LIA (LYSINJERN) AGAR: FUNDAMENT, TILBEREDNING OG BRUK - BIOLOGI - 2026

Den agar LIA (Lysin Jern) er en biokjemisk test som brukes for å identifisere bakterier av Enterobacteriaceae familien. Dette mediet ble opprettet av Edwards og Fife, basert på Falkow-formelen.

Opprinnelig var denne testen en buljong som inneholdt peptoner, gjærekstrakt, glukose, L-lysin, bromokresol-lilla og destillert vann. Edwards og Fife tilsatte agar-agar, jern-ammoniumcitrat og natriumtiosulfat.

Positiv og negativ test for lysindekarboksylering. Kilde: Foto- og diagramegenskaper til forfatteren MSc. Marielsa gil

Testen består i utgangspunktet av å demonstrere tilstedeværelsen av enzymet lysin dekarboksylase, i stand til å reagere med karboksylgruppen til aminosyren L-lysin. En deaminering av aminosyren kan også skje på grunn av tilstedeværelsen av enzymet lysindeaminase.

I tillegg tillater sammensetningen av mediet bevis på evnen til noen bakterieslaper å produsere hydrogensulfid. Endelig er det også mulig å observere generering eller ikke av gass i mediet.

Basis

Peptoner og gjærekstrakt

Som de fleste kulturmedier inneholder Lysine Iron Agar komponenter som gir kilden til næringsstoffer som er nødvendige for bakterievekst. Disse komponentene er representert med peptoner og gjærekstrakt.

glukose

På samme måte inneholder denne agaren glukose som et gjærbart karbohydrat. Alle bakterier i familien Enterobacteriaceae er kjent for å gjære glukose.

Dette trinnet er avgjørende, fordi det vil være ansvarlig for forsuring av mediet, en essensiell betingelse for at enzymet lysin dekarboksylase-hvis det er til stede for å virke på dets underlag.

I noen bakterielle slekter kan gassproduksjon på grunn av glukosegjæring observeres.

Gassen er påvist når det er en forskyvning av agaren i røret, og etterlater et tomt rom i bunnen av det, eller ved å sprekke mediet i to eller flere deler.

L-lysin

Når lysin er dekarboksylert, dannes et diamin (kadaverin) og karbondioksyd.

Dekarboksylering skjer i nærvær av koenzympyridoksalt fosfat. Denne reaksjonen er irreversibel.

PH indikator (bromokresol lilla)

Alle pH-endringene som oppstår i mediet ved de forskjellige reaksjoner blir detektert av den lilla bromokresol-pH-indikatoren.

I denne forstand, når det er surgjøring, blir mediet gult, og når det er alkalisering, går mediet tilbake til den opprinnelige lilla eller lilla fargen.

Når lysindeaminering skjer på grunn av tilstedeværelsen av lysindeaminase-enzymet, dannes en rødlig farge på overflaten, typisk i slekten Proteus, Providencia og noen Morganella-arter.

Dette skyldes det faktum at under deamineringsprosessen dannes alfa-keto-kullsyre, som reagerer med ammoniumcitrat i nærvær av oksygen, noe som forårsaker den nevnte fargen.

Jernholdig ammoniumcitrat og natriumtiosulfat

På den annen side, bakterier som produserer hydrogensulfid bekreftes ved nærvær av natriumtiosulfat (kilde for svovel) og jern-III-ammoniumcitrat, som er utvikleren av H ₂ S.

Bakterier som har enzymet thiosulfate reduktase har evnen til å virke ved å redusere natriumtiosulfat til stede, danner sulfitt og hydrogensulfid (H ₂ S).

Det siste er en fargeløs gass, men når den reagerer med jernsaltet, danner den jernholdig metallisk sulfid, som er en uoppløselig forbindelse (synlig svart bunnfall).

Imidlertid er evnen til å danne H ₂ er S med dette medium ikke særlig pålitelige, fordi noen lysin-decarboxylase negative bakterier er i stand til å produsere H ₂ S vil ikke danne den sorte bunnfall, som surheten av de mellom griper inn. Derfor anbefales det å sjekke med andre medier som inneholder jern.

Tolkning av testen

Lysin dekarboksylering

Rørene skal leses etter 24 timer med inkubasjonen, ellers er det fare for å tolke reaksjonen feil og rapportere falske negativer.

Det må huskes at den første reaksjonen som vil oppstå vil være gjæringen av glukose, derfor vil alle rørene etter 10 til 12 timer bli gule.

Hvis etter inkubasjonstid (24 timer) en gul bakgrunn med en lilla eller lilla overflate observeres, er reaksjonen negativ. Den lilla fargen på overflaten tilsvarer alkaliniseringen av mediet ved bruk av peptoner.

En positiv reaksjon er en der rørets bunn og overflate er helt lilla, det vil si at den går tilbake til den opprinnelige fargen.

Hvem som bestemmer testens positivitet er derfor basen eller bakgrunnen til mediet. Hvis du er i tvil om fargen, kan den sammenlignes med et ikke-inokulert LIA-rør.

Deaminering av lysin

Et rør som viser lysindeaminasjon vil ha en rødlig rødbrun overflate og en gul (syre) bakgrunn, eller hele røret vil ha en rødlig rødbrun farge.

Denne reaksjonen tolkes som negativ for lysindekarboksylering, men positiv for lysindeaminering.

Denne reaksjonen er definert og tolket på rammen.

Produksjon av hydrogensulfid (H

En positiv reaksjon blir observert ved utseendet til et svart bunnfall i hele eller deler av mediet. Vanligvis mellom kanten av skråkant og sokkel.

Hvis bunnfallet forekommer i hele røret, vil det ikke avsløre de andre reaksjonene som oppstår i midten.

Resultat av resultat

Ved tolking av testen blir resultatene registrert som følger:

Først blir avfasningen lest, deretter bunnen eller blokka, deretter produksjonen av H ₂ S, og til slutt produksjonen av gass.

Eksempel: K / A + (-). Dette betyr:

• K: Alkalisk ramme (lilla farge)
• A: Sur bakgrunn (gul), dvs. negativ dekarboksyleringsreaksjon og negativ deaminering.
• +: Produksjon av hydrogensulfid
• (-): Uten gass.

Forberedelse

Vei 35 g av det dehydrerte jernagarlysinmediet og løst det opp i en liter destillert vann.

Varm til agaren er fullstendig oppløst, for å gjøre dette, koke i et minutt under omrøring ofte. Fordel 4 ml av mediet i 13/100 prøverør med bomullshetter.

Steriliser i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter. Fjern fra autoklaven og la stå i vinkel slik at det er en dyp sokkel og en kort skråkant.

Oppbevares i kjøleskap 2-8 ° C. La det varme opp før du sår bakteriestammen.

Fargen på det dehydrerte mediet er beige og det tilberedte mediet er rødlig lilla.

Den endelige pH for det tilberedte mediet er 6,7 ± 0,2

Mediet blir gult ved pH 5,2 eller mindre, og er lilla ved pH 6,5 og over.

applikasjoner

Denne testen brukes sammen med andre biokjemiske tester for identifisering av baciller fra familien Enterobacteriaceae.

Mediet blir sådd med en rett sløyfe eller nål, en eller to punkteringer blir laget til bunnen av røret, og deretter blir overflaten av mediet scoret i en sikksakk.

Inkuber i 24 timer ved 35-37 ° C ved aerobiose. Om nødvendig lar det ruges i ytterligere 24 timer.

Det er hovedsakelig nyttig å differensiere laktosegegative Citrobacter-arter fra Salmonellas sp.

Kilde: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. utg. Redaksjonell Panamericana SA Argentina.

referanser

1. Mac Faddin J. (2003). Biokjemiske tester for identifisering av bakterier av klinisk betydning. 3. utg. Redaksjonell Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 utg. Redaksjonell Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. utg. Redaksjonell Panamericana SA Argentina.
4. Britannia Laboratories. Lysine jernagar. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
5. BD Laboratories. BBL Lysine Iron Agar Slants. 2007. Tilgjengelig på: bd.com
6. Valtek Laboratories. Medium LIA 2009. Tilgjengelig på: andinamedica.com