POTETDEKSTROSEAGAR: BEGRUNNELSE, TILBEREDNING OG BRUK - BIOLOGI - 2026

Den potetdekstroseagar er et medium, fast, ikke - selektiv cellekultur. Bakterie- og sopparter kan vokse i den, men bruken er spesielt indikert for isolering av filamentøse sopp og gjær. Det er også kjent som PDA-medium for det engelske uttrykket Potato Dextrose Agar.

Det er spesielt nyttig for isolering av fytopatogene sopp, det vil si de som påvirker planter. For å så prøvene fra infiserte grønnsaker kan andre midler som Sabouraud-agar eller malta-agar benyttes, men for rutinemessig bruk foretrekkes potetekstrosagar, ettersom større sporulering oppnås.

Aspergillus niger og Sinemas på henholdsvis potetdekstroseagar. Kilde: Alextrevelian 006 på engelsk Wikipedia / Joselrojas

Det brukes også til telling av soppkolonier i prøver av kosmetikk, farmasøytiske produkter og noen meierismat. På samme måte er det egnet til å så prøver på hudskraping på jakt etter dermatofytter, som vokser veldig godt i dette mediet, og utvikler sine karakteristiske pigmenter.

Potetdekstrosemedium er et veldig enkelt og enkelt medium å tilberede på laboratoriet. Den inneholder, som navnet tilsier, infusjon av potet, dekstrose og agar-agar. I tillegg kan hemmende stoffer tilsettes for å forhindre bakterievekst og øke selektiviteten for sopparter.

Basis

Potetdekstroseagar er et kulturmedium som gir næringselementene som er nødvendige for utvikling av filamentøse sopp og gjær.

Kombinasjonen av infusjon av potet og glukose gir den perfekte energikilden for en tilfredsstillende vekst av sopp. Mens agaren er den som gir konsistensen til mediet.

Mediet alene hemmer ikke veksten av bakterier, derfor er det et ikke-selektivt medium. For å gjøre det selektiv trenger det tilsetning av hemmende stoffer som vinsyre eller antibiotika.

Forberedelse

-Hjemmelaget (ikke-kommersiell) tilberedning av potetdekstroseagar

Petri-retter

Det er forberedt på følgende måte:

I første omgang vaskes potetene veldig godt, og fjerner jorda de har. De skjæres i tynne skiver med alt og skall. 200 gram poteter veies og kokes i en liter destillert vann i en halv time.

På slutten av tiden, filtrer eller sil alt preparatet gjennom en osteklut.

Den oppnådde væske fullføres med destillert vann opp til en liter. 20 g agar-agar og 20 g dekstrose tilsettes til infusjonen, blandes godt og autoklaveres ved 121 ° C ved 15 kg trykk i 15 minutter.

La avkjøle seg til 50 ° C og server i sterile petriskåler. De tilberedte platene lagres i kjøleskap.

kiler

Poteter dextrose agar kiler kan også tilberedes.

I dette tilfellet, før sterilisering i autoklaven, blir 12 til 15 ml av mediet plassert i rør, senere autoklaveres de og når de lar det ligge på spesielle støtter til det stivner. Oppbevares i kjøleskap.

Mediet forblir ved en pH på 5,6 ± 0,2, men noen laboratorier tilfører 10% vinsyre for å senke pH til 3,1 ± 0,1 for å hemme bakterievekst.

På samme måte foretrekker andre laboratorier å legge til antibiotika for å gjøre det selektivt for dyrking av sopp og forhindre bakterievekst.

-Kommersiell tilberedning av potetdekstroseagar

Vei ut 39 g av det kommersielt tilgjengelige dehydrerte mediet og oppløst i en liter destillert vann. La det hvile i 5 minutter.

Blandingen blir oppvarmet under hyppig omrøring til den er helt oppløst. Deretter steriliseres den i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter.

Plater eller kiler kan tilberedes. Fortsett som beskrevet ovenfor.

PH forblir på 5,6 ± 0,2. Hvis en pH på 3,1 er ønsket, bør 14 ml steril 20% vinsyre tilsettes før servering til platene.

Det rå mediet er beige og det tilberedte mediet er lys rav med et lett skyet eller opalescent utseende.

applikasjoner

Prosess for såing av planteprøver på potetdekstrosagar

-For flekkete blader

Bladene skjæres i biter.

I et 50 cm glass med 50% alkohol, legg bladene (flekkete og sunne stykker) for å desinfisere overflaten i 20 til 30 sekunder. Kast alkoholen og tilsett 20% natriumhypokloritt i 40 til 50 sekunder hvis de er tynne blader, og øk tiden til 80 sekunder hvis det er bjeff og ved.

Kast natriumhypokloritt og ta de desinfiserte delene med en steril tang og legg dem på overflaten av mediet (maks. 10 stykker). Still inn datoen og inkuber på 20-30 ° C.

-For frukt og knoller

Hvis frukten er kjøttfull, åpner du frukten som er påvirket av soppen og tar biter med en steril skalpell, både fra de syke og sunne delene, og legg dem på overflaten av agaren.

Hvis frukten er sitrus, for eksempel en sitron eller en appelsin, må den åpnes og frøene deres sås.

Når fruktens overflate påvirkes og sporer blir observert, er det ideelle å bruke rivemetoden på platen; Dette består av å berøre sporene med en sterilisert og avkjølt "L" -formet slikkepott, og deretter lage en sikksakkfrø 2 til 3 ganger på agaren.

-For korn

De desinfiseres som beskrevet i bladene og legges senere på agaren.

-For grener og stengler

Barken skrapes av og senere tas deler av den sunne og syke delen og sås direkte på agaren.

De såede plater inkuberes aerobt ved 20-30 ° C i 72 timer.

Prosess for å så prøver på hud, hår eller negler på potetdekstroseagar

Prøven bør tas med et skalpelblad nr. 11, enten for å kutte berørt hår, hudskala eller negler på jakt etter dermatofytter. Før prøven tas, bør området desinfiseres med 70% alkohol.

-Skinprøve

I skjellete lesjoner bør kanten av lesjonen skrapes, da soppen mer sannsynlig er å finne der.

Ved ekssudative lesjoner tas prøven med en tørr eller våt vattpinne. Så umiddelbart på potetdekstroseagar eller Sabouraud agar. Unngå transportmiddel.

En annen metode for prøvetaking er gjennom teppet firkanteteknikken til Mariat og Adan Campos. I dette tilfellet blir det berørte området gnidd 5 ganger med et stykke steril ull for senere dyrking.

Prøven kan plasseres direkte i kulturmediet.

-Hårprøve

Avhengig av patologien, kan den berørte delen bli avskåret eller opphevet. Plasser prøven i kulturmediet.

-Negleprøve

En spesifikk del av den berørte neglen kan skrapes eller kuttes. Det vil avhenge av type skade.

Skjær prøven i 1 mm biter før såing for å øke sannsynligheten for kontakt av soppen med kulturmediet.

Identifikasjonsprosedyre

Koloniene oppnådd i platen isoleres i rør som inneholder potetdekstroseagar for å utføre den makroskopiske studien av koloniene (utseende, farge, konsistens, utviklingsgrad.

Den mikroskopiske studien (observasjon av strukturer og deres formasjoner) kan gjøres ved mikrokulturer eller direkte observasjon under mikroskopet mellom lysbildet og lysbildet.

Kolonitelling

Dette mediet kan også brukes til å bestemme sopp- og gjærbelastningen som er til stede i plante-, mat-, kosmetikk- eller medikamentprøver. For dette formålet brukes potetekstrosagar supplert med antibiotika, slik som: (kloramfenikol, klortotrasyklin eller begge deler).

Hell 1 ml av prøven - helst fortynnet - i en steril og tom petriskål, smelt deretter en pute potetdekstroseagar og la den avkjøles til 45 ° C. Hell på petriskålen og roter til den er homogenisert. La den hvile til den stivner.

Inkuber aerobt ved 20-25 ° C (muggsopp) eller 30-32 ° C (gjær) i 5 til 7 dager eller mer, avhengig av type sopp som er søkt og prøvetype. To plater kan brukes til å inkuberes i begge temperaturområder.

Telling av soppkolonier i en matprøve. Potetdekstroseagar supplert med antibiotika. Kilde: Pxhere.com foto / 777267

Opprettholdelse av soppstammer

Potetdekstrose Agar kan brukes til å opprettholde levedyktige soppstammer i flere år.

For dette dyrkes soppen på kiler av potetdekstroseagar, og når soppen først har vokst, er den dekket med mineralolje. Oljen skal steriliseres i en autoklav i 45 minutter, og ha en viskositet på omtrent 300 til 330 Saybolt. Oljen skal ligge 1 til 2 cm over spissens spiss.

QA

Ta fra 1 til 2 plater og inkuber dem fra 25 ° C i 48 timer eller ved 20 ° C i 96 timer. En god sterilitetskontroll er en der koloniutviklingen ikke blir observert.

Kjente eller sertifiserte kontrollstammer kan også brukes slik som:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. Det forventes god vekst i alle tilfeller.

referanser

1. Britannia Laboratories. Glukoseagarpotet. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
2. Neogen Laboratories. Potet dextrose agar. Tilgjengelig på: foodsafety.neogen.com
3. Insumolab Laboratory. Potet dextrose agar. Tilgjengelig på: insumolab.cl
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 utg. Redaksjonell Panamericana SA Argentina.
5. Casas-Rincón G. Generell mykologi. 1994. 2. utg. Central University of Venezuela, Library Editions. Venezuela Caracas.
6. Aceituno M. Evaluering av den mikrobiologiske kvaliteten i øyenskygge, kompakt pulvertype av et nasjonalt produksjonslaboratorium, i henhold til referansemetoden Pharmacopea Usp 2005. Oppgave for å kvalifisere til tittelen Pharmaceutical Chemist. Universitetet i San Carlos i Guatemala.
7. Cuétara M. Behandling av overflateprøver. Iberoamerican Journal of Mycology. 2007; s. 1-12