Den agar Salmonella Shigella også kjent som SS-agar er et selektivt og differensielt medium moderat, spesielt utviklet for isolering av ropatogene bakterier av slektene Salmonella og Shigella, både miljøprøver slik som klinisk.
SS-agar har en sammensatt sammensetning; Det består av kjøttekstrakt, pepton, laktose, gallesalter, natriumsitrat, natriumtiosulfat, jernsitrat, agar, nøytralt rødt, lysegrønt og destillert vann. Gitt sin store selektivitet, kan prøver med rikelig blandet flora sås.
SS-agar med kolonier av Salmonella sp. Kilde: Manurx27, fra Wikimedia Commons
I mikrobiologilaboratorier er Salmonella-Shigella-mediet mye brukt for å undersøke tilstedeværelsen av Salmonella og Shigella i prøver med diaré avføring, kloakk, drikkevann og mat.
Noen ganger er det nødvendig å bruke pre-anrikningsbuljong (laktosebuljong) og anrikningsbuljong (selenitt cystinbuljong) for å gjenvinne stammer av Salmonella.
Disse trinnene er nødvendige når det er mistanke om eksistensen av Salmonella i veldig liten mengde, eller der belastningen kan misbrukes av prosesser som er typiske for industriell produksjon, hovedsakelig bearbeidede matvarer. Det anbefales også å berike avføringsprøver fra pasienter som har blitt behandlet med antibiotika.
Deretter kan den berikede buljongen frøes på Salmonella-Shigella-agar og andre lignende medier, så som xylose-agar, lysin-deoksykolat (XLD) og enterisk Hektoen-agar (HE).
Basis
Hver komponent av kulturmediet Salmonella-Shigella har en spesifikk funksjon, og blandingen som helhet gir den de egenskapene som kjennetegner det.
Nærende kraft
Kjøttekstrakt og pepton (fordøyd med kasein og dyrevev) gir de nødvendige næringsstoffene (nitrogener, karbon og vitaminer) for utvikling av mikroorganismer som er i stand til å tåle resten av komponentene.
Konsistens
Agar-agaren er ansvarlig for å gi solid konsistens til mediet.
selektiv
Dette mediet er svært selektivt fordi det inneholder gallesalter, natriumcitrat og lysegrønt. Derfor hemmer det veksten av alle Gram-positive bakterier og de fleste Gram-negative baciller, inkludert noen coliforms.
Mens bakterier av slekten Salmonella og noen Shigella-stammer støtter disse forbindelsene.
Hovedsakelig er slekten Salmonella veldig motstandsdyktig mot gallesalter, så mye at de klarer å leve i galleblæren til noen bærerpasienter som stadig kaster bakteriene i avføringen.
Differensial
Laktose er det gjærbare karbohydratet som hjelper til å skille laktosegjærende stammer fra ikke-gjærende. Denne egenskapen er påvist av tilstedeværelsen av pH-indikatoren, som i dette mediet er fenolrød.
Laktosegjærende stammer gir røde kolonier, mens ikke-fermenterende stammer er fargeløse. Denne egenskapen er viktig, siden Salmonella og Shigella ikke gjærer laktose.
På den annen side inneholder dette mediet natriumtiosulfat som en kilde til sulfid og jernholdig citrat som en kilde til jern. Begge forbindelser er i stand til å differensiere bakterier som er i stand til å produsere hydrogensulfid. Disse reagerer på å danne et synlig, uoppløselig, svart jernsulfidbunn.
Denne egenskapen finnes i noen stammer av slekten Salmonella. Normalt er koloniene deres flate fargeløse med en svart prikk i midten av den. Resten av Salmonellas produserer ikke H 2 S og utvikler seg som fargeløse kolonier.
På den annen side er kolonier av slekten Shigella flat fargeløs uten sverting.
Forberedelse
Dette mediet er veldig enkelt å tilberede.
Vei 63 g av det dehydrerte kommersielle mediet og oppløst i en liter destillert vann. Varm oppløsningen og rør om. Blandingen kan koke i opptil minutter.
Dette mediet må ikke autoklaveres. Etter oppløsning blir den servert direkte på enkle eller doble sterile plater.
Når de stivner, arrangeres de på en omvendt måte på blodplater og oppbevares i kjøleskap (2-8 ° C) til bruk.
Mediet etter tilberedning skal forbli ved pH 7,2 ± 0,2 og med en oransjerød farge.
Det er viktig å la platene varme seg opp før du sår prøvene. Den opprinnelige prøven kan sås direkte, avgi materiale på en del av agaren og deretter streke derfra.
Ved bruk av anrikede buljonger passerer du en del av selenbuljong og sår med en drigalski-slikkepott.
Inkuber ved 37 ° C i 24 timer i aerobiose.
Husk at antall gram som skal veies og den endelige pH-verdien i mediet kan variere fra et næringshus til et annet. Den midterste basen bringer alltid indikasjonene for forberedelsen.
Bruk
Det brukes ofte i avføringskulturanalyse og i mikrobiologisk studie av avløpsvann, drikkevann og matprøver.
Ofte tilberedes dobbeltplater, på den ene siden plasseres Salmonella-Shigella-agar og på den andre XLD-agar.
begrensninger
-Noen Shigella-stammer vokser ikke i dette mediet. Derfor anbefales det ikke for primær isolasjon av denne slekten.
-Ikke hver gjennomsiktig koloni med svart senter er en indikasjon på Salmonella; Biokjemiske tester må utføres for å gjøre en korrekt identifikasjon, siden koloniene i noen Proteus-stammer ikke kan skilles fra Salmonella.
-Dehydratiserte mediet må ta vare på eksponering for miljøet, siden det er veldig hygroskopisk. Derfor må den oppbevares i et tørt og godt lukket miljø. Åpent i veldig korte perioder.
-Over tid kan gallesaltene fra mediet falle ut og danne et bilde som ligner en matte i agaren, men dette påvirker ikke resultatene.
-Noen Shigella-stammer kan sakte gjære laktose.
QA
For å bevise at mediet fungerer riktig, anbefales det å plante kjente eller sertifiserte kontrollstammer og observere om veksten oppfyller de forventede egenskapene.
For dette kan stammer av E. coli, Enterobacter sp, Klebsiella pneumoniae, Shigella flexneri, Salmonella typhimurium eller Enterococcus faecalis brukes.
De forventede resultatene er:
Enterobacter og Klebsiella ------ store kolonier og røde eller rosa mucoider.
Shigella flexneri ---------- gjennomsiktige eller fargeløse flate kolonier.
Salmonella typhimurium ------ fargeløse kolonier med svarte sentre.
Enterococcus faecalis -------- total hemming.
referanser
- Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Salmonella-Shigella agar. 2009. Tilgjengelig på: f-soria.es
- BD-laboratorium. BD Salmonella-Shigella Agar. 2013. Tilgjengelig på: bd.com
- Britannia Laboratories. Salmonella-Shigella Agar. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
- Valtek diagnostikk. Salmonella-Shigella Agar (SS Agar). 2010. Tilgjengelig på: andinamedica.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 utg. Redaksjonell Panamericana SA Argentina.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. utg. Redaksjonell Panamericana SA Argentina.