Den TCBS agar er et middel for meget selektivt og differensielt fast kultur, som anvendes for isolering og dyrking av bakterier av slekten Vibrio, spesielt Vibrio cholerae, V. parahaemolyticus og V. vulnificus som viktige patogener av denne art.
Forkortelsen TCBS står for Thiosulfate Citrate Bile Sucrose. Denne agaren er også kjent som et selektivt medium for Vibrios. Den opprinnelige formelen ble opprettet av Nakanishi og senere modifisert av Kobayashi.
Kommersiell TCBS medium og TCBS agarplate frøet med Vibrio cholerae. Kilde: foto 1: tatt av forfatteren MSc. Marielsa Gil / Foto 2: Microrao, JJMMC, Davangere, Karnataka, India
Det er sammensatt av gjærekstrakt, kjøttpepton, triptein, natriumcitrat, natriumtiosulfat, oksegall, sukrose, natriumklorid, jernsitrat, bromotymolblått, tymolblått og agar.
Denne sammensetningen tillater en tilstrekkelig utvikling av Vibrio-arter fra vann, mat og avføring prøver. med unntak av Vibrio hollisae, som ikke vokser på dette mediet. Videre er TCBS-medium i stand til å hemme veksten av andre medfølgende bakterier, spesielt coliforms.
På grunn av de alvorlige gastrointestinale og ekstra-tarmproblemer produsert av noen arter av Vibrio-slekten, er diagnosen veldig viktig. Mennesker er hovedsakelig smittet av å spise rå eller underkokt mat fra havet eller forurenset vann, men også gjennom sårinfeksjon.
På grunn av dette bør kliniske laboratorier inkludere TCBS-agar i avføringskulturstudien av prøver av flytende avføring, spesielt med utseendet til risvann. Spesielt hvis pasienten rapporterer å ha vært i kontakt med sjøvann eller konsumert skalldyr eller fisk.
Basis
Gjærekstrakt, kjøttpeptoner og triptein er ernæringskilden til dette mediet. TCBS-agar er imidlertid et ugjestmildt medium for de fleste bakterier.
Den høye selektiviteten er gitt ved tilsetning av natriumcitrat og oksegalle; begge er hemmende midler som også gir en alkalisk pH for mediet, som begrenser veksten av den medfølgende floraen og favoriserer veksten av V. cholerae, blant andre arter. Det skal bemerkes at Vibrio cholerae er veldig følsom for surhet.
Natriumklorid balanserer på sin side osmotisk mediet. Siden konsentrasjonen er høy, fungerer den også som et hemmende middel, og favoriserer veksten av halofile bakterier.
Sukrose er det gjærbare sukkeret som, sammen med bromothymolblå og tymolblå pH-indikatorer, gir mediet dens forskjellige karakter. Av denne grunn er det med dette mediet mulig å differensiere sukrosegjærende stammer fra ikke-fermenterende.
Kolonier av sukrosegjærende stammer utvikler gul farge og vil gjøre mediet fra grønt til gult på grunn av syreproduksjon. Ikke-gjærerne vokser gjennomskinnelig og mediet forblir den opprinnelige fargen (grønn).
På samme måte inneholder dette mediet natriumtiosulfat som en kilde til svovel og jernsitrat som et utviklingsmiddel. Begge viser bakterier som er i stand til å produsere hydrogensulfid (fargeløs gass). H 2 S er dannet av tiosulfat og deretter ved omsetning med ferricitrat en synlig svart utfelling.
Endelig er agaren det som gir solid konsistens til mediet.
Forberedelse
Vei 89 g av det dehydrerte mediet og oppløst i en liter destillert vann. Hjelp oppløsningen ved å varme opp og ofte røre. Blandingen kan kokes i opptil 2 minutter.
Dette mediet er ikke autoklavert. Etter oppløsning serveres det direkte på sterile plater. Når de stivner, arrangeres de på en omvendt måte på blodplater og oppbevares i kjøleskap (2-8 ° C) til bruk.
Mediet etter tilberedning må forbli ved pH 8,6 ± 0,2.
Fargen på det dehydrerte mediet er lys beige eller grønlig-beige, og fargen på mediet er skoggrønn eller blågrønn.
Det er viktig å la platene varme seg opp før du sår prøvene.
Bruk
Det vanligste eksemplet for Vibrios isolasjon er diaré avføring.
Avføringsprøver, hvis de ikke umiddelbart kan podes på det selektive mediet, bør transporteres på Cary Blair-mediet.
For å øke kulturens følsomhet kan avføringen føres gjennom peptonvann ved pH 8,4 som et anrikningsmedium i maksimalt 8 timer, derfra subkultiveres det til TCBS-mediet.
Det må også tas i betraktning at noen stammer av Vibrios kan forårsake septikemi hos immunsupprimerte pasienter, derfor kan de isoleres fra blodkulturer. På samme måte kan prøver av vann og mat fra havet analyseres når det er epidemiske utbrudd av kolera sykdom.
sådd
Inokulatet av studieprøven må være fremtredende, såingen utføres ved strippemetoden ved utmattelse. Platene inkuberes ved 37 ° C i 24 timer i aerobiose.
De presumptive koloniene av Vibrio cholerae er middels store, glatte, ugjennomsiktige, med tynne kanter og gule på grunn av fermentering av sukrose.
Arten av V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii og noen V. vulnificus vokser på lignende måte. Andre klinisk viktige Vibrios-arter som V. parahaemolyticus gjærer ikke sukrose, og utvikler seg som olivengrønne kolonier.
TCBS agarplate frøet med Vibrio parahaemolyticus. Kilde: isis325 Flickr
På den annen side må det huskes at noen stammer av Aeromonas og Plesiomonas som er oksidase (+) kan vokse i dette mediet, og utvikle gule kolonier som kan forvirre klinikeren. Mens noen stammer av Pseudomonas også oksidase (+) vokser som grønne kolonier som V. parahaemolyticus.
begrensning
Oksidasetesten som er positiv for Vibrio-slekten, bør aldri utføres fra kolonier oppnådd fra TCBS-agar, ettersom resultatet oppnådd vil være falskt negativt. Forbindelser i midten forstyrrer denne testen sterkt. Derfor må det lages av subkulturer på blodagar.
QA
For å bevise at mediet er i god stand, anbefales det å så kjente eller sertifiserte kontrollstammer, og observere om veksten oppfyller de forventede egenskapene.
For dette kan du bruke stammer av:
-Vibrio cholerae - tilfredsstillende vekst (gule kolonier, gjennomskinnelig grense).
-Vibrio parahaemolyticus --– tilfredsstillende vekst (koloni med grønt sentrum og gjennomskinnelig grense).
-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - tilfredsstillende vekst (gule kolonier med glorier av samme farge rundt kolonien).
-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - total eller delvis hemming (små gule eller gjennomskinnelige kolonier).
-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853-– delvis eller total hemming (blå kolonier).
-Escherichia coli ATCC 25922 - Helt hemmet.
-Proteus mirabilis ATCC 43071 -– Total eller delvis hemming. (Små kolonier grønn midt gjennomsiktig grense).
Inkubasjon av uinokulert medium bør være uendret.
referanser
- Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. TCBS-agar. 2009. Tilgjengelig på: f-soria.es
- BD-laboratorium. BD. TCBS Agar 2003. Tilgjengelig på: bd.com
- Britannia Laboratories. TCBS Medium. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
- Acumedia Laboratories. TCBS Agar. 2016. Tilgjengelig på: foodsafety.neogen.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 utg. Redaksjonell Panamericana SA Argentina.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. utg. Redaksjonell Panamericana SA Argentina.