MACCONKEY AGAR: BEGRUNNELSE, KLARGJØRING OG BRUK - BIOLOGI - 2025

Den MacConkey-agar er et fast medium som tillater den eksklusive isolering av Gram-negative bakterier. Av denne grunn er det et selektivt medium og gjør det også mulig å skille mellom laktosegjæring og ikke-fermenterende baciller, noe som gjør det til et differensialmedium. Det er et av de mest brukte kulturmediene i et mikrobiologilaboratorium.

Dette mediet brukes hovedsakelig for isolering av Gram-negative baciller som tilhører Enterobacteriaceae-familien, inkludert opportunistiske og enteropatogene arter.

MacConkey agar frøet med to typer bakterier. Laktosegjærende kolonier på venstre side, ikke-laktosegjærende kolonier på høyre side.

Det kan også brukes til å isolere andre enteriske baciller som lever i mage-tarmkanalen, men hører ikke til Enterobacteriaceae, som blant annet Aeromonas sp, Plesiomonas sp.

Til slutt kan den isolere andre ikke-glukosegjærende Gram-negative baciller som finnes i miljøet, vann eller jordsmonn, men som noen ganger kan være opportunistiske patogener som Pseudomonas sp, Acinetobacter sp, Alcaligenes sp, Chromobacterium violaceum, Stenotrophomonas maltophilia, blant andre.

Basis

MacConkey-agar

Grunnlaget for dette mediet kan forklares gjennom beskrivelsen av dets komponenter, siden hver enkelt har et formål som bestemmer en egenskap ved det.

Gallesalter og krystallfiolett

Slik sett har MacConkey agar en sammensatt sammensetning. Først av alt inneholder den gallesalter og krystallfiolett.

Disse elementene er ansvarlige for å hemme veksten av Gram-positive bakterier og noen raske Gram-negative baciller. I sin tur favoriserer det utviklingen av Gram-negative baciller som ikke er berørt av disse stoffene. Derfor er det et selektivt medium.

Det sies å være litt selektiv sammenlignet med andre medier som også hemmer veksten av Gram-positive bakterier og også de fleste Gram-negative bakterier.

Peptoner, polypektoner og laktose

Den inneholder stoffer som gir de nødvendige næringsstoffene til mikroorganismene som utvikler seg i dette miljøet, for eksempel peptoner, polypektoner og laktose.

Laktose er nøkkelpunktet for at mediet skal være et differensialmedium, siden mikroorganismer som har muligheten til å gjære laktose, vil utvikle sterke rosa kolonier.

Noen bakterier kan gjære laktose sakte eller svakt, utvikle blekrosa kolonier og forblir laktosepositive.

De som ikke gjærer laktose bruker peptoner som energikilde, og produserer ammoniakk og alkaliserer mediet. Av denne grunn er koloniene som har sin opprinnelse fargeløs eller gjennomsiktig.

PH-indikator

Fargeendringen oppnås gjennom en annen essensiell forbindelse som MacConkey agar har. Denne forbindelsen er pH-indikatoren, som i dette tilfellet er nøytral rød.

Fermentering av laktose genererer produksjon av blandede syrer. De surgjør mediet til en pH under 6,8.

Dette fører til at pH-indikatoren svinger mot en dyp rosa fargetone. Fargenes intensitet kan variere avhengig av den endelige pH-verdien.

Destillert vann, natriumklorid og agar

På den annen side inneholder den destillert vann og natriumklorid som gir middels hydrering og osmotisk balanse. Til slutt inneholder mediet agar, som er basen som gir konsistensen av fast medium.

Det tilberedte MacConkey agarmediet bør ha en endelig pH justert til 7,1 ± 0,2.

Forberedelse

For en liter MacConkey-agar må 50 g av dehydrert medium veies, deretter legges i en kolbe og oppløses i en liter destillert vann. Etter 10 minutters ståhet blir den oppvarmet, blanding hele tiden til den koker i 1 minutt.

Kolben blir deretter plassert i autoklaven og sterilisert ved 121 ° C i 20 minutter. På slutten av tiden fjernes den fra autoklaven og får avkjøle til den når en temperatur på 45 ° C, for senere å servere i sterile petriskåler inne i en laminær strømningshette eller foran Bunsen-brenneren.

La stivne og oppbevare i en omvendt plateholder og sett i kjøleskap i kjøleskap ved 2-8 ° C til bruk.

For å få en MacConkey-agar som hemmer svertevirkningen produsert av Proteus-slekten, brukes en lav-salt MacConkey-agar.

Bruk av konvensjonell MacConkey-agar

MacConkey Agar er inkludert i alle kulturmediasett som er arrangert for såing av kliniske prøver mottatt i laboratoriet. Det er også nyttig i matmikrobiologi og miljømikrobiologi.

Variasjonen av Gram-negative stenger som vokser i dette mediet, uttrykker fenotypiske egenskaper som er med på å stille en formodende diagnose av den aktuelle arten. For eksempel er størrelsen, fargen, konsistensen og lukten av koloniene noen av egenskapene som kan veilede.

I dette mediet produserer Escherichia coli, Klebsiella sp og Enterobacter sp arter sterke rosa kolonier, omgitt av en sone med bunnfalle.

Mens bakterier som Citrobacter sp, Providencia sp, Serratia sp og Hafnia sp kan virke fargeløse etter 24 timer eller blekrosa på 24-48 timer.

På samme måte produserer slektene Proteus, Edwadsiella, Salmonella og Shigella fargeløse eller gjennomsiktige kolonier.

Andre varianter av MacConkey agar

Det er andre varianter av MacConkey Agar som har spesifikke formål. De er nevnt nedenfor:

MacConkey agar med sorbitol

Dette mediet ble designet for å skille den enteropatogene stammen (enterohemorrhagic Escherichia coli O157: H7) fra resten av Escherichia coli-stammene.

Dette mediet bytter ut karbohydratlaktose for sorbitol. De enterohemorragiske E. coli-stammene O157: H7 skiller seg fra resten fordi de ikke gjærer sorbitol og derfor oppnås transparente kolonier, mens resten av E. coli-stammene gjærer sorbitol og koloniene er sterke rosa.

MacConkey agar uten krystallfiolett, heller ikke salt

Denne agaren skiller seg veldig fra den klassiske MacConkey-agaren, siden den ikke har en fiolett krystall og Gram-positive bakterier kan vokse.

På den annen side hemmer fraværet av salt utseendet som svermer på agaren produsert av noen enteriske baciller, for eksempel de av Proteus-slekten, og letter dermed isoleringen av alle bakteriene som er til stede, inkludert Gram-positive bakterier.

MacConkey agar med cefoperazon

Denne varianten av MacConkey agar ble designet for å begynne med å isolere Laribacter hongkongensis og ble senere funnet å være nyttig for isolering av Arcobacter butzleri. Begge er lett buede Gram-negative stenger som er resistente mot cefoperazon.

Disse bakteriene har nylig blitt koblet til å forårsake gastroenteritt og ervervet diaré hos asiatiske og europeiske individer, og fremstå som to kraftige nye patogener.

Antibiotikumet gjør det mulig å hemme den medfølgende floraen i mage-tarmkanalen, som favoriserer utviklingen av disse bakteriene, og forhindrer dem fra å gå upåaktet hen, siden de krever 72 timer å vokse.

MacConkey agar tilberedt med sjøvann ved 10% v / v

Denne varianten er nyttig for evaluering av bakterielle sanitære indikatorer for fekal forurensning, inkludert totale coliforms og fecal coliforms i rekreasjonssalte saltvann (strender og bukter).

Cortez et al i 2013 demonstrerte at mediet som ble fremstilt på denne måten, øker utvinningen av disse mikroorganismer i saltvannsmiljøet betydelig, sammenlignet med bruken av MacConkey agar tilberedt med destillert vann.

Dette skyldes det faktum at det modifiserte mediet stimulerer veksten av bakterier som er fysiologisk i en latensstilstand "levedyktig, men ikke-kultiverbar", derfor er de ikke utvinnbare i konvensjonelle medier.

referanser

1. Lau SK, Woo PC, Hui WT, et al. Bruk av cefoperazon MacConkey agar for selektiv isolasjon av Laribacter hongkongensis. J Clin Microbiol. 2003; 41 (10): 4839-41.
2. MacConkey-agar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 4 apr 2018, 18:16 UTC. 29. des 2018, 15:22 en.wikipedia.org
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 utg. Argentina. Redaksjonell Panamericana SA
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. (5. utg.). Argentina, Redaksjonelt Panamericana SA
5. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Effekt av kulturmedier tilberedt med sjøvann på helseindikatorer i marine farvann i spaene i Chichiriviche, delstaten Falcón, Venezuela. Rev Soc Ven Microbiol 2013; 33: 122-128
6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktisk klinisk mikrobiologi. University of Cadiz, 2. utgave. UCA Publications Service.