Den mannitol salt-agar eller manitol salt er et fast medium selektivt og differensielt kultur. Det ble opprettet av Chapman for isolering av sykdomsfremkallende Gram-positive kokker, spesielt Staphylococcus aureus.
Imidlertid er det også nyttig å isolere Staphylococus epidermidis, som noen ganger kan være til stede som et opportunistisk patogen, og Staphylococcus saprophyticus, et anerkjent urinpatogen, blant andre arter.
A. Fiola med tilberedt salt mannitol agar medium. B. Saltede mannitolagarplater frøet med fermenterende og ikke-fermenterende mannitolbakteriestammer. Kilde: A og B: Bilder tatt av forfatteren MSc. Marielsa Gil.
Noen Enterococcus er i stand til å vokse på dette mediet, så vel som visse Gram-positive spordannende stenger.
Dette mediet er veldig nyttig i analysen av kliniske prøver, men det brukes også i den mikrobiologiske studien av mat og i kvalitetskontrollen av industriprodukter, for eksempel kosmetikk, medisiner, blant andre.
Salt Mannitol Agar består av ekstrakter og peptoner fra storfekjøtt, triptein, mannitol, natriumklorid, fenolrød og agar.
Basis
Mannitol agar er selektiv takket være den høye saltkonsentrasjonen. Saltholdighet fungerer som et hemmende stoff og forhindrer vekst av Gram-negative bakterier.
Det er også forskjellig på grunn av tilstedeværelsen av karbohydratmannitol og fenolrød pH-indikator. Fra dette produserer bakteriene som er i stand til å fermentere mannitol, syrer, surgjør mediet, gjør koloniene og mediet gult.
På den annen side vokser kolonier som ikke gjærer mannitol i mediet som tar næringsstoffene som leveres av kjøttekstrakter og peptoner og triptein. Derfra trekker bakteriene ut karbon, nitrogen, vitaminer og mineraler som er nødvendige for deres vekst.
Koloniene i dette tilfellet kan være svake eller sterke rosa, og mediet forblir den samme fargen eller endres til fuchsia.
Agar er stoffet som gir konsistensen til mediet.
Forberedelse
For å fremstille en liter salt mannitol-agar veies 111 g av det dehydrerte mediet fra det foretrukne kommersielle selskapet og løses i 1000 ml destillert vann ved bruk av en kolbe.
Varme tilføres med hyppig omrøring av mediet for å forbedre oppløsningsprosessen. Kok opp et minutt.
Kolben plasseres i autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter.
På slutten av tiden, fjern hetteglasset fra autoklaven, la det hvile og server mellom 15 til 20 ml på sterile petriskåler når temperaturen er omtrent 50 til 55 ° C.
Det er lov å stivne, bestilles på en omvendt måte i plaqueros og oppbevares i kjøleskap til bruk. Før du så en prøve, vent til platen når romtemperatur.
Platene blir sådd ved streking eller ved overflatesåing med en drigalski-slikkepott. Den endelige pH for det tilberedte mediet må være 7,4 ± 0,2
Fargen på det dehydrerte mediet er lys beige og fargen på det tilberedte mediet er oransjerød.
applikasjoner
På grunn av sin høye selektivitet, er dette mediet ideelt for å så prøver med blandet flora der tilstedeværelsen av Staphylococus aureus, som hovedpatogenet i denne slekten, blir søkt.
I denne forstand er en av de hyppigste bruksområdene i den mikrobiologiske analysen av svelgeksudater og prøver fra nasal utflod, spesielt for å påvise asymptomatiske bærere av S. aureus.
Noen land har implementert denne analysen som et obligatorisk krav for folk som ønsker å jobbe som matleverandører.
Denne kontrollen forhindrer kontrahering av mennesker som er bærere av S. aureus, og unngår dermed massiv matforgiftning, på grunn av inntak av mat forurenset med stafylokokk enterotoksin.
Det kan også inkluderes i sådd av sårinfeksjoner, blodkulturer, CSF, bronkoalveolar skylling, blant andre.
Saltet mannitol-agar er nyttig for å isolere kolonier fra urinkulturer fra CLED-agar eller blodagar hvis Gram har avslørt Gram-positive klynger av kokker.
Det gjelder også i mikrobiologisk analyse av mat, drikkevann, jordsmonn, blant andre bruksområder.
QA
Når en gruppe tallerkener med salt mannitolagar er tilberedt, anbefales det å utføre en kvalitetskontroll. Kontrollstammer blir sådd for å vise om det er vekst eller ikke.
Kjente Staphylococcus aureus-stammer kan brukes som en positiv kontroll. Den skal vokse tilfredsstillende med å utvikle gule kolonier, og mediet blir også den samme fargen.
På samme måte er det praktisk å inkludere en kjent stamme av Staphylococcus epidermidis. Det skal vokse tilfredsstillende med å utvikle rosa kolonier, og mediet forblir i samme farge eller mørkere til en sterkere rosa.
Som negativ kontroll brukes stammer som ikke skal vokse på dette mediet. For eksempel kan en kjent stamme av Escherichia coli eller Klebsiella pneumoniae dyrkes. Det forventede resultatet er fullstendig hemming, det vil si ingen vekst.
I tillegg må en uinokulert plate inkuberes. I den skal det ikke være noen vekst eller fargeendring.
Det er viktig at platen ikke brukes hvis det er tegn på forverring, som for eksempel forurensning, dehydrering, misfarging.
Siste tanker
Når du bruker salt mannitol agar medium, er det noen viktige aspekter å vurdere:
- Å få en vekst av gule kolonier indikerer ikke at det er Staphylococcus aureus. Det må huskes at noen stammer av Enterococcus er i stand til å vokse i dette mediet og fermentere mannitol, så vel som visse spordannende Gram-positive stenger.
Derfor er det viktig å utføre en Gram på kolonien og en test for katalase.
-På den annen side må det vurderes at andre Staphylococcus-arter enn aureus også er i stand til å gjære mannitol. Derfor er det viktig å subkulturere kolonien til en næringsbuljong for å ta derfra og utføre koagulasetesten.
Blant Staphylococcus-artene av klinisk betydning for mennesker som gjærer mannitol, er: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum, blant andre.
Andre kan gi en variabel reaksjon, det vil si noen ganger positive og noen ganger negative. Noen er S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius, blant andre.
-Det anbefales ikke å ta kolonier direkte fra mannitol agar for å utføre koagulasetesten, siden den høye saltkonsentrasjonen i mediet kan forstyrre resultatet.
-Finalt anbefales det å inkubere platene frøset med salt mannitol i opptil 48 timer, siden noen stammer av S. aureus sakte kan gjære mannitol, selv om dette ikke er veldig hyppig.
referanser
- Britannia Laboratories. Salt mannitol-agar. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
- "Salt mannitol-agar". Wikipedia, The Free Encyclopedia. 31 okt 2018, 19:08 UTC. 17. januar 2019, 20:55, tilgjengelig på: es.wikipedia.org.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. (5. utg.). Argentina, Redaksjonelt Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 utg. Argentina. Redaksjonell Panamericana SA
- BD Laboratories. BD Mannitol Salt Agar. 2013. Tilgjengelig på: bd.com.