Den vismut sulfitt agar er et fast medium selektivt og differensielt kultur, spesielt formulert for isolering av Salmonella enterica underart ente serotype typhi, blant andre arter av Salmonella. Mediet er kjent som BSA-agar for sin forkortelse på engelsk Bismuth Sulfite Agar.
Den opprinnelige formelen for vismutsulfittagar ble opprettet i 1927 av Wilson og Blair (Glucose Bismuth Sulphite Iron Medium); den inneholdt natriumsulfitt, glukose, vismutløsning, ammoniumcitrat, jernsulfat og agar-agar.
Vekst på 48 timers inkubasjon av Salmonella sp på vismutsulfitt-agar. Kilde: Pixnio.com Forfatter: Dr. WR Erving, USCDCP
I dag er det en modifisering av det opprinnelige mediet, sammensatt av kjøttekstrakt, kjøtt- og kaseinpeptoner, vismut-sulfittindikator, glukose, dinatriumfosfat, jernholdig sulfat, lysegrønn og agar-agar.
Det er mange måter å isolere Salmonella-arter, men når det gjelder utvinning av Typhi-serotypen, har vismut-sulfitt-agar en betydelig fordel i forhold til dem, siden det i det meste oppnås en meget lav eller null utvinning av denne mikroorganismen. .
Imidlertid er det nødvendig å bruke mer enn en type medium når du prøver å isolere enteropatogener, fordi vismutsulfittagar er mindre effektiv for andre arter av Salmonella og for slekten Shigella, som er hemmet eller utvikler seg veldig dårlig. i denne agaren.
Det skal bemerkes at Typhi-serotypen av alle Salmonella-arter er en av de viktigste enteropatogenene hos mennesker, og dette er dets eneste reservoar. Denne serovaren forårsaker tyfoidfeber, gastroenteritt, bakteriemi og septikemi.
Av denne grunn er det relevant å inkludere denne agaren når du analyserer vann, avføring eller matprøver der det er mistanke om tilstedeværelse.
Basis
Som de fleste kulturmedier inneholder Bismuth Sulfite Agar næringsstoffer for å fremme bakterievekst, for eksempel peptoner og kjøttekstrakt. På samme måte fungerer glukose som en kilde til energi og karbon.
Imidlertid vil ikke alle bakterier vokse på dette mediet, da Bismuth Sulfite Agar er et selektivt medium. Den inneholder forbindelser som hemmer veksten av Gram-positive mikroorganismer og visse Gram-negative bakterier. Disse forbindelsene er: indikatoren vismut sulfitt og lysegrønn.
For din del opprettholder dinatriumfosfat mediet osmolaritet og pH.
I tillegg, vismut sulfitt Agar er et differensielt medium takket være tilstedeværelsen av ferrosulfat, som viser dannelsen av H- 2 S. H- 2- S dannet av bakterier reagerer med ferrosulfat og danner et klart synlig uoppløselig svart bunnfall.
Til slutt gir agar-agaren den faste konsistensen til mediet.
Forberedelse
Vei ut 52,3 g av det dehydrerte mediet og løst opp i en liter vann. Varm blandingen til å koke i 1 minutt under hyppig omrøring, til den er helt oppløst. Ikke overopphet for mye. Dette mediet er ikke autoklaverbart, fordi ekstrem varme skader kulturmediet.
La avkjøle til 45 ° C og rist før servering i sterile petriskåler. Det anbefales å lage plater med god tykkelse. For å gjøre dette, må du helle 25 ml i hver tallerken. La stivne. Ettersom det er et medium som ikke er sterilisert, er det normalt at det umiddelbart foreslås å bruke det.
Imidlertid viste en studie utført av D'aoust i 1977 at det er en bedre utvinning av Salmonella typhimurium og Salmonella enteritidis som vismut sulfite agar middelalder, og ikke påvirker ytelsen for serovarene Typhi og Paratyphi B.
D'aoust anbefaler å bruke platene på dag 4 av kjøling, selv om den advarer om at når de er i middelalderen, reduseres selektiviteten, og Proteus vulgaris-stammer utvikler seg lettere.
Av denne grunn er det foretrukket å bruke nylaget medium for sterkt forurensede prøver, slik som avføring. Bruk ellers på dag 4 av forberedelsen. Andre forfattere anbefaler å bruke platene dagen etter tilberedningen, lagret i kjøleskapet.
Avkjølte plater må være herdet før bruk. PH i mediet bør være 7,5 ± 0,2. Det rå mediet er beige og det tilberedte mediet er grønngrå opaliserende.
applikasjoner
Blant prøvene som kan plantes i dette mediet er prøver av avføring, drikke eller avløpsvann og mat.
For å forbedre isolatene anbefales det å utføre en pre-anrikningsbehandling med laktosebuljong og etter anrikning med tetrathionatbuljong eller cystin selenittbuljong, før du sås på vismutsulfitt-agar.
Platene inkuberes ved 35 ° C ± 0,2 i 24 til 48 timer i aerobiose.
Kjennetegn på koloniene på vismut sulfite agar
Salmonella Typhi-kolonier sees vanligvis på denne agaren innen 24 timer med et svart senter og omgitt av en lysegrønn glorie. Mens de på 48 timer blir helt svarte på grunn av dannelsen av hydrogensulfid.
-Dette mediet hemmer de fleste arter av slekten Shigella.
- S. Typhi og S. arizonae kan gi veldig like kolonier.
-Koliformene som produserer H 2 S som Proteus og Citrobacter produserer kolonier som ligner på Salmonella, så det er nødvendig å utføre biokjemiske identifikasjonstester.
-Det skal være god striasjon for å oppnå isolerte kolonier; Det er den eneste måten å observere de typiske egenskapene til kolonier i slekten Salmonella.
QA
For sterilitetskontrollen inkuberes en uinokulert plate ved 37 ° C, det forventes at det ikke vil være noen vekst eller fargeendring.
For kvalitetskontroll, kjente stammer som:
Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Escherichia coli og Shigella flexneri forventes å være delvis hemmet ved å utvikle henholdsvis grønnbrune og brune kolonier. Begge salmonellaene må ha en utmerket utvikling med svarte kolonier med metallisk glans, og til slutt må Enterococcus faecalis hindres totalt.
referanser
- Wilson, W., & EM McV. Blair. Bruk av et glukosebismut sulfitt jernmedium for isolering av B. typhosus og B. proteus. Journal of Hygiene, 1927; 26 (4), 374-391. Hentet fra .jstor.org
- D'aoust JY. Effekt av lagringsbetingelser for ytelsen til vismut sulfitt agar. J Clin Microbiol. 1977; 5 (2): 122–124. Tilgjengelig på: ncbi.nlm.nih.gov
- IVD Laboratories. Vismut-sulfitt-agar ifølge WILSON-BLAIR. 2009. Tilgjengelig på: BismuthSulfitagar_span_Jan_2009% 20 (2) .pdf
- Himedia Laboratories. Vismut sulfittagar. 2017. Tilgjengelig på: himedialabs.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 utg. Redaksjonell Panamericana SA Argentina.
- Morales R, de la Cruz D, Leyva G og Ybarra M. Bakteriologisk kvalitet på rå geitemelk produsert i Miravalles, Puebla. Rev Mex de Ing Quím 2012; 11 (1): 45-54