BLODAGAR: BEGRUNNELSE, BRUK OG FORBEREDELSE - BIOLOGI - 2025

Den blodagar er et fast kulturmedium anriket differensial, men ikke-selektiv. Det brukes til utvinning og vekst av et stort utvalg av mikroorganismer fra kliniske prøver eller til subkulturer.

Klassisk blodagar bør inkluderes for såing av de fleste kliniske prøver som er mottatt i laboratoriet; bortsett fra avføringsprøver der det ikke er nyttig, med mindre de er forberedt med visse modifikasjoner.

Blodagarplate

Dette kulturmediet består i utgangspunktet av en anriket base-agar og 5% blod. Agarbasen kan variere etter behov, men den vil hovedsakelig være sammensatt av peptoner, aminosyrer, vitaminer, kjøttekstrakt, natriumklorid, agar, blant andre.

Når det gjelder blod, er det normalt påkrevd å ha kontakt med et vivarium for å få blod fra dyr, som sau, kanin eller hest. Dette er imidlertid ikke alltid mulig, og menneskeblod brukes noen ganger.

Blodagarmedium kan tilberedes på laboratoriet eller kjøpes ferdig fra dedikerte selskaper. Fremstillingen av dette mediet er noe av det mest delikate, all uforsiktighet i preparatet vil resultere i en forurenset gruppe.

Derfor må alle mulige forholdsregler tas, og på slutten må en kvalitetskontroll utføres ved å inkuberes ved 37 ° C 1 plate for hver 100 som er forberedt.

Basis

Staphylococcus aureus dyrket på blodagar. Nathan Reading på Flickr Nathan R. på Twitter, via Wikimedia Commons Det har allerede blitt nevnt at blodagar har kjennetegn ved å være et beriket, differensielt og ikke-selektivt medium. Grunnlaget for hver av disse egenskapene blir forklart nedenfor.

Blodagar er et anriket medium fordi det inneholder 5-10% blod på en agarbase som hovedtilsetningsstoff. Begge forbindelsene inneholder mange næringsstoffer, og denne egenskapen lar de fleste dyrkbare bakterier vokse i den.

At veksten skjer uten begrensninger; av denne grunn er den ikke-selektiv. Imidlertid, hvis forbindelser blir tilsatt til dette mediet som forhindrer vekst av noen mikroorganismer og favoriserer andre, blir det selektivt. Dette er tilfellet hvis visse typer antibiotika eller soppdrepende midler er tilsatt.

På samme måte er blodagar et differensialmedium, siden det gjør det mulig å skille mellom tre typer bakterier: beta-hemolytisk, alfa-hemolytisk og gamma-hemolytisk.

Beta-hemolytika er de som har muligheten til å lysse eller bryte ned røde blodlegemer fullstendig, og danne en klar glorie rundt koloniene, derfor produserer de ß eller ß-hemolyse, og mikroorganismene kalles ß-hemolytisk.

Eksempler på ß-hemolytiske bakterier er Streptococcus pyogenes og Streptococcus agalactiae.

Alfa-hemolytika er de som utfører delvis hemolyse, der hemoglobinet oksideres til metemoglobin, og gir en grønnaktig farge rundt koloniene. Dette fenomenet er kjent som α eller α -hemolyse, og bakterier er klassifisert som α-hemolytisk.

Eksempler på a-hemolytiske bakterier er Streptococcus pneumoniae og Streptococcus fra viridans-gruppen.

Endelig er det de såkalte gamma-hemolytiske eller ikke-hemolytiske bakteriene. Disse vokser på agaren uten å generere endringer på den, en effekt kjent som γ-hemolyse, og mikroorganismer er γ-hemolytiske.

Eksempel på y-hemolytiske bakterier: noen stammer av gruppe D Streptococcus (Streptococcus bovis og Enterococcus faecalis).

applikasjoner

Blodagarkulturmediet er et av de mest brukte i mikrobiologilaboratoriet.

Blant mikroorganismer som er i stand til å vokse i blodagarmediet er: strenge aerobe, fakultative, mikroaerofile, anaerobe, gram positive eller gram negative bakterier, raskt voksende eller saktevoksende bakterier.

Noen ernæringsmessige krevende eller kvisende bakterier vokser også, i tillegg til sopp og gjær. På samme måte er det nyttig for subkulturering eller reaktivering av stammer som er metabolsk veldig svake.

Valget av blodtype og base-agar vil imidlertid variere avhengig av den sannsynlige mikroorganismen som mistenkes for å komme seg og bruken som platen skal brukes til (kultur eller antiogram).

Valg av blodtype

Blodet kan være lam, kanin, hest eller menneske.

Det mest anbefalte er blodet fra lam, med noen unntak. For eksempel å isolere Haemophilus-arter, der det anbefalte blodet er hest- eller kaninblod, siden lammeblod inneholder enzymer som hemmer faktor V.

Den minst anbefalte er menneskelig, men den er den mest brukte, kanskje fordi den er den enkleste å få tak i.

Blodet må defibrineres, fås uten noen type tilsetningsstoff og fra sunne dyr. For bruk av menneskelig blod må flere faktorer tas i betraktning:

Hvis blodet kommer fra individer som har hatt bakterielle infeksjoner, vil de ha spesifikke antistoffer. Under disse forholdene vil sannsynligvis veksten av noen bakterier bli hemmet.

Hvis det er hentet fra blodbanken, inneholder det sitrat og visse bakterier vil kanskje ikke vokse i sin nærvær. På den annen side, hvis blodet kommer fra pasienter som tar antibiotika, kan veksten av mottagelige bakterier hemmes.

Og hvis blodet er fra en diabetiker, forstyrrer overflødig glukose riktig utvikling av hemolysemønstre.

Valg av basisagartype

Basisagaren som brukes til fremstilling av blodagar kan være veldig bred. Blant dem er: næringsagar, hjerneinfusjonsagar, trypticase soyagar, Müeller Hinton agar, Thayer Martin agar, Columbia agar, Brucella agar, Campylobacter agar, etc.

Bruk av blodagar i henhold til basemediet som brukes til fremstilling av det

Næringsmiddelagar

Denne basen er den minst brukte, siden den hovedsakelig vil vokse ikke-krevende bakterier, for eksempel enteriske baciller, Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp, blant andre. Det anbefales ikke å isolere Streptococcus.

Brain Heart Infusion Agar (BHI)

Det er en av de mest brukte som baser for blodagar, fordi den inneholder de nødvendige næringsstoffene for vekst av de fleste bakterier, inkludert Streptococcus sp og andre krevende bakterier. Selv om det ikke er aktuelt å observere hemolysemønstre.

Lammets blod brukes vanligvis med denne basen.

Blodagarvarianter kan også fremstilles, hvor andre forbindelser tilsettes for å isolere visse mikroorganismer. For eksempel kan hjerneinfeksjon Agar supplert med kaninblod, cystin og glukose brukes til å isolere Francisella tularensis.

Med cystintelluritt er det nyttig for isolering av Corynebacterium diphteriae. Menneskelig eller lammeblod kan brukes.

Med den første beta-hemolysen vil bli sett på som en smal glorie, mens med den andre vil glorie være mye bredere.

På samme måte brukes denne basen, sammen med bacitracin, maisstivelse, hesteblod og andre anrikningstilskudd (IsoVitaleX) for isolering av slekten Haemophilus sp fra luftveisprøver.

Hvis kombinasjonen av antibiotika kloramfenikol - gentamicin eller penicillin - streptomycin og hesteblod tilsettes, er den også ideell for isolering av krevende patogene sopp, selv med et høyere utbytte enn Sabouraud glukoseagar. Det er spesielt nyttig ved isolering av Histoplasma capsulatum.

Trypticase soyagar

Denne basen er den mest anbefalte for en bedre observasjon av hemolysemønsteret og for å utføre diagnostiske tester som optokin taxa og bacitracin. Det er den klassiske blodagaren som brukes rutinemessig.

Med denne basen kan du også tilberede den spesielle blodagaren til Corynebacterium diphteriae, med cystin-telluritt og lammeblod .

På samme måte er kombinasjonen av denne agaren med lammeblod, pluss kanamycin-vancomycin ideell for vekst av anaerober, spesielt Bacteroides sp.

Müeller Hinton agar

Denne basen supplert med blod brukes til å utføre antiogrammet til bedøvende mikroorganismer, for eksempel Streptococcus sp.

Det er også nyttig for isolering av bakterier som Legionella pneumophila.

Thayer Martin Agar

Dette mediet er ideelt som base for blodagar når Neisseria-slekt, særlig Neisseria meningitidis, mistenkes, siden N. gonorrhoeae ikke vokser på blodagar.

Det brukes også til å teste for følsomhet for Neisseria meningitidis.

Columbia agar

Denne basen er utmerket for såing av gastriske biopsiprøver for Helicobacter pylori.

Mediet fremstilles ved å tilsette 7% lammeblod defibrinert med antibiotika (vankomycin, trimetoprim, amfotericin B og cefsulodin) for å begrense veksten av andre typer bakterier som kan være til stede.

Den samme basen supplert med humant eller lammeblod, nalidiksinsyre og colistin er nyttig for å isolere Gardnerella vaginalis. Det er også ideelt for å vurdere den antimikrobielle følsomheten for antibiotika av samme mikroorganisme.

I tillegg brukes den til fremstilling av blodagar for dyrking av anaerober, tilsetning av aminoglykosider og vankomycin.

Denne basen muliggjør riktig observasjon av hemolysemønstre.

Brucella agar

Dette mediet som brukes som base for blodagar sammen med tilsetning av K-vitamin er ideelt for dyrking av anaerobe bakterier. I dette tilfellet anbefales bruk av lammeblod.

Campylobacter agar

Campylobacter agar supplert med 5% fåreblod og 5 antibiotika (kefalothin, amfotericin B, trimethoprim, polymyxin B og vancomycin), er mediet som brukes til å isolere Campylobacter jejuni i avføringsprøver.

Forberedelse

Hvert kommersielle hus har instruksjonene for å klargjøre en liter kulturmedium på baksiden av beholderen. Tilsvarende beregninger kan gjøres for å forberede ønsket mengde, avhengig av den valgte basisagaren.

Vei og oppløs

Basisagaren er dehydrert (pulver), derfor må den løses i destillert vann justert til pH 7,3.

Mengden angitt med den valgte base-agaren veies og løses i den tilsvarende mengden vann i en kolbe, oppvarmes deretter over moderat varme og blandes med roterende bevegelser til alt pulveret er oppløst.

Sterilisere

Når den er oppløst, steriliserer du i en autoklav ved 121 ° C i 20 minutter.

Blodaggregat

Når autoklaven forlates, får kolben avkjøle til temperaturen varierer mellom 40 til 50 ° C; Det er en temperatur som menneskets hud støtter, og samtidig har agaren ennå ikke stivnet.

For å gjøre dette berøres kolben med hånden, og hvis varmen er tålelig, er det den ideelle temperaturen å tilsette den tilsvarende mengden defibrinert blod (50 ml for hver liter agar). Bland forsiktig for å homogenisere.

Overgangen til blodaggregering er avgjørende, for hvis det gjøres når mediet er veldig varmt, brytes de røde blodlegemene og mediet vil ikke bli brukt til å observere hemolyse.

Hvis det blir tilsatt for kaldt, klumper det seg, og overflaten på mediet blir ikke glatt for å tillate riktig score.

Hell i petriskål

Serveres i sterile petriskåler umiddelbart etter homogenisering av blodet. Cirka 20 ml helles i hver petriskål. Denne prosedyren gjøres i en laminær strømningshette eller i nærheten av brenneren.

Når du serverer blodagaren i petriskålene, skal det ikke være igjen luftbobler på overflaten av tallerkenen. Hvis dette skjer, føres flammen til Bunsen-brenneren raskt over platen for å eliminere dem.

Platene får stivne og oppbevares i kjøleskap (2-8 ° C) omvendt til bruk. Før du bruker blodagarplatene, må de herdes (lov til å nå romtemperatur) for å kunne frø.

De tilberedte platene varer omtrent 1 uke.

referanser

1. Bayona M. Mikrobiologiske forhold for kulturen av Helicobacter pylori. Rev Col Gastroenterol 2013; 28 (2): 94-99
2. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktisk klinisk mikrobiologi. University of Cadiz, 2. utgave. UCA Publications Service.
3. "Blodagar." Wikipedia, The Free Encyclopedia. 10 des 2018, 14:55 UTC. 27. des 2018, 01:49 en.wikipedia.org.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 utg. Argentina. Redaksjonell Panamericana SA
5. CEDIVET Laboratory Veterinary Diagnostic Center. Guatemala. Tilgjengelig på: trensa.com.
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. (5. utg.). Argentina, Redaksjonelt Panamericana SA