric Agar. 2. utgave. Tilgjengelig på: bd.com/europe