PEPTONVANN: BEGRUNNELSE, TILBEREDNING OG BRUK - BIOLOGI - 2026

Den peptonvann er en flytende anrikningsmediet, ikke-selektive, som hovedsakelig brukes som fortynningsmiddel matvareprøver eller andre materialer. Dette mediet fra et kjemisk synspunkt er veldig enkelt, det inneholder kjøttpepton, natriumklorid og vann.

Det har en viss ernæringsmessig verdi, slik at du beriker prøven. Hvis det er misbrukte bakterier, har dette mediet kraften til å reparere levedyktighet. Det er spesielt nyttig i utvinning av bakterier som tilhører Enterobacteriaceae-familien.

Peptonvann på flasker. Kilde: MSc. Marielsa gil

Ved utvinning av Salmonellas anbefales bruk av den buffete peptonvannvarianten; Dette fungerer som et anrikningsmedium for prøven, i dette tilfellet inneholder det andre elementer som dinatriumfosfat og dipotassiumfosfat.

Normalt tilberedes peptonvann ved nøytral pH, men det er andre varianter der det er nødvendig at pH er 8,5 ± 0,2 (alkalisk), fordi bakteriene som skal isoleres er alkalifile, så som Vibrio cholerae.

Videre kan dette mediet brukes som et basemedium for karbohydratfermenteringstester.

Basis

Peptoner gir næringsstoffene som kreves for bakterievekst, spesielt nitrogen og kortkjedede aminosyrer, mens natriumklorid opprettholder osmotisk balanse.

Videre gjør mediet det mulig å spre, homogenisere og reparere bakterieceller som har blitt skadet av industrielle prosesser.

Som et fortynningsmiddel er det ideelt, effektivt erstatte fysiologisk løsning (SSF) eller fosfatbufferløsning (PBS).

Bakteriell vekst er tydelig ved å observere dens turbiditet.

Forberedelse

Hjemmelaget tilberedning (ikke kommersiell)

Vei 1 g pepton og 8,5 g natriumklorid, oppløs i 1 liter destillert vann. PH-verdien bør justeres til 7,0. For dette kan 1N natriumklorid brukes.

Forberedelse ved bruk av kommersielt medium

Vei 15 g av det dehydrerte mediet og oppløst i en liter destillert vann. Homogeniser blandingen. Om nødvendig kokes blandingen i 1 minutt for å hjelpe den totale oppløsningen. Server i 100 ml flasker eller 10 ml rør etter behov. Autoklaver ved 121 ° C i 15 minutter.

Avkjøl og bruk eller oppbevar i kjøleskap. Den endelige pH for mediet er 7,2 ± 0,2.

Fargen på det dehydrerte mediet er lys beige og det tilberedte mediet er lys rav.

Forberedelse til gjæringstester

Til det forrige preparatet - før sterilisering - må karbohydratet tilsettes til en sluttkonsentrasjon på 1%, pluss Andrade-indikatoren (sur fuchsin) eller fenolrød (0,018 g / L). Rørene skal være utstyrt med en Durham-klokke for å observere gassdannelse.

Andre varianter av peptonvann

Bufret eller bufret peptonvann

Den inneholder enzymatisk hydrolysat av kasein, natriumklorid, dihydrogen-kaliumfosfat og natriumhydrogenfosfat-dodekahydrat. Den endelige pH er 7,0 ± 0,2.

Vei 20 g av det dehydrerte mediet og oppløs det i 1 liter destillert vann. La den hvile i cirka 5 minutter. Varm opp i 1 minutt til helt oppløst.

Hell i passende glass etter behov. Steriliser ved bruk av autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter.

-Alkalisk peptonvann

Vei 25 g av det dehydrerte mediet og oppløs i 1 liter vann. Fortsett som beskrevet ovenfor. PH varierer fra 8,3 til 8,7.

Bruk

Inokulatet gjøres ved å plassere prøven direkte.

Det brukes til å fortynne prøver, spesielt når det mistenkes at det kan være skadede bakterier. Vanligvis er fortynningene 1:10 og 1: 100.

Inkuber i 24 timer i aerobiose ved 35-37 ° C.

Avføringsprøver

For avføringsprøver for Salmonella anbefales bruk av bufret eller bufret vann som et pre-anrikningsmedium.

Gjør slik:

Hvis avføringen er dannet, ta 1 g prøve. Hvis de er flytende, ta 1 ml avføring og suspendert i et rør med 10 ml buffet peptonvann. Når det gjelder rektal vattpinne, slipp du ut materialet som er i vattpinnen i røret med bufret peptonvann.

I alle tilfeller må du blande og homogenisere prøven veldig godt.

Inkuber ved 37 ° C i 18 til 24 timer. Deretter subkultur i en berikelsesbuljong som selenitt cystinbuljong eller tetrathionatbuljong ved 37 ° C i 18-24 timer mer. Dyrk til slutt i selektive medier for Salmonella, for eksempel SS-agar, XLD-agar, Hektoen-agar, blant andre.

Matprøver

Peptonvann brukes som et anrikningsmedium eller som et enkelt fortynningsmiddel, men hvis det er søkt om Salmonella-arter, brukes det som et pre-anrikningsmedium, som allerede beskrevet.

Fortsett som følger i mat:

For fast mat veier 25 g av prøven og for flytende mat måler du 25 ml av den. Plasser nevnte del i kolber som inneholder 225 ml peptonvann. Bland og homogeniser prøven.

Hvis den mikrobielle belastningen mistenkes å være høy, kan serie- eller desimalfortynning gjøres for å lette tellingen av kolonidannende enheter (CFU).

Antall fortynninger vil avhenge av prøvetypen og erfaringene fra analytikeren.

Hvis det tvert imot mistenkes at mikrobiell belastning er veldig lav, er det ikke nødvendig å utføre fortynninger. Deretter subkultur på selektive medier.

Når det gjelder mat fra havet, som skalldyr, fisk, blant andre på jakt etter Vibrio cholerae eller andre arter av Vibrio, bør peptonvann justert til pH 8,5 (alkalisk peptonvann) brukes.

QA

Fra hver tilberedt batch skal ett til to rør inkuberes uten inokulering i 24 timer i aerobiose ved 37 ° C. På slutten av tiden skal ingen grumling eller fargeendring observeres.

Kjente kontrollstammer kan også brukes til å evaluere deres effektivitet:

Følgende bakteriestammer kan brukes for dette: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

I alle tilfeller forventes det en tilfredsstillende mikrobiell utvikling som blir observert av turbiditet i mediet.

begrensninger

-Dehydratiserte mediet er veldig hygroskopisk, så det må holdes borte fra fuktighet.

-Mediet skal ikke brukes hvis noen form for forringelse blir observert.

-Dehydratisert kulturmedium skal lagres mellom 10 - 35 ° C

-Det tilberedte mediet må oppbevares i kjøleskap (2-8 ° C).

referanser

1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B og Velázquez O. Teknikker for mikrobiologisk analyse av matvarer. 2009, 2. utg. Fakultet for kjemi, UNAM. Mexico. Versjon for manualer og dokumentadministrator (AMyD) ved Fakultet for kjemi, UNAM 1. Tilgjengelig på: http://depa.fquim.unam.mx
2. Britannia Laboratories. Buffet peptonvann. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
3. Neogen Laboratories. Peptonvann. Tilgjengelig på: foodsafety.neogen.com
4. Britannia Laboratories. Peptonvann. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
5. Merck Laboratories. Bufret peptonvann. Tilgjengelig på: merckmillipore.com
6. Conda Pronadisa Laboratories. Alkalt peptonvann. Tilgjengelig på: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 utg. Redaksjonell Panamericana SA Argentina.