LYSEGRØNN AGAR: BEGRUNNELSE, KLARGJØRING OG BRUK - BIOLOGI - 2026

Den geniale grønne agaren er et solid kulturmedium med høy grad av selektivitet. Det brukes utelukkende for isolering av stammer av slekten Salmonella, men det er noen unntak, for eksempel typhi og paratyphi arter som ikke vokser på dette mediet.

Letingen etter slekten Salmonella er hyppig i avføring, vann eller matprøver. Slik sett kan dette mediet være veldig nyttig. Denne agaren ble opprettet i 1925 av Kristensen, Lester og Jurgens, senere ble den modifisert av Kauffmann.

Lysegrønn agar. Fermentering og ikke-gjærende kolonier. Kilde: MJ Richardson / Invisible Worlds utstilling - 2012geograph.org.uk/foto/2815842 Creative Commons License.

Den består av pluripeptoner fra peptisk fordøyelse av dyrevev og bukspyttkjertelen fordøyelse av kasein, den inneholder også gjærekstrakt, natriumklorid, laktose, sukrose, fenolrød, lysegrønn og agar-agar.

Det er preget av å være et ganske ugjestmildt miljø for de fleste bakterier, noe som favoriserer veksten av Salmonella, men noen coliforms er i stand til å eksistere i den og utvikle seg svakt.

Det er viktig å merke seg at Shigella-slekten ikke vokser på dette mediet, og heller ikke Salmonella typhimurium eller Salmonella paratyphi. Derfor, hvis du vil isolere disse mikroorganismer, bør andre medier brukes, for eksempel XLD-agar, blant andre.

Basis

Lysegrønn agar

Hver av komponentene som utgjør mediet oppfyller en spesifikk funksjon som bestemmer egarens egenskaper og egenskaper.

Pluripeptoner og gjærekstrakt er kilden til næringsstoffer som mikroorganismer tar fra seg nitrogenet og mineralene som er nødvendige for deres utvikling. Laktose og sukrose er energikilder for mikroorganismer som er i stand til å gjære dem.

Lysegrønt er det hemmende stoffet som forhindrer vekst av Gram-positive bakterier og et stort antall Gram-negative mikroorganismer.

Natriumklorid gir mediet osmotisk stabilitet. Mens fenolrødt er pH-indikatoren, endrer det farge når det oppdages syreproduksjon fra karbohydratgjæring.

Ikke-gjærende kolonier av laktose og sukrose vokser på dette mediet i en rosa eller gjennomsiktig hvit farge, på en rød bakgrunn. For eksempel bakterier av slekten Salmonella.

Mens laktose eller sukrose fermenterende bakterier som er i stand til å vokse på dette mediet, utvikler gulgrønne eller gulgrønne kolonier på en grønngul bakgrunn. For eksempel Escherichia coli og Klebsiella pneumoniae.

Lysegrønne agar (BGA) varianter

Det er andre varianter av knallgrønn agar; Novobiocin Brilliant Green Glucose (NBG) Agar og Novobiocin Brilliant Green Glycerol Lactose (NBGL) Agar.

Novobiocin Bright Green Glucose Agar

Inneholder Trypticase Soygargar, jernholdig ammoniumcitrat, natriumtiosulfat Pentahydrat, fenolrød, glukose, lysegrønn, novobiocin og destillert vann.

Det brukes til isolering av Salmonella-kolonier fra avføringsprøver.

I dette tilfellet er lysegrønt og novobiocin de hemmende stoffene som forhindrer vekst av Gram-positive bakterier og noen Gram-negative mikroorganismer.

Natriumtiosulfat er kilden til sulfid og jernholdig citrat er kilden til jern, begge er nødvendige for å avdekke hydrogensulfidproduksjon gjennom dannelse av et svart jernsulfidbunnfall.

Glukose er det gjærbare karbohydratet og fenolrødt er pH-indikatoren.

På dette mediet utvikles Salmonella-koloniene store med et svart senter omgitt av en rødlig glorie og etterfulgt av et tydelig synlig område. Noen stammer av Citrobacter freundii produserer kolonier som er identiske med Salmonella.

Novobiocin Brilliant Green Glycerol Lactose Agar (NBGL)

Dette mediet inneholder trypticase soyagar, jern-ammoniumcitrat, natriumtiosulfat, laktose, glyserol, lysegrønn, novobiocin og destillert vann.

Forskjellen mellom dette mediet og det forrige er at glukose er substituert med laktose og glyserol og fenolrød brukes ikke.

Mediet brukes også til å isolere Salmonella-arter, koloniene utvikler svarte på grunn av produksjonen av hydrogensulfid.

Bare koloniene som ikke produserer syre fra glycerol eller laktose oppnå tilstrekkelig H ₂ S produksjon , fordi lave pH forstyrrer H ₂ S dannelse . Dette resulterer i fargeløse kolonier for de fleste arter av Proteus og Citrobacter.

Forberedelse

-Vei 58 gram av det kommersielt oppnådde dehydrerte mediet. Legg den i en liter omdestillert vann. Bland, la stå noen minutter, og sett blandingen på en varmekilde til den er helt oppløst.

-Autoklave ved 121 ° C i 15 minutter, ikke overskrider steriliseringstiden.

La den hvile og serveres mens den er varm i sterile petriskåler. Den endelige pH-verdien bør være 6,9 ​​± 0,2.

-La stivne og oppbevare i kjøleskapet til bruk. Før podingen skal platene ta romtemperatur.

-Pulvermediet er grønn i fargen og tilberedt tar en oransjebrun eller rødgrønn farge, avhengig av pH og det kommersielle selskapet. En veldig brun farge tyder på at agaren var overopphetet.

-Når agaren har stivnet, anbefales det ikke å rekast om, da mediet forverres.

Bruksområder / applikasjoner

Dette mediet brukes til å søke etter stammer av slekten Salmonella fra avføringsprøver og meierismat, blant andre.

Fordi det er et ganske ugjestmildt miljø, anbefales det å så et rikelig inokulum hvis den direkte prøven brukes. Ellers bør en pre-anriking og berikelse av prøvene gjøres før såing i dette mediet.

Siden noen stammer av Salmonella hemmes eller vokser med vanskeligheter, anbefales det å følge dette mediet med andre selektive agar for Salmonella.

Hver koloni med en typisk Salmonella-karakteristikk må underkastes biokjemiske tester for å bli definert.

QA

For å teste den gode ytelsen til det lysegrønne agarmediet, kan ATCC-stammer brukes til å observere deres utvikling på det.

De hyppigste stammene som brukes for kvalitetskontroll er: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922, Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus 65.

De tre første skal gi rosa eller gjennomsiktige hvite kolonier på rød bakgrunn. Salmonella med god utvikling og Proteus med liten eller regelmessig vekst.

For Klebsiella og Escherichia forventes gulgrønne kolonier med gul bakgrunn, og i tilfelle Shigella og Staphylococcus bør de hemmes.

Det dehydrerte mediet må lagres ved romtemperatur, på et tørt sted, fordi mediet er veldig hygroskopisk.

referanser

1. Laboratorio Difco Francisco Soria Melguizo SA Brilliant Green Agar. 2009
2. Britannia Laboratory. Bright Green Agar. 2015.
3. BD-laboratorium. BD Brilliant Green Agar. 2013.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. (5. utg.). Argentina, Redaksjonelt Panamericana SA
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 utg. Argentina. Redaksjonell Panamericana SA