THAYER MARTIN AGAR: FOUNDATION, KLARGJØRING OG BRUK - BIOLOGI - 2026

Den agar Thayer-Martin er det en svært næringsrik og solid selektivt medium for isolering av Neisseria meningitidis og Neisseria gonorrhoeae; begge kjent som patogene eller klinisk viktige Neisserias.

En av de viktigste spesielle egenskapene til Thayer Martin Agar er det høye innholdet av kosttilskudd. Denne egenskapen er essensiell, fordi Neisserias er veldig krevende mikroorganismer fra ernæringsmessig synspunkt og derfor ikke vokser i vanlige medier.

Thayer Martin / Agar Thayer Martin forretningsmedium. Kildebilde 1: Tatt av forfatteren MSc. Marielsa Gil, bilde 2. Pixinio.com bakteriacolonized, modifisert, Thayer, Martin, agar.

På den annen side, siden disse mikroorganismer normalt finnes i ikke-sterile områder, er tilsetning av hemmere nødvendig for å forhindre vekst av den medfølgende floraen, uten å påvirke utviklingen av Neisseria-slekten.

Denne agaren er sammensatt av GC-basisagar, hemoglobin, ekstra kosttilskudd og et kompleks av hemmende stoffer (antibiotika og soppdrepende midler). Handelshusene selger hvert av tilleggene separat.

Prøven som skal sås i dette mediet vil avhenge av mikroorganismen som blir søkt. For Neisseria gonorrhoeae er de ideelle prøvene vaginale og uretrale sekreter. Mens de mest brukte prøvene for Neisseria meningitidis er CSF, svelgete og nasofaryngeale ekssudater.

Basis

Neisserias er mikroorganismer klassifisert som irriterende og derfor er isolasjonen deres vanskelig. Derfor er Thayer Martín et sammensatt medium, og hver av komponentene oppfyller en funksjon som er forklart nedenfor:

GC-basisagar

GC-agar inneholder proteosepepton, maisstivelse, natriumklorid, dipotassium-fosfat, monopotassium-fosfat og agar-agar. Komponentene gir de grunnleggende næringsstoffene for mikrobiell utvikling, nøytraliserer giftige fettsyrer, bidrar til å opprettholde osmotisk balanse, definere pH og gi solid konsistens til mediet.

hemoglobin

Hemoglobin gir faktorene V og X (henholdsvis nikotinamidadenindinukleotid NAD og hemin). Av denne grunn vokser også Haemophilus-artene i dette mediet. Hemoglobin kan fås kommersielt i en dehydrert form, eller fersk defibrinert bovint blod kan tilsettes mediet.

Anrikningstilskudd

På den annen side må et anrikningstilskudd også tilsettes Thayer-Martin-mediet, siden næringsstoffene som finnes i basisagaren ikke er tilstrekkelige for kravene til Neisseria-slekten.

Det mest brukte anrikningstilskuddet kalles isovitalex. Det inneholder glutamin, adenin, NAD, kokarboksylase, guanin, jernnitrat, p-amino benzosyre, vitamin B12, tiamin og glukose. Alle disse forbindelsene er nødvendige for riktig utvikling av sykdomsfremkallende Neisserias.

hemmere

Siden det er et næringsrikt medium, må det brukes hemmere som forhindrer vekst av mikroorganismer fra den vanlige floraen i området og dermed favoriserer isolasjonen av Neisseria-slekten.

Inhibitorkomplekset er sammensatt av vankomycin, colistin og nystatin. Vancouveromycin hemmer veksten av Gram-positive bakterier, colistin forhindrer vekst av Gram-negative bakterier som Pseudomonas og noen saprofytiske Neisserias, og nystatin virker på gjær som Candida albicans.

Imidlertid ble Thayer Martin Agar senere modifisert; endringene besto av tilsetning av trimetoprim, økningen i mengden agar og tilsetning av ekstra glukose. Disse endringene forbedret utvinningen av Neisseria gonorrhoeae-arter betydelig.

Det skal bemerkes at trimethoprim hemmer veksten av slekten Proteus og den derav følgende svermdannelse. I denne forstand er det antibiotikaene som gir den selektive karakteren til Thayer Martin-mediet.

Forberedelse

Original Thayer Martin agar

-GC-agar

Vei ut 8,2 g dehydrert GC-medium og suspender i 100 ml. Bland og kok opp i 1 minutt med hyppig omrøring for å løse opp fullstendig. Steriliser blandingen i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter.

- 2% hemoglobin

Suspendér 2 g dehydrert hemoglobin i 2 eller 3 ml varmt destillert vann til en jevn blanding er dannet. Tilsett litt etter litt mer vann for å fullføre et volum på 100 ml. Suspensjonen må være homogen før sterilisering.

Steriliser i autoklav i 15 minutter.

-Nok for anrikning

Bland det kommersielle hetteglasset på nytt med fortynningsmidlet levert av det samme kommersielle selskapet. Bland godt. Mengden fortynningsmiddel som skal brukes, vil bli spesifisert i instruksjonene for settet.

-VCN-hemmertilskudd (vankomycin, colistin, nystatin)

Rekonstituer hetteglasset med fortynningsmidlet levert av det kommersielle selskapet. Bland godt. Mengden fortynningsmiddel som skal brukes, vil bli spesifisert i instruksjonene for settet.

som ble fremstilt

For hver 100 ml GC-agar, fortsett som følger:

Når GC-agaren forlater autoklaven, la den avkjøles til en temperatur på omtrent 50 ° C og tilsett 2 ml av den tilberedte hemoglobinoppløsningen, 2 ml av anrikningstilskuddet (isobitalex eller britalex) og 2 ml av hemmertilskuddet. Bland og server i sterile petriskåler.

La stivne og oppbevare i kjøleskapet til bruk.

Fargen på det tilberedte mediet er kirsebærrødt. Den endelige pH for mediet er 7,2 ± 0,2

Modifisert Thayer Martin agar

Vei ut 8,2 g dehydrert GC-medium og suspender i 100 ml. Tilsett 1 g agar-agar og tilsett 0,3 g glukose. Bland og kok opp i 1 minutt med hyppig omrøring for å løse opp fullstendig. Steriliser blandingen i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter.

Forbered hemoglobin og anrikningstilskuddet som tidligere beskrevet.

Undertrykkelsestilskuddet som brukes er VCNT (vankomycin, colistin, nystatin, trimethoprim).

som ble fremstilt

Fortsett som beskrevet for den originale Thayer Martin-agaren.

Bruk

Thayer Martin Agar bør få lov til å varme seg før prøver blir stripet. Vanlige prøver er svelgvattpinner, nesepinner, vaginal, uretral og / eller rektal utflod, og CSF.

Bruk ferske prøver og lag sterke inokulater på agaren. Prøvene blir sådd direkte ved utslipp av materiale og deretter utstrømning av utmattelse på overflaten.

Platene inkuberes ved 35-37 ° C i 24 til 48 timer i en mikroaerofil krukke (5% CO ₂ ). På slutten av inkubasjonstiden blir platene undersøkt for små, grå og noen ganger mucoide utseende kolonier.

Utfør gram og bekreftende biokjemiske tester på mistenkelige kolonier.

QA

Følgende mikrobielle stammer kan brukes til kvalitetskontroll av Thayer Martin Agar.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 og Neisseria meningitidis ATCC 13090; Det forventes en tilfredsstillende utvikling i begge stammer.

Følgende stammer bør også inkluderes: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 og Candida albicans ATCC 10231. I alle av disse forventes en total eller delvis hemming i dette mediet.

begrensninger

-Vi må huske på at bakterier som er resistente mot hemmerne som brukes kan vokse i mediet.

-Det er stammer av Neisseria gonorrhoeae som kan være følsomme for konsentrasjonen av vankomycin som brukes. Av denne grunn anbefales det å bruke sjokolade-agar supplert med isovitalex, men uten hemmere.

-Det er nystatinresistente gjærstammer som kan vokse i dette mediet og forstyrre isolasjonen av sykdomsfremkallende Neisserias, spesielt gonococci.

referanser

1. Valtek diagnoselaboratorier. Thayer-Martin Agar. 2016. Tilgjengelig på: com
2. Britannia Laboratories. Thayer Martin Medium Modified. 2010. Tilgjengelig på: britanialab.com
3. Wikipedia-bidragsytere. Thayer-Martin agar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 26. oktober 2017, 16:33 UTC. Tilgjengelig på: wikipedia.org 4. Åpnet 28. februar 2019.
4. Britannia Laboratories. GC-agar. 2010. Tilgjengelig på: britanialab.com.
5. Laboratories BBL ™ Medium berikelse for raske mikroorganismer. 1999. Tilgjengelig på: bd.com
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 utg. Redaksjonell Panamericana SA Argentina.