XLD AGAR: BEGRUNNELSE, KLARGJØRING OG BRUK - BIOLOGI - 2025

Den XLD agar eller Xylose Lysin desoksykolat agar-medium er et selektivt og differensielt fast kultur for isolering av enteropathogens. Taylor designet XL agar (Xylose, Lysine) formel for å forbedre isolasjonen av Shigella-slekten.

Han observerte at denne slekten ble hemmet i de fleste medier beregnet på isolasjon av enteropatogener. Deretter ble natriumdeoksykolat, natriumtiosulfat og jernholdig ammoniumcitrat tilsatt for å øke dens selektivitet. Denne formelen har vist seg å være nyttig for både isolering av Shigella og Salmonella.

Forskjeller av koloniene Shigella, Salmonella og coliforms på XLD-agar. A. Shigella sp, B. Salmonella sp, C. Coliforms. Kilder: A. Av: CDC / Amanda Moore, MT; Todd Parker, PhD; Audra Marsh, høflighet: Public Health Image Library B. https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/1/1f/Salmonella_species_growing_on_XLD_agar_-_Showing_H2S_production_-_Detail.jpg C. Av: CDC / Dr. JJ-bonde, Courtesy: Public Health Image Library

XLD agar er sammensatt av gjærekstrakt, natriumdeoksykolat, xylose, lysin, laktose, sukrose, natriumtiosulfat, jern-ammoniumcitrat, natriumklorid, fenolrødt og agar. XLD Agar og SS Agar-duo brukes i de fleste bakteriologilaboratorier for å studere fekale prøver for Shigella og Salmonella.

Andre laboratorier foretrekker kombinasjonen av CHROMagar Salmonella og XLD-agar, blant andre tilgjengelige alternativer. Disse duoene kan tilberedes i doble petriskåler. På den ene siden plasserer de XLD-agar og på motsatt side det andre valgte mediet.

Basis

-Næringskraft

XLD-agar har gjærekstrakt, som fungerer som en kilde til næringsstoffer for mikroorganismer som vokser på denne agaren. I tillegg gir tilstedeværelsen av karbohydrater (xylose, sukrose og laktose) energi til bakteriene som kan gjære dem.

-Selektivitet av mediet

Som et hemmende stoff presenterer det natriumdeoksykolat; Dette forhindrer vekst av Gram-positive bakterier, noe som gir mediet en selektiv karakter.

-Differensiell kraft

Typiske Shigella-kolonier

Som allerede nevnt inneholder XLD-agar xylose; Dette karbohydratet er gjæret av alle bakteriene som vokser i dette mediet med unntak av Shigella-slekten.

Dette er en av egenskapene som gir den sin forskjellige karakter, siden Shigella-koloniene skilles fra resten ved å utvikle røde kolonier, mens de andre bakteriene produserer gule kolonier.

Typiske kolonier av Salmonella

Slekten Salmonella gjærer også xylose, og opprinnelig genererer gule kolonier. Etter å ha tappet karbohydrat-xylosen, angriper den imidlertid lysin for sin enzymlysin-dekarboksylase. Dekarboksyleringen av lysin genererer alkalier som gjør fargen på kolonien og det omkringliggende mediet til det originale røde.

Denne oppførselen utføres bare av Salmonella, siden koliformene som dekarboksylerer lysin ikke kan alkalisere mediet. Dette er fordi coliforms også gjærer laktose og sukrose som er til stede; derfor er produksjonen av syrer veldig høy, og etterlater den gule kolonien i disse bakteriene.

Det skal bemerkes at Salmonella-slekten ikke gjærer sukrose eller laktose.

Produksjon av H

XLD tillater agar også påvisning av H- ₂ , S- produserende Salmonella-arter ; For dette er den avhengig av kilden til svovel som er representert av natriumtiosulfat og en reaksjonsutvikler, som er jern-ammoniumcitrat.

De sistnevnte reagerer med H ₂ S (fargeløs gass) og danner en synlig uoppløselig svart utfelling av jernsulfat. På denne måten vil egenskapene til salmonellakoloniene være røde med et svart senter.

Det bør bemerkes at for H- _2- S- dannelsesreaksjonen til å oppstå , er en alkalisk pH-verdi er nødvendig. Det er derfor andre Enterobacteriaceae at formen H ₂ S ikke kan gjøre det eller gjøre det dårlig i dette medium, ettersom den høye surhet som produseres ved fermentering av karbohydrater til stede hemmer eller hindrer reaksjonen.

-Sodiumklorid, agar og fenolrødt

Endelig opprettholder natriumklorid osmotisk balanse; agar er størkningsmiddelet og fenolrød oppdager pH-endringer, og gjør fargen på koloniene og mediet.

Forberedelse

Vei ut 55 g dehydrert XLD-medium og oppløs i 1 liter vann. Varm opp og rør blandingen til den når kokepunktet. Ikke overopphetes, da varme skader mediet og skaper et bunnfall som endrer morfologien til typiske kolonier.

Dette mediet må ikke autoklaveres. Ved oppløsning må den føres til et vannbad ved 50 ° C. Ved avkjøling skal det serveres direkte på sterile petriskåler. De kan helles i enkeltplater eller doble plater. De får stivne og oppbevares i kjøleskapet til bruk.

Temperert før bruk. Siden det er et ikke-sterilt medium, anbefales det å tilberede det nær bruksdato.

Den endelige pH for mediet bør være 7,4 ± 0,2. Fargen på det tilberedte mediet er oransjerød, gjennomskinnelig uten bunnfall.

Hvis du har Xylose Lysine (XL) base agar, kan du tilsette natriumdeoksykolat, natriumtiosulfat og jernammoniumsitrat. På denne måten oppnås XLD-agarformelen.

applikasjoner

XLD-agar brukes til utvinning av enteropatogener, hovedsakelig av slekten Shigella og sekundært av slekten Salmonella. Det er nyttig for å evaluere avføring, vann og matprøver.

Typer av prøver

avføring

Avføringsprøver kan sås direkte på XLD-agar, noe som gir en god fordeling av materialet for å oppnå isolerte kolonier.

For å forbedre utvinning av Salmonella kan XLD-agar streises fra Salmonella-berikingsmedier.

Mat

Når det gjelder mat, kan anrikningsbuljong for Salmonella og Shigella brukes. For Salmonella kan du bruke selenitt cystinbuljong, lysegrønn tetrationionatbuljong, blant andre.

Når det gjelder Shigella, kan den anrikes med Shigella buljong med 0,5 u / ml novobiocin, inkubert ved 42 ± 1 ° C i 16-20 timer.

Vann

I vannanalyse anbefales blant annet membranfiltreringsteknikken og bruk av XLD-agar.

Planting og identifikasjonsforhold

Det seedede mediet inkuberes aerobt ved 35 ° C i 24 til 48 timer.

De typiske koloniene i hver slekt blir observert, de mistenkelige koloniene bør gjennomgå biokjemiske tester for å identifisere dem.

QA

For å evaluere kvalitetskontrollen av mediet, kan følgende bakteriestammer brukes: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella abony DSM 4224, Shigella flexneri ATCC 12022, Shigella sonnei ATCC 25931, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mir7130 , Klebsiella pneumoniae ATCC 33495.

Slekten Salmonella er preget av å presentere røde kolonier med et svart senter eller helt svarte kolonier på dette mediet. Mens Shigella-slekten koloniene må være røde, det vil si fargen på mediet.

Når det gjelder Escherichia coli, forventes det å bli fullstendig eller delvis hemmet; hvis den vokser er koloniene gule. For Proteus mirabilis forventes dårlig vekst med rosa kolonier med eller uten svart senter. Etter hvert vil Klebsiella-slekten vokse som gule kolonier.

Siste tanker

XLD-agar er mye brukt i bakteriologilaboratorier for sin høye effektivitet for utvinning av Shigella og har også en god utvinning av slekten Salmonella.

Rall et al. (2005) i sitt arbeid med tittelen "Evaluering av tre berikelsesbuljonger og fem faste medier for påvisning av Salmonella i fjørfe" demonstrerte at av de tre klassiske mediene som ble testet (lysegrønn agar, SS-agar og XLD-agar) , XLD-agar hadde den beste utvinningsgraden.

Utvinningsprosentene var som følger: 13,8% for knallgrønn agar, 27,6% for SS og 34,5% for XLD. Rambach-agar med 48% utvinning og CHROMagar med 79,3% ble bare overgått av kromogene medier.

referanser

1. Matbårne sykdommer. Shigellose. Tilgjengelig på: anmat.gov.ar
2. "XLD-agar." Wikipedia, The Free Encyclopedia. 9. februar 2019, 11:46 UTC. 10. april 2019, 19:25 wikipedia.org
3. BBL Laboratories. CHROMagar Salmonella / BD XLD Agar (biplate). 2013 Tilgjengelig på: bd.com
4. Lab. Neogen. XLD-agar. Tilgjengelig på: foodsafety.neogen
5. Francisco Soria Melguizo Laboratory. XLD Agar. Tilgjengelig på: http://f-soria.es/Inform
6. Rall L, Rall R, Aragon C, Silva M. Evaluering av tre berikingsbuljonger og fem plateringsmedier for Salmonella-påvisning i fjørfe. Braz. J. Microbiol. 2005; 36 (2): 147-150. Tilgjengelig fra: scielo.br
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 utg. Redaksjonell Panamericana SA Argentina.