TSI AGAR: BEGRUNNELSE, KLARGJØRING OG BRUK - BIOLOGI - 2026

Den TSI agar eller trippel sukker jernagar er et fast medium som tjener som en biokjemisk test for å lede den innledende identifikasjon av gram negative bakterier. Det er basert på å vise gjæringen av tilstedeværende sukkerarter, og produksjonen av hydrogensulfid og gass.

Sammensetningen og basis er veldig lik Kligler-jerntesten, med den forskjellen at sistnevnte kun inneholder glukose og laktose. I stedet, som navnet tilsier, inneholder trippel sukkerjernagar tre gjærbare karbohydrater: glukose, laktose og sukrose.

Bilder av TSI-testen med forskjellige mikroorganismer A. Escherichia coli, B. Shigella flexneri, C) Salmonella typhimurium, D. Pseudomonas aeruginosa. Kilde: Witmadrid, fra Wikimedia Commons

I tillegg har TSI-mediet fire proteinderivater som gjør det til en veldig næringsrik agar: gjærekstrakt, kjøttekstrakt, pepton og proteose pepton. Det inneholder også jernholdig ammoniumsulfat, natriumtiosulfat, natriumklorid, fenolrødt og agar.

En mikroorganismes manglende evne til å gjære glukosen som er tilstede i mediet, utelukker den umiddelbart fra å tilhøre Enterobacteriaceae-familien. Derfor er denne testen avgjørende for å bestemme hvilken identifikasjonsvei å ta for å bestemme slekt og arter.

Hvert laboratorium bestemmer om de skal jobbe med TSI-agar eller med Kligler jernagar.

Basis

Hver av forbindelsene utfører en funksjon i mediet.

Natriumklorid og agar

Natriumklorid er nødvendig for å opprettholde den osmotiske balansen i mediet. Mens agaren gir solid konsistens.

PH-indikator (fenolrød)

PH i det tilberedte mediet er balansert til 7,3 og pH-indikatoren (fenolrød) blir gul under 6,8. Dette betyr at små mengder syrer produsert ved gjæring av sukker vil gjøre mediet fra rødoransje til gult.

Hvis ingen fermentering forekommer, vil det være alkalisering av mediet ved bruk av peptoner, og blir fra rødoransje til sterk rød.

Proteinderivater (gjærekstrakt, kjøttekstrakt, pepton og proteose pepton)

Når bakteriene metaboliserer proteinene som er til stede i TSI-agar, produseres aminer som alkaliserer mediet (hovedsakelig på skrå nivå), fordi reaksjonen krever oksygen. Aminene gjør rammen lysrød.

Men dette vil avhenge av bakterienes evne til å gjære karbohydrater eller ikke.

Fermentering av karbohydrater (glukose, laktose og sukrose)

Studiet av gjæring av sukker kan gi flere bilder, og hver av dem tolkes annerledes. Testtolkningen deler mikroorganismer inn i tre kategorier: ikke-fermenterende glukose, ikke-fermenteringsmidler og laktose / sukrose-fermentatorer.

Det skal bemerkes at mengden glukose i mediet er begrenset, mens konsentrasjonen av laktose og sukrose er 10 ganger høyere.

Bakterier fra Enterobacteriaceae-familien og andre glukosegjærende mikroorganismer vil begynne å gjære dette sukkeret, da det er det enkleste karbohydratet for energi.

På den annen side er laktose og sukrose komplekse karbohydrater som må brytes ned og omdannes til glukose for at de skal komme inn i Embden-Meyerhof syklus.

-Mikroorganismer som ikke gjærer glukose

Når den inokulerte mikroorganismen ikke klarer å gjære glukose, vil mye mindre være i stand til å gjære andre karbohydrater. Derfor dannes det ikke syrer her, men det dannes aminer i skråningen ved bruk av peptoner.

I dette tilfellet blir rammen til en sterkere rød og bunnen av røret kan forbli uendret, eller det kan også være alkalisert, slik at hele røret blir rødt.

Tolkning: K / K betyr alkalisk skrå / alkalisk eller nøytral bunn

På bildet i begynnelsen av artikkelen se bildet av rør D.

Dette resultatet indikerer at mikroorganismen ikke tilhører Enterobacteriaceae-familien.

-Mikroorganismer som ikke gjærer laktose / sukrose

Hvis bakteriene er i stand til å gjære glukose, men ikke laktose eller sukrose, vil følgende skje:

Bakteriene vil konsumere all glukose som er til stede etter omtrent 6 til 8 timer, og vil kunne forsure både avfasningen og blokken; det vil si at agaren vil ha blitt helt gul. Men når glukose er tømt og laktose og sukrose ikke kan brukes, vil bakteriene begynne metabolismen av proteiner.

Denne reaksjonen trenger oksygen, derfor skjer nedbrytningen av peptoner på overflaten (skråkant). Aminene produserte alkaliserer rammen som blir gul til rød. Denne reaksjonen er påvist etter 18 til 24 timers inkubasjon.

Tolkning: K / A betyr alkalisk avfasning og surt vatt.

På bildet i begynnelsen av artikkelen se bildet av rør B.

-Laktose / sukrose fermenterende mikroorganismer

Mikroorganismer som er i stand til å fermentere laktose og sukrose, kan åpenbart gjære glukose. Etter at den minimale mengden glukose som er tilstede i mediet er oppbrukt, begynner det dannede pyruvatet å metabolisere seg for å danne syrer gjennom den aerobe Krebs-syklusen, og i løpet av 8 til 12 timer vil alt mediet være gult.

Hvis bakteriene er i stand til å bryte ned laktose eller sukrose, vil syrer fortsette å produseres, og etter 18 til 24 timer vil hele røret - skrå og pluggen - fortsette å gulne.

Det skal bemerkes at bruk av glukose utføres på to måter: den ene aerobt ved rørets skråkant, og den andre anaerobt i bunnen av røret.

Tolkning: A / A betyr syre skrå / syre bunn. Det kan hende at den ikke har gass.

På bildet i begynnelsen av artikkelen se bildet av rør A.

Gassproduksjon

Noen mikroorganismer er i stand til å produsere gass under fermentering av sukker. Gassen er påvist i røret av trykket den utøver i agaren. Trykk forårsaker boble dannelse eller forskyvning av agaren. Noen ganger kan dannelsen av gass sprekke mediet.

Det er viktig at når såingen av TSI-mediet blir punkteringen gjort rent gjennom midten av agaren til den når bunnen. Hvis punkteringen blir ledet mot veggene i røret, kan det føre til falske positive sider i produksjonen av gassen, siden den vil slippe ut gjennom den feil dannede kanalen.

Gassproduksjonen, så vel som reaksjonene som oppstår i agarfasken, trenger oksygen, derfor anbefales det at røret blir dekket med en bomullsplugg, og hvis et Bakelitt lokk brukes, skal det ikke være helt tett.

Gassproduksjon rapporteres som positiv (+) eller negativ (-).

Gassformasjonsmønstre. Kilde: Ordning laget av MSc. Marielsa Gil. Bildekilde: VeeDunnFlickr.com/Y_tambe, via Wikimedia Commons

Natriumtiosulfat og jernholdig ammoniumsulfat

Bakterier som er i stand til å produsere hydrogensulfid (fargeløs gass) tar opp svovelen fra natriumtiosulfat som er tilstede i mediet. Når H ₂ S er dannet, reagerer det med ferroammoniumsulfat, produserer jernsulfid (tydelig synlig svart bunnfall).

H ₂ S-produksjon rapporteres som positiv (+) eller negativ (-).

På bildet i begynnelsen av artikkelen se bildet av rør C.

Forberedelse

Vei 62,5 g av det dehydrerte trippel sukkerjernagar (TSI) og løses opp i en liter destillert vann.

Varm til agar er helt oppløst. Kok opp i et minutt under omrøring ofte. Fordel 4 ml av mediet i 13/100 prøverør med bomullshetter.

Steriliser i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter. Fjern fra autoklaven og la den hvile i vinkel. Forsikre deg om at både sokkelen og rammen har samme avstand.

Oppbevares i kjøleskap 2-8 ° C. La det varme opp før du sår bakteriestammen.

Fargen på det dehydrerte mediet er lys beige og det tilberedte mediet er rødoransje.

Den endelige pH for det tilberedte mediet er 7,3 ± 0,2.

applikasjoner

TSI-testen er mye brukt på mikrobiologisk laboratorienivå. Denne testen er viktig for å veilede hvilken type test som må brukes for å identifisere slekten og artene. Dens gode utførelse og tolkning kan redde materiale og arbeidskraft.

Hvis resultatet er en TSI K / K og cytokromoksidasetesten er positiv, er det kjent at tester bør brukes for å identifisere ikke-gjærende Gram-negative stenger, som Pseudomonas, Alcaligenes, Achromobacter, Burkholderia, blant andre slekter. Hvis den er oksidase negativ, er den orientert mot slektene Acinetobacter, Stenotrophomonas, etc.

På den annen side, hvis en TSI A / A eller K / A oppnås og cytokromoksidasetesten er negativ, jo mer nitrater reduseres til nitriter, vil vi være sikre på at det er en mikroorganisme som tilhører Enterobacteriaceae-familien. I dette tilfellet vil identifikasjonsveien fokusere på spesifikke tester for denne gruppen av bakterier.

På den annen side, hvis et K / A- eller A / A-bilde oppnås og cytokromoksidasetesten er positiv, vil de ekstra testene som skal settes sammen, være rettet mot identifisering av fermenterende stammer som ikke tilhører Enterobacteriaceae-familien, slik som: Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio og Pasteurella.

En TSI med hydrogensulfid, oksidase-negativ, vil lede identifikasjonen av følgende slekter av familien Enterobacteriaceae: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella eller Salmonella.

En TSI med liten eller moderat hydrogensulfid i det alkaliske skråkant med en alkalisk bakgrunn og en positiv oksydase vil lede bruk av tester for identifisering av ikke-fermenterende H _2- S- produserende gram-negative staver, slik som Shewanella putrefaciens.

Endelig kan TSI brukes til undersøkelse av hydrogensulfidproduksjon i Gram-positive baciller, spesielt når det er mistanke om Erysipelothrix rhusiopathiae.

sådd

TSI-mediet må inokuleres med rene kolonier, isolert i primære eller selektive kulturer. Hvis kolonien er hentet fra selektive medier som ble podet med prøver med blandet flora, bør man ta forsiktighet for å ta det bare fra overflaten, siden levedyktige stammer som er hemmet i dette mediet, kan eksistere i den nedre delen av kolonien.

Derfor bør sløyfen aldri avkjøles på selektivt medium, og deretter tas kolonien opp og inokuleres med TSI-medium.

Såingen vil bli gjort med en rett sløyfe eller nål. Det blir laget en punktering, og pass på at den er gjennom midten av midten til den når bunnen, og så er såingen ferdig ved å inokulere overflaten i en sikksakkform. Ikke gjør to punkteringer.

Inkuber ved 37 ° C i aerobiose i 18-24 timer. Tolk på dette tidspunktet, verken før eller etter.

begrensninger

TSI-testen bør leses innen 18 til 24 timer etter inkubering. En avlesning før dette tidspunktet kan gi en falsk positiv for A / A-gjæring. Mens en lesning etter denne tiden kan gi opphav til et falskt negativt bilde av en ikke-gjæring, på grunn av forbruket av peptoner som alkaliserer mediet.

referanser

1. Mac Faddin J. (2003). Biokjemiske tester for identifisering av bakterier av klinisk betydning. 3. utg. Redaksjonell Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 utg. Redaksjonell Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. utg. Redaksjonell Panamericana SA Argentina.
4. "TSI-agar." Wikipedia, The Free Encyclopedia. 10 jul 2018, 08:09 UTC. 10. februar 2019, 03:33 Tilgjengelig på: es.wikipedia.org
5. Britannia Laboratories. TSI Agar (Triple sukkerjernagar). 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
6. BD Laboratories. Trippel sukkerjernagar (TSI Agar). 2003. Tilgjengelig på: bd.com