VOGEL-JOHNSON AGAR: BEGRUNNELSE, KLARGJØRING OG BRUK - BIOLOGI - 2026

Den agar Vogel-Johnson er et fast medium selektivt og differensielt kultur, spesielt formulert for isolering av Staphylococcus aureus. Dette mediet ble opprettet av Vogel og Johnson i 1960 fra modifiseringen av telluritt glycinagar formulert i 1955 av Zebovitz, Evans og Niven.

Modifiseringen besto i å øke konsentrasjonen av mannitol til stede i mediet og i inkorporering av en pH-indikator. Den nåværende formelen er sammensatt av triptein, gjærekstrakt, mannitol, dipotassiumfosfat, litiumklorid, glycin, fenolrød, agar, 1% kaliumtellurittløsning og vann.

Kilde: Pixinio.com/Laboratorio de la Clínica ProcreaTec. Flickr.

Det skal bemerkes at det er andre medier som, i likhet med Vogel-Johnson-agar, er selektive for isolering av S. aureus, for eksempel salt mannitol-agar og Baird Parker-agar. Slik sett kan det sies at grunnlaget for Vogel-Johnson agar er en blanding mellom salt mannitol-agar og Baird Parker-agar.

I den første skilles S. aureus-koloniene ved å fermentere mannitolen og vri pH-indikatoren til gul. På den annen side, i den andre, er S. aureus preget av å redusere telluritt til tellur og danne grå til svarte kolonier. Begge egenskapene er observert i Vogel-Johnson agar.

Dette mediet er, som sine kolleger, nyttig for påvisning av Staphylococcus aureus i matprøver, sanitære kontroller av industriprodukter og i kliniske prøver.

Basis

Næringsforsyning

Vogel-Johnson medium inneholder triptein og gjærekstrakt; Begge stoffene gir langkjedede aminosyrer som fungerer som kilder til karbon og nitrogen som er nødvendige for bakterievekst. Bakterier som kan vokse i dette mediet vil ta næringsstoffene fra disse stoffene.

Selektiv makt

Vogel-Johnson agar er i stand til å hemme veksten av Gram-negative bakterier og til og med noen Gram-positive bakterier, noe som favoriserer utviklingen av koagulasepositive stafylokokker. De hemmende stoffene er kalium telluritt, litiumklorid og glycin.

Differensiell kraft

Stoffene som lager dette differensialmediet er mannitol og kalium-telluritt. Mannitol er et karbohydrat, og når det er fermenterte syrer produseres det som gjør at mediet blir fra rød til gul, noe som skjer takket være tilstedeværelsen av den røde fenol-pH-indikatoren.

Mens den fargeløse telluritten når den er redusert til gratis metallisk tellur, tar en mørk grå til svart farge.

Staphylococcus aureus gjærer mannitol og reduserer telluritt til tellur. Av denne grunn er de typiske koloniene av S. aureus i dette mediet grått eller svart omgitt av et gult medium.

Bakterier som vokser i dette mediet og ikke reduserer telluritt eller gjære mannitol, vil danne gjennomsiktige kolonier omgitt av et rødfarget medium, enda mer intens enn den opprinnelige fargen, på grunn av alkaliseringen av mediet ved bruk av peptoner.

På den annen side vil bakterier som reduserer telluritt, men ikke gjærer mannitol, vokse som grå eller svarte kolonier omgitt av et dypt rødt medium.

Hvis mediet ble fremstilt uten tilsetning av kalium-telluritt, ville S. aureus-kolonier utvikle seg som gule kolonier, omgitt av gult medium, som i salt mannitol-agar.

Osmotisk balanse og størkningsmiddel

Dipotassium phosphate opprettholder den osmotiske balansen i mediet og justerer pH til nøytralitet 7.2. Mens agaren gir solid konsistens til kulturmediet.

Forberedelse

Kalium-tellurittløsning 1% vekt / volum

Denne løsningen er ikke inkludert i det dehydrerte mediet, siden den ikke kan steriliseres i en autoklav. Av denne grunn tilberedes den separat og tilsettes det allerede steriliserte mediet.

Noen kommersielle hus selger den klare 1% kalium-tellurittløsningen. Hvis du vil forberede deg på laboratoriet, fortsett som følger:

Vei ut 1,0 g kaliumtelluritt og mål 100 ml destillert vann. Løs opp kalium-telluritten i en del av vann, og fullfør deretter vannmengden til den når 100 ml. Steriliser løsningen ved filtreringsmetode.

Vogel-Johnson Agar Base Medium

Vei ut 60 gram av det dehydrerte mediet, og oppløs i 1 liter destillert vann. Blandingen varmes opp til koke for å lette fullstendig oppløsning. Under oppløsningsprosessen omrøres mediet ofte.

Steriliser i autoklav ved 15 kilo trykk og 121 ° C i 15 minutter. Fjern fra autoklaven og la den hvile til mediet når en temperatur på omtrent 45 til 50 ° C. Tilsett 20 ml av den tidligere tilberedte 1% kalium-tellurittløsningen.

Bland og hell i sterile petriskåler. La stivne og bestill omvendt på tallerkenholderne for senere å oppbevare i kjøleskapet til bruk.

Den endelige pH for det tilberedte mediet bør være 7,2 ± 0,2.

Før du sår en prøve, vent til platen når romtemperatur.

Fargen på det tilberedte mediet er rød.

Bruk

Selv om det kan brukes til isolering av S. aureus i alle typer prøver, brukes det hovedsakelig til mikrobiologisk analyse av farmasøytiske produkter, kosmetikk og mat.

Det anbefales at inokulatet er tett. Såingen kan gjøres ved å score med et platinahåndtak eller med overflaten med en Drigalski-slikkepott.

Plater inkuberes ved 35-37 ° C i 24 til 48 timers aerobiose.

QA

Følgende kontrollstammer kan brukes til å utføre kvalitetskontroll på Vogel-Johnson medium:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 eller Proteus mirabilis ATCC 43071.

Det forventede resultatet er som følger: for S. aureus stammer veksten tilfredsstillende med svarte kolonier omgitt av gult medium. For S. epidermidis regelmessig vekst med gjennomskinnelige eller svarte kolonier omgitt av rødt medium.

Likeledes forventes total hemming for E. coli, og delvis eller total hemming for Proteus mirabilis; hvis den vokser vil den gjøre det sparsomt og koloniene vil være svarte omgitt av en rød farge.

referanser

1. BD Laboratories. VJ (Vogel og Johnson Agar). 2006. Tilgjengelig på: bd.com
2. Britannia Laboratories. Vogel- Johnson Agar. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
3. Britannia Laboratories. Kalium-telluritt. 2015. Tilgjengelig på: britania.com
4. Himedia Laboratory. Vogel- Johnson Agar Medium. 2018. Tilgjengelig på: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
5. Vogel- Johnson Agar Base. Merck Microbiology Manual. 12. utgave, s. 502-503. Tilgjengelig på: Brukere / Team / Nedlastinger
6. Wikipedia bidragsytere, "Ágar Vogel Johnson", Wikipedia, et gratis leksikon, tilgjengelig på: wikipedia.org.
7. Venezuelansk Standard Covenin 1292-89. (1989). Matvarer. Isolasjon og oppregning av Staphylococcus aureus. Tilgjengelig på: sencamer.gob.ve