TRYPTICASEIN SOYAGAR: BEGRUNNELSE, TILBEREDNING OG BRUK - BIOLOGI - 2025

Den soya agar Trypton eller Trypticase Soy Agar er et fast kulturmedium, og ernæringsmessige ikke-selektive. Det er utpekt av bokstavene TSA for dets forkortelse på engelsk Trypticase Soy Agar. Den er sammensatt av triptein, soyapepton, natriumklorid og agar-agar.

På grunn av sin høye ernæringskraft er den ideell for dyrking av moderat krevende og ikke-krevende mikroorganismer. Medium uten ekstra tilskudd anbefales ikke til primærkulturer, men det er veldig nyttig for å dyrke rene stammer og holde dem levedyktige, blant annet bruk.

Trypticasein soyagar kiler i rør med bakelittlokk. Kilde: Fotografi tatt av forfatteren MSc. Marielsa Gil.

Denne agar tjener også som en base for fremstilling av anrikede medier slik som blodagar, spesielt når det er nødvendig å observere hemolysemønstrene og å montere optokin og bacitracin taxa, som er nødvendig i diagnosen henholdsvis Streptococcus pneumoniae og Streptococcus pyogenes.

På den annen side, når det er kombinert med antibiotika, er det nyttig å isolere klinisk viktige fakultative og strenge anaerobe mikroorganismer fra prøver med blandet flora.

Endelig oppfyller sammensetningen av trypticasein soyagar og dens ytelse kravene som er fastsatt av de forskjellige farmakopéene (europeiske, japanske og nordamerikanske).

Basis

For riktig utvikling av bakterier er tilstedeværelsen av energiforsyninger nødvendig, for eksempel aminosyrer, vitaminer, puriske og pyrimidiske baser.

I denne forstand gir triptein og soyapepton disse næringsstoffene til mikroorganismer, og tillater dermed deres fulle utvikling. For slitsomme bakterier er det imidlertid nødvendig å supplere denne agaren med defibrinert blod eller varmet blod for å øke berikelsen.

På den annen side, hvis antibiotika tilsettes mediet, blir det et selektivt medium. 0,6% gjærekstrakt kan også tilsettes for å favorisere isolering av arter i slekten Listeria, mens tilsetning av cystintelluritt og lammeblod er ideelt for Corynebacterium diphteriae.

Til slutt gir natriumkloridet den osmotiske balansen til mediet, og agaren gir den faste konsistensen.

Forberedelse

Trypticasein Soyagarplater

For å fremstille trypticasein soyagar, bør 40 g av dehydrert kommersielt medium veies i digital skala. Det blir oppløst i en liter destillert vann som er inneholdt i en kolbe.

Blandingen får hvile i 5 minutter og deretter føres den til en varmekilde for å hjelpe med å oppløse mediet. Det bør røres ofte og kokes i 1 til 2 minutter. Deretter steriliseres mediet i autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter.

La avkjøle seg til 50 ° C og fordel i sterile petriskåler. La stivne, vend, bestill i plaqueros og oppbevar i kjøleskap.

Den endelige pH for mediet skal være 7,3 ± 0,2.

Det skal bemerkes at fargen på det dehydrerte dyrkningsmediet er lys beige og bør oppbevares mellom 10 og 35 ° C, på et tørt sted.

For sin del er den tilberedte agaren lysfarget gul. Forberedte plater skal oppbevares i kjøleskap (2-8 ° C) til bruk.

Plater må nå romtemperatur før bruk.

Trypticasein soyaagarplater supplert med blod

Blodagar blir fremstilt ved å tilsette 5% defibrinert blod på tidspunktet for avkjøling av trypticasein soyagar til 50 ° C. Blandingen homogeniseres ved å rotere med milde bevegelser.

Serveres i sterile petriskåler. Den midtre fargen skal være kirsebærrød.

Trypticasein soyagarplater supplert med varmet blod

For å klargjøre den TSA-baserte blodagaren, fortsett på samme måte som prosedyrene som allerede er beskrevet, men når du forlater autoklaven får den hvile til temperaturen i mediet er omtrent mellom 56 til 70 ° C. På den tiden blir blodet plassert og blandet til mediet blir brunt.

Serveres i sterile petriskåler. Fargen på mediet er sjokoladebrun.

Trypticasein Soy Agar Wedges

Agarforberedelsesprosedyren er den samme som beskrevet for plater, med den forskjellen at i stedet for å servere mediet på Petri-skåler, fordeles det mellom 10 til 12 ml i rør med Bakelite-deksler før sterilisering.

Deretter autoklaveres rørene ved 121 ° C i 15 minutter. Når de drar, er de tilbøyelige med hjelp av en støtte og får lov til å stivne.

De tilberedte kilene blir sådd av overflateareal og tjener til å holde visse ikke-krevende mikroorganismer levedyktige i et spesifikt tidsrom.

applikasjoner

Trypticasein Soy Agar brukes i følgende tilfeller:

-Som en base for å tilberede den klassiske blodagaren som brukes rutinemessig i de fleste laboratorier.

-Isolasjonen av krevende bakterier.

-Bevaring av hemolysemønsteret.

-Utføring av diagnostiske tester.

-Som en base for å tilberede spesiell blodagar for Corynebacterium diphteriae, med cystin-telluritt og lammeblod.

-Som en base for å tilberede lamblodagar, pluss kanamycin-vancomycin for vekst av anaerober, spesielt Bacteroides sp.

- For vedlikehold av ikke-krevende stammer (Bacterioteca).

- Aerob mikrobielt antall i studien av mikrobiell grense for vann, miljø, mat og kosmetiske prøver.

sådd

Prøver kan sås direkte på overflaten av Trypticasein Soy Agar supplert med blod eller andre tilsetningsstoffer. Det blir sådd av utmattelse.

Mens trypticasein soyagarplater uten tilsetningsstoffer vanligvis brukes til å dyrke mikrobielle stammer (bakterier eller gjær).

QA

Sterilitetskontroll

For å kontrollere steriliteten til de forskjellige mediene som er tilberedt med Trypticasein Soy Agar, anbefales det å gjøre følgende: fra hver tilberedte batch skal 1 eller 2 uinokulerte plater eller rør inkuberes ved 37 ° C i 24 timer for å demonstrere deres sterilitet. I alle tilfeller må det forbli uten vekst.

Hvis det blir funnet forurensning, må hele partiet kasseres.

Vekstkontroll

Følgende bakteriestammer kan brukes til å studere korrekt funksjon av trypticasein soyagar: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 og Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Stammene blir sådd og inkubert aerobt ved 37 ° C i 24 timer.

I alle tilfeller må veksten være tilfredsstillende.

Sopp som Candida albicans Complex ATCC 10231 og Aspergillus niger ATCC 16404 kan også brukes. Det forventes god vekst for begge stammer.

Vekstkontroll og hemolysemønster av trypticasein soyaagar supplert med blod

For å bekrefte riktig funksjon av blodagaren fremstilt med denne basen, kan følgende stammer brukes: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 og Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

De blir podet og inkubert ved 37 ° C i mikroaerofilisitet i 24 timer.

I alle tilfeller skal veksten være tilfredsstillende, idet man tar i betraktning at beta-hemolyse (lett glorie rundt kolonien) bør observeres i S. pyogenes og alfa-hemolyse (grønn glorie rundt kolonien) bør observeres i begge stammene av S. pneumoniae. kolonier).

referanser

1. Wikipedia-bidragsytere. Trypticase Jeg er agar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 17 desember 2018, 15:47 UTC. Tilgjengelig på: https://en.wikipedia.org
2. Britannia Laboratories. Triptein soyagar. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
3. Neogen Laboratories. Tryptisk soyagar. Tilgjengelig på: foodsafety.neogen.com
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 utg. Argentina. Redaksjonell Panamericana SA
5. BD Laboratories. Trypticase Jeg er Agar. 2014. Tilgjengelig på: .bd.com