AGAR MRS: FOUNDATION, KLARGJØRING OG BRUK - BIOLOGI - 2026

Den agar MRS er et selektivt medium fast kultur brukes til isolering og telling av melkesyrebakterier, særlig av slekten Lactobacillus. Denne agaren ble opprettet i 1960 av Man, Rogosa og Sharpe, med samme navn, men på grunn av dens kompleksitet brukes ofte forkortelsen MRS.

Det er sammensatt av proteose pepton, kjøttekstrakt, gjærekstrakt, glukose, sorbitan monoleat, dipotassium fosfat, natriumacetat, ammonium citrat, magnesiumsulfat, mangansulfat og agar.

Mann Rogosa og Sharpe Agar (MRS) frøet med Lactobacillus sp. Kilde: Foto donert for denne artikkelen av forfatterne: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Foto tatt under undersøkelsen med tittelen: Evaluering av melkesyrebakterier og Bifidobacteria med probiotisk potensial i morsmelk og morsmelk til avføring .

Denne sammensetningen gjør det mulig å utvikle melkesyrebakterier riktig fra kliniske prøver, så som avføring, vaginal utslipp, orale prøver og morsmelk, så vel som meieri- og kjøttmat.

Det brukes ikke rutinemessig i kliniske laboratorier, fordi melkesyrebakterier sjelden er involvert i sykdomsprosesser. På området matmikrobiologi er bruken av MRS-agar imidlertid hyppigere.

På den annen side brukes dette mediet av noen forskningssentre som har som mål å studere melkesyrebakterier.

Basis

Man, Rogosa og Sharpe agar har en ganske sammensatt komposisjon. Ved å bryte ned funksjonen til hver av komponentene, kan grunnlaget forklares.

Proteose pepton, kjøttekstrakt, gjærekstrakt og glukose er næringsstoffer som gir kilden til karbon, nitrogen, vitaminer og mineraler som er nødvendige for bakterievekst. Videre er glukose den universelle energikilden som brukes i de fleste kulturmedier.

På den annen side, for å favorisere vekst av melkesyrebakterier, er tilstedeværelsen av kofaktorer (kationer) viktige i metabolismen av Lactobacillus og relaterte bakterier nødvendig; Disse forbindelsene er natrium-, magnesium- og mangansaltene.

På samme måte er sorbitan monoleat eller polysorbate 80 en viktig kilde til fettsyrer da de tas opp som næringsstoffer.

Videre virker sorbitanmonoleat og ammoniumcitrat ved å hemme utviklingen av den medfølgende floraen, spesielt Gram-negative bakterier, og gir den selektive karakteren til denne agaren.

Endelig er agar-agaren den som gir solid konsistens til mediet.

Det er andre varianter av Man Rogosa Sharpe agar; en av dem er supplert med cystein (MRSc), veldig nyttig for isolering av bifidobakterier, blant andre mikroorganismer. På den annen side er det MRS-mediet supplert med neomycin, paromomycin, nalidiksinsyre og litiumklorid, spesielt for selektiv telling av bifidobakterier i meieriprodukter.

Forberedelse

Vei ut 68,25 gram av det dehydrerte mediet og løst opp i en liter destillert vann. La stå i 5 minutter. For å løse opp fullstendig, vri til en varmekilde under omrøring ofte, og la koke i 1 til 2 minutter. Steriliser i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter.

Når du forlater autoklaven, la det stå noen minutter og fordele mens du fortsatt er varm i sterile petriskåler.

La stivne og vend inn platene, bestill dem i platehyller og sett i kjøleskap til bruk. La platene varme til romtemperatur før bruk.

PH i mediet bør være 6,4 ± 0,2. Noen kommersielle hus anbefaler pH mellom 5,5 og 5,9.

Det dehydrerte mediet er beige i fargen og tilberedt er mørkt rav.

Både det dehydrerte mediet og de tilberedte platene skal oppbevares ved 2-8 ° C.

applikasjoner

MRS agarplater kan overflateså (utmattelse eller Drigalski-slikkepott). Det kan også sås etter dybde. Plater bør inkuberes ved 37 ° C i microaerophilicity (4% O ₂ og 5-10% CO ₂ ) i 24 til 72 timer.

Såningsmetoden velges i henhold til hensikten (isolasjon eller telling).

Kjennetegn på koloniene

De presumptive koloniene av Lactobacillus vokser hvitaktig i fargen og har et mucoid eller kremaktig utseende på denne agaren. De må deretter identifiseres.

Isolering av melkesyrebakterier

For dette brukes overflatesåing. Prøvene som skal sås krever en tidligere prosedyre.

For morsmelkprøver anbefales det å sentrifugere 1 ml av prøven ved 14.000 o / min i 10 minutter for å fjerne fettlaget. 900 mL kastes, og i de resterende 100 mL suspenderes sedimentet og helles på overflaten av MRS-agaren. Det skal deretter fordeles jevnt med en Drigalski-slikkepott.

Når det gjelder avføringsprøver veies en (1) gram avføring og homogeniseres i 9 ml 0,1% sterilt peptonvann, tilsvarende en 1/10 fortynning. Deretter lages seriefortynninger inntil en endelig fortynning på 10 ^{-4 er oppnådd} .

Til sist ble 100 pl av den 10 ^-2 , 10 ^-3 og 10 ^-4 fortynninger blir tatt og hver fortynning ble podet på MRS-agar, fordele jevnt med en Drigalski spatel.

Melkesyrebakterier teller

I dette tilfellet blir såingen utført på dybde.

For morsmelkprøver tas 1 ml og legges i et sterilt konisk plastrør. MRS-agar tilsettes ved en temperatur på omtrent 40 ° C til et sluttvolum på 25 ml, hvorved man oppnår en homogen blanding. Deretter helles den i sterile petriskåler på en jevn måte og får stå til polymerisering.

For avføringsprøver blir det laget fortynninger, som tidligere beskrevet. Ta 1 ml av hver fortynning og legg den i sterile koniske plastrør. Smeltet MRS-agar tilsettes til et volum på 25 ml.

Blandingen av hver fortynning helles jevnt i sterile petriskåler. Til slutt får den hvile til polymerisering.

Koloni regner med Man Rogosa og Sharpe (MRS) agar. Kilde: Foto donert for denne artikkelen. Forfattere: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Foto tatt under forskningen med tittelen: Evaluering av melkesyrebakterier og Bifidobacteria med probiotisk potensial i morsmelk og spedbarnsavføring.

Forskningsnivå

Hver dag får studien av melkesyrebakterier mer interesse; Forskere søker spesielt å lære om nye stammer og deres potensial som startfermenter for standardisering i produksjon av meieriprodukter, blant annet bruk.

I denne forstand har Alvarado et al. (2007) brukte MRS-agar for å utføre en studie der de isolerte, identifiserte og karakteriserte melkesyrebakterier til stede i en håndverker Venezuelansk andean røkt ost.

I osten fant de tilstedeværelsen av bakterier fra Lactococcus og Lactobacillus-slekten, og konkluderte med at blandingene av isolerte stammer er egnede som startstammer ved fremstilling av oster fra pasteurisert melk.

På den annen side, Sánchez et al. (2017) brukte MRS-agar for å undersøke tilstedeværelsen av melkesyrebakterier i fordøyelseskanalen til smågriser, for å bruke dem som naturlige probiotika som øker produktiviteten til sunne smågriser.

Med dette mediet klarte de å isolere fire arter: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae og Pediococcus pentosaceus.

På samme måte Báez et al. (2019) brukte MRS-agar for å evaluere melkesyrebakterier (LAB) og bifidobakterier med probiotisk potensial i morsmelk og avføring fra spedbarn.

De klarte å isolere 11 BAL og 3 Bifidobacteria sp i morsmelk, og 8 BAL og 2 Bifidobacteria sp. i avføring. Alle møtte visse parametere som beviser dem som bakterier med probiotisk aktivitet.

Forfatterne konkluderte med at både morsmelk og avføring fra utelukkende ammet spedbarn fungerer som naturlige kilder til probiotiske bakterier.

QA

For å evaluere kvaliteten på MRS-agar, kontroller stammer som:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia colerei.

De forventede resultatene er tilfredsstillende vekst for de første 6 bakteriene, mens E. coli og Bacillus cereus må fullstendig hemmes.

referanser

1. Alvarado C, Chacón Z, Otoniel J, Guerrero B, López G. Isolasjon, identifikasjon og karakterisering av melkesyrebakterier fra en venezuelansk røkt andisk artisanost. Dens bruk som en startkultur. Ektiv. (Maracaibo) 2007; 17 (3): 301-308. Tilgjengelig på: scielo.org.
2. Sánchez H, Fabián F, Ochoa G, Alfaro Isolering av melkesyrebakterier fra fordøyelseskanalen til smågris. Pastor investiga. veterinæren. Peru 2017; 28 (3): 730-736. Tilgjengelig på: scielo.org.
3. Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Evaluering av melkesyrebakterier og Bifidobacteria med probiotisk potensial i morsmelk og avføring hos spedbarn i Acevedo kommune, Miranda 2017. Studenterarbeid for å kvalifisere seg til bachelorgraden i bioanalyse. University of Carabobo, Venezuela.
4. Britannia Laboratory. MRS agar. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
5. Wikipedia-bidragsytere. MRS agar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 10. januar 2018, 19:44 UTC. Tilgjengelig på: wikipedia.org Tilgang til 17. februar 2019.
6. Roy D. Media for isolering og oppregning av bifidobakterier i meieriprodukter. Int J Food Microbiol, 200128; 69 (3): 167-82.