SABOURAUD AGAR: FUNDAMENTERING, KLARGJØRING OG BRUK - BIOLOGI - 2026

Den agar Sabouraud , også kjent som Sabouraud-dekstroseagar, er et fast medium, spesielt anriket for isolering og utvikling av sopp, så som gjær, muggsopp og dermatofyter.

Derfor kan dette mediet ikke mangle i et mikrobiologisk laboratorium for å undersøke tilstedeværelsen av patogene eller opportunistiske sopp, verken fra kliniske eller ikke-kliniske prøver. På samme måte er det også ideelt for vekst av filamentøse bakterier som Streptomyces og Nocardias. Bruken av den er veldig bred, da den kan brukes i menneskelig, dyre-, plante- og industriell mykologi.

A. Usyret Sabouraud agar. B. Sabouraud agar frøet med en gjær. Kilde: Bilder tatt av forfatteren MSc. Marielsa gil

Dette mediet ble opprettet i 1896 av den fremtredende hudlege Raimond Sabouraud, som ble en verdenskjent spesialist i sykdommer i hodebunnen, hovedsakelig forårsaket av dermatofytter.

Opprettelsen av den var så viktig at den har blitt brukt siden den gang og forblir i dag, selv om den er endret.

Selv om det er spesielt for sopp, kan bakterier vokse i dette mediet. Derfor er det nødvendig med inkludering av antibiotika i preparater for preparater med blandet flora for å hemme veksten av bakteriefloraen som kan være til stede.

Valget av antibiotika må gjøres nøye og ta hensyn til hvilken type sopp som skal utvinnes, siden noen hemmes i nærvær av visse stoffer.

Basis

Sabouraud dextrose agar er et medium som i sin opprinnelige formulering er svakt selektiv, på grunn av den sure pH-verdien på 5,6 ± 0,2, men bakterier kan imidlertid fortsatt utvikle seg, hovedsakelig i langvarige inkubasjoner.

Mediet inneholder kaseinpepton og fordøyelse i bukspyttkjertelen i dyrevev, som gir kilden til karbon og nitrogen for vekst av mikroorganismer.

Den inneholder også en høy konsentrasjon av glukose, som fungerer som en energikilde, og fremmer vekst av sopp over bakterier. Alt dette blandet med agar-agar, en komponent som gir den riktig konsistens.

På den annen side kan Sabouraud dextrose agar være selektiv hvis det tilsettes antibiotika.

Med antibiotika er det spesielt nyttig i prøver av sår, åpne sår eller noen prøver der det er mistanke om stor bakteriell forurensning.

Mest brukte kombinasjoner av Sabouraud dextrose agar med antibiotika

-Saburaud-agar med kloramfenikol: ideell for utvinning av gjær og trådformet sopp.

- Sabouraud agar med gentamicin og kloramfenikol: nesten alle filamentøse sopp og gjær vokser i dette mediet, og det hemmer et stort antall bakterier, inkludert Enterobacteria, Pseudomonas og Staphylococcus.

- Sabouraud agar med cykloheksimid: det er spesielt nyttig for prøver fra huden eller luftveiene, så lenge mistanken er dimorf.

Sykloheksimid bør brukes med forsiktighet; Selv om det brukes til å hemme veksten av ikke-patogene eller miljømessige sopp og gjær som kan være til stede som forurensninger i en prøve, hemmer det også veksten av noen sopp som Cryptococcus neoformans, Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium sp og andre opportunistiske sopp.

- Sabouraud agar med kloramfenikol pluss cykloheksimid: det brukes hovedsakelig for å isolere dermatofytter og dimorfe sopp. Det har den ulempen at den hemmer noen arter av opportunistiske sopp som Candida no albicans, Aspergillus, Zygomycetes eller C. neoformans.

- Sabouraud agar med kloramfenikol, streptomycin, penicillin G og cykloheksimid: det er ideelt for prøver som er ekstremt forurenset med bakterier og saprofytiske sopp, men har den ulempen at det hemmer veksten av Actinomyces og Nocardias, i tillegg til de opportunistiske soppene som er nevnt ovenfor.

Forberedelse

Hvis du har ingrediensene hver for seg, kan de tilberedes på følgende måte:

Sabouraud dextrose agar

Å veie:

- 40 gr dekstrose

- 10 g pepton

- 15 gr agar-agar

- Mål 1000 ml destillert vann

Alle ingrediensene blandes, pH justeres til 5,6. Oppløste stoffer oppløses ved å koke, 20 ml av mediet fordeles i rør på 25 x 150 mm, uten kant og fortrinnsvis med en bomullshette.

Rør med bomullshette. Kilde: Foto tatt av forfatteren MSc. Marielsa gil

Andre rørstørrelser kan også brukes, avhengig av tilgjengeligheten.

De autoklaveres i 10 minutter ved en trykkatmosfære (121 ° C). Autoklaveringstiden bør ikke overskrides. Når du forlater autoklaven skrå rørene ved hjelp av en støtte til de stivner i et fløytebeb.

En annen måte er å løse opp ingrediensene ved å varme opp til det koker. Autoklaver i 10 minutter i samme hetteglass og fordel deretter 20 ml i petriskåler.

Hvis du har et Sabouraud dextrose agar-medium som allerede inneholder alle ingrediensene, fortsett å veie mengden som er spesifisert av det kommersielle selskapet for en liter vann. Resten av trinnene er de samme som beskrevet ovenfor.

Sabouraud dextrose agar (modifikasjon av Emmons)

Å veie:

- 20 gr dekstrose

- 10 g pepton

- 17 gr agar-agar

- Mål 1000 ml destillert vann

Alle ingrediensene blandes, pH justeres til 6,9. Fortsett på samme måte som forrige sak.

Det er kommersielle hus som tilbyr mediet med alle ingrediensene. I dette tilfellet må du veie og forberede som beskrevet på innsatsen.

Sabouraud dextrose agar (Emmons modification) med kloramfenikol

Kloramfenikol lagerløsning

- Vei 500 mg kloramfenikolbase

- Mål 100 ml 95% etanol

- Bland

Sabouraud dextrose agar medium (Emmons) tilberedes som tidligere beskrevet, og i tillegg tilsettes 10 ml kloramfenikol stamoppløsning for hver liter medium før autoklavering.

Sabouraud Emmons Dextrose Agar med Cycloheximide

Cycloheximide Stock Solution

- Vei 5 gram cykloheksimid

- Mål 100 ml aceton

- Bland

Sabouraud dextrose agar medium (Emmons) tilberedes som allerede beskrevet, og i tillegg tilsettes 10 ml cycloheximide stamoppløsning for hver liter medium før autoklavering.

Sabouraud dextrose agar (Emmons) med kloramfenikol og cykloheksimid

Sabouraud dextrose agar medium (Emmons) blir fremstilt som tidligere beskrevet, og i tillegg tilsettes 10 ml kloramfenikol stamoppløsning og 10 ml cycloheximide stamoppløsning for autoklavering for hver liter medium.

Andre antibiotika som kan tilsettes

20 000 til 60 000 enheter penicillin per liter medium.

30 mg streptomycin per liter medium.

Begge må innarbeides etter at mediet er autoklavert, lett avkjølt (50-55 ° C).

0,04 g neomycin per liter medium.

0,04 g gentamicin per liter medium.

Spesielle hensyn

For sikkerhets skyld er det foretrukket å så Sabouraud dextrose agar i kileformede rør (skråstilt i fløytebeb) i stedet for i petriskåler, for å unngå spredning og innånding av sporer.

Det er viktig at Sabouraud agarrør er dekket med bomull og ikke med en skrukork, ettersom det har vist seg at semi-anaerobe forhold hindrer spordannelse i noen stammer, for eksempel Coccidioides immitis. Dessuten er de fleste sopp aerobe.

I tilfelle bruk av skrukork, ikke lukk hermetisk.

QA

Det forberedte mediet må gjennomgå kvalitetskontroll for å bekrefte at det fungerer. For dette blir visse kontrollstammer sådd.

For Sabouraud dextrose agar med kloramfenikol kan ATCC-stammer av Candida albicans brukes, som må ha utmerket vekst. En annen plate er inokulert med Escherichia coli-stammer, som må inhiberes fullstendig.

En uinokulert plate blir også inkubert der ingen mikroorganismer skal vokse.

For Sabouraud dextrose agar med kloramfenikol og cykloheksimid kan stammer av Trichophyton mentagrophytes brukes, og de bør utvikle seg godt. En annen plate er inokulert med en stamme av Aspergillus flavus, der det må være liten eller ingen vekst. I tillegg inkuberes en uinokulert plate for å demonstrere dens sterilitet.

For Sabouraud dextrose agar med cycloheximide brukes stammer av Candida albicans, Trichophyton rubrum eller Microsporum canis, som må vise god vekst.

På samme måte er en stamme av Aspergillus flavus inkludert, som viser liten eller ingen vekst. Inkuber til slutt en uinokulert plate for å kontrollere sterilitet.

applikasjoner

Primær kultur

Klassisk Sabouraud dextrose agar inneholder 4 gram dekstrose og er utmerket som et primært isolasjonsmedium, da det viser den karakteristiske morfologien til hver sopp.

Det er også utmerket for å demonstrere pigmentproduksjon. Imidlertid er det ikke det beste middelet til å observere sporulering.

Det anbefales heller ikke å dyrke Blastomyces dermatitidis, som er hemmet av den høye konsentrasjonen av glukose.

På den annen side, for dyrking må visse hensyn tas i betraktning.

Noen sopp vokser best ved romtemperatur, for eksempel muggsopp, andre vokser med suksess ved 37 ° C, for eksempel noen gjær, og andre kan vokse ved begge temperaturer (dimorf sopp).

Av denne grunn er det noen ganger nødvendig å bruke flere Sabouraud agarplater for den samme prøven, siden duplisering av såing ofte gjøres for å inkubere en plate ved romtemperatur og en annen ved 37 ° C.

For eksempel blir Sporothrix schenckii sådd i to plater; den ene inkuberes ved romtemperatur for å oppnå formfasen og den andre inkuberes ved 37 ° C for å oppnå gjærfasen, men i sistnevnte er det nødvendig å tilsette 5% blod til mediet.

I andre tilfeller, for eksempel mycetomprøver, blir to Sabouraud-agarplater frøet, den ene med kloramfenikol og den andre med cykloheksimid. Den første vil tillate vekst av mycotoma-forårsakende midler med soppopprinnelse (Eumycetoma) og de andre forårsakende midlene av mycetoma av bakteriell opprinnelse, for eksempel actinomycetomas.

sporulation

Emmons Modified Sabouraud Dextrose Agar inneholder 2 gram dekstrose og brukes ikke bare til isolering, men også til sporulering og konservering av sopp.

I dette mediet kan stammer av Blastomyces dermatitidis utvinnes.

Bevaring

For å bevare soppkulturer kan de oppbevares i kjøleskap (2-8 ° C). Konserveringstiden kan variere mellom 2 til 8 uker. Etter denne tiden må de subkultureres for å gjenta prosessen.

Noen sopp holder best ved romtemperatur, for eksempel Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum og Microsporum audounii.

Vedlikeholdet av stammen kan forlenges for å unngå pleomorfisme hvis dekstrosen fjernes helt fra agaren og hvis mengden agar i mediet reduseres for å unngå tørrhet.

mikrokulterer

For å identifisere noen filamentøse sopp er det nødvendig å utføre mikrokulturer ved bruk av Sabouraud agar eller andre spesielle midler for å observere strukturer for seksuell og aseksuell reproduksjon.

I menneskets mykologi

Det brukes hovedsakelig til diagnose av soppsykdommer, spesielt de som påvirker huden og dens vedlegg (hår og negler).

Prøvene kan være sekresjoner, ekssudater, hud, hår, negler, sputum, CSF eller urin. Vanligvis isolerte patogener er dermatofytter, sopp som forårsaker subkutane og systemiske mykoser.

Dyremykologi

Dyr påvirkes ofte av soppinfeksjoner, derfor er Sabouraud-agar like nyttig i dyremykologi som hos mennesker.

Dermatofytter kan for eksempel ofte påvirke dyr. Slik er tilfellet med Microsporum canis var distortum, som ofte smitter hunder, katter, hester, griser og aper. På samme måte infiserer Microsporum gypseum hunder, katter og husdyr.

Fugler som kyllinger, haner og kyllinger påvirkes av Microsporum gallinae.

Andre sopp, som Zymonema farciminosum, er også årsaken til sykdom hos dyr, hovedsakelig hos hester, muldyr og esler, og produserer betydelig betennelse i lymfekarene.

Sporothrix schenkii og Histoplasma capsulatum påvirker husdyr og mennesker.

Miljømykologi

Mange sykdomsfremkallende eller opportunistiske sopp kan konsentrere seg til enhver tid i et gitt miljø, spesielt i operasjonsrom og intensivavdelinger (ICU) på klinikker og sykehus. Derfor er det nødvendig å utføre en kontroll av dem.

Andre sårbare rom er biblioteker og gamle bygninger, som kan påvirkes av konsentrasjonen av miljøsvampe.

I miljøundersøkelser brukes Sabouraud dextrose agar for isolering av sopp.

Industriell mykologi

Sabouraud dextrose agar kan ikke være fraværende for studier av forurensende sopp i produksjonen av blant annet kosmetikk, mat, drikke, lær, tekstiler.

Plantemykologi

Planter lider også av sykdommer forårsaket av sopp, som påvirker forskjellige deler av planten, som til og med kan avslutte høsten, og forårsake store tap i landbruket.

referanser

1. Cuenca M, Gadea I, Martín E, Pemán J, Pontón J, Rodríguez (2006). Mikrobiologisk diagnose av mykoser og soppdrepende sensitivitetsstudier. Anbefalinger fra den spanske foreningen for infeksjonssykdommer og klinisk mikrobiologi. Tilgjengelig på: coesant-seimc.org
2. ValteK Laboratory. (2009). Sabouraud dextrose agar med cycloheximide. Tilgjengelig på: andinamedica.com.
3. Navarro O. (2013). Veterinær mykologi. National Agrarian University. Nicaragua.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 utg. Argentina. Redaksjonell Panamericana SA
5. Casas-Rincón G. Generell mykologi. 1994. 2. utg. Central University of Venezuela, Library Editions. Venezuela Caracas.