UREA BULJONG: GRUNNMUR, KLARGJØRING OG BRUK - BIOLOGI - 2026

Den urea-buljong er et flytende kulturmedium, brukes for å påvise nærværet av urease enzym i visse mikroorganismer. Ureas er et mikrobielt enzym som produseres på en konstituerende måte, det vil si at det syntetiseres uansett om underlaget som det virker på eller ikke.

Ureasens funksjon er relatert til spaltning av organiske forbindelser. Ikke alle mikroorganismer er i stand til å syntetisere dette enzymet, og dets bestemmelse i laboratoriet gjør det mulig å identifisere visse bakteriestammer og til og med skille mellom arter av samme slekt.

Negativ og positiv urea-test. Kilde: Foto tatt av forfatteren MSc. Marielsa Gil.

Det er to typer urea-test: Stuart og Christensen. De er forskjellige i sammensetning og følsomhet. Den første er spesiell for å vise en stor mengde urease produsert av arter av slekten Proteus.

Den andre er mer følsom og kan oppdage små mengder urease som er generert sent av andre bakteriegener, som Klebsiella, Enterobacter, Staphylococcus, Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus, Helicobacter og Mycobacterium.

Stuarts Urea Bouillon består av urea, natriumklorid, Dipotassium Phosphate, Monopotassium Phosphate, Geast Extract, Phenol Red og destillert vann.

I mellomtiden er Christensens ureabuljong eller agar sammensatt av peptoner, natriumklorid, monopotassiumfosfat, glukose, urea, fenolrødt, destillert vann og agar-agar. Det siste bare hvis det er det faste mediet.

Basis

Enzymet urease hydrolyserer urea for å danne karbondioksid, vann og to molekyler ammoniakk. Disse forbindelsene reagerer og danner sluttproduktet kalt ammoniumkarbonat.

Stuarts urea buljong

Stuarts ureabuljong er mer bufret med en pH på 6,8. Derfor må mikroorganismen kunne danne store mengder ammoniakk for å gjøre fenolrød. PH-verdien bør stige over 8.

Derfor er Stuarts ureabuljong selektiv for Proteus-arter, og gir positive resultater innen 24 til 48 timer etter inkubering, og det er ikke effektivt for bakterier som produserer lave mengder urease eller som sakte hydrolyserer urea.

Dette er fordi Proteus-arter kan bruke urea som nitrogenkilde. I stedet trenger andre urease-produserende bakterier en ekstra kilde.

Pérez et al. (2002) slo fast at Stuarts ureabuljong var like effektiv som Christensens ureaagar for å bestemme urease i gjærstammer av slektene Candida, Cryptococcus, Rhodotorula, Trichosporon og Saccharomyces.

Studieforfatterne hevder å ha oppnådd 100% avtale med begge mediene (Stuart og Christensen) når de ruget i 24 og 48 timer; med unntak av at belastningene som klarte å gjøre media til en sterk rosa-fuchsia-farge ble tatt som positive.

Denne avklaringen er nødvendig, siden Lodder (1970) uttalte at nesten alle gjærene klarer å gjøre Christensen urea agar-faset til lyserosa. Dette skyldes det faktum at de kan hydrolysere urea i minimale mengder, og dannelse av aminer ved oksidativ dekarboksylering av aminosyrer på overflaten. Dette skal ikke tolkes som positivt.

Christensens urea agar eller buljong

Christensens ureabuljong eller agar er mindre bufret, og kan oppdage små mengder ammoniakk. Videre er dette mediet beriket med peptoner og glukose. Disse forbindelsene får andre ureaseproduserende mikroorganismer til å vokse som ikke vokser i Stuart-buljong.

På samme måte gir Christensen urea-test raskere resultater, spesielt for Proteus, som er i stand til å gi sterkt positive på bare 30 minutter som minimumstid og opptil 6 timer som en maksimal tid.

Resten av de urease-produserende mikroorganismer klarer å gjøre fargen på mediet litt etter 6 timer, og sterkt etter 24, 48, 72 timer eller mer, og til og med noen stammer kan gi svake reaksjoner etter 5 eller 6 dager.

Tolkning av begge mediene (Stuart og Christensen)

Mediumet er opprinnelig gul-oransje i fargen, og en positiv reaksjon vil gjøre fargen på mediet til rosa-fuchsia. Fargenes intensitet er direkte proporsjonal med mengden produsert ammoniakk.

En negativ reaksjon vil forlate mediet med den opprinnelige fargen, med unntak av gjær, som kan bli blekrosa på Christensens ureaagarmedium.

Forberedelse

Stuarts urea buljong

Vei de nødvendige gram i henhold til indikasjonene fra det kommersielle selskapet. Løs opp i helst sterilt destillert vann. Ikke bruk varme for å løse opp, da urea er følsom for varme.

Membranfiltrering brukes til å sterilisere. For dette brukes et Millipore-filter med porer med en diameter på 0,45 u. Ikke bruk en autoklav. Når løsningen er filtrert, blir den fordelt i sterile rør. For å oppnå pålitelige resultater, bør det overføres mellom 1,5 ml som en minimumsmengde og 3 ml som en maksimal mengde per rør.

Oppbevares i kjøleskap og varm før bruk.

Hvis filtreringsmetoden ikke er tilgjengelig, bør mediet brukes umiddelbart for å oppnå pålitelige resultater.

En annen måte å forberede Stuarts urea buljong er som følger:

Noen kommersielle hus selger basemediet for urea-testen, inkludert urea.

Mengden som er indikert av det kommersielle selskapet veies. Det oppløses i destillert vann og steriliseres i autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter. Det får hvile litt, og når mediet er varmt, tilsett 100 ml av en ureaoppløsning tilberedt ved 20% og sterilisert ved filtrering.

Det er distribuert i sterile rør, som tidligere beskrevet.

Christensens urea agar eller buljong

-Preparasjon av urealøsningen

Vei ut 29 g dehydrert urea og løst opp i 100 ml destillert vann. Bruk filtreringsmetoden for å sterilisere. Ikke autoklaver.

-Urea base agar

Løs opp 24 g av den dehydrerte basaragaren i 950 ml destillert vann. Steriliser i autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter. La den hvile til den når en temperatur på 50 ° C og tilsett det tidligere tilberedte urea aseptisk.

Hell 4-5 ml i sterile rør og vipp til de er faste. Det skal være et langt fløytebib.

Dette mediet kan også fremstilles i flytende form.

applikasjoner

Urea-testen er ekstremt effektiv for å skille slekten Proteus fra andre slekt i Family Enterobacteriaceae, gitt den raske reaksjonen gitt av Proteus.

Ved hjelp av Christensen-komposisjonen hjelper testen til å skille mellom arter av samme slekt. For eksempel er S. haemolyticus og S. warneri koagulase-negative og beta-hemolytiske Staphylococcus, men skiller seg ut ved at S. haemolyticus er urea-negativ og S. warneri er urea-positiv.

På den annen side brukte McNULT med hell Christensens 2% ureabuljong for å studere tilstedeværelsen av Helicobacter pylori i biopsiprøver tatt fra mageslimhinnen (antral region).

Tilstedeværelsen av H. pylori viser seg ved en positiv urea-test. Varigheten av tiden for å observere resultatene er direkte proporsjonal med mengden tilstedeværende mikroorganismer.

Som det er sett, er det en enkel metode for diagnose av Helicobacter pylori i gastriske biopsier.

Til slutt er denne testen også nyttig for å skille arter fra slektene Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus og Mycobacteria.

Såing av urea-testen

Begge metodene krever en sterk mikrobiell inokulat for å optimalisere resultatene. Bakteriekolonier tas fortrinnsvis fra blodagar og gjær fra Sabouraud agar, med noen få unntak. Inokulatet emulgeres i det flytende mediet.

For Stuarts ureabuljong, inkuber ved 37 ºC i 24 til 48 timer, og vet at du bare leter etter Proteus-stammer når stammen er en bakterie. For gjær kan den inkuberes ved 37 ° C eller ved romtemperatur i 24 til 48 timers inkubasjon.

Når det gjelder Christensens ureabuljong, inkuberes den ved 37 ºC i 24 timer. Hvis testen er negativ, kan den inkuberes i opptil 6 dager. Hvis testen er positiv før 6 timer, indikerer det at det er en belastning av slekten Proteus.

Når det gjelder Christensens ureaagar, agarfaset sterkt inokuleres, uten å punktere. Buljongen blir inkubert og tolket på samme måte.

QA

Kontrollstammer som Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 7006003, Escherichia coli ATCC 25922 og Salmonella typhimurium kan brukes til å teste mediet. De to første skal gi positive resultater og de to siste negative resultatene.

Kilde: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. utg. Redaksjonell Panamericana SA Argentina.

referanser

1. Pérez C, Goitía K., Mata S, Hartung C, Colella M, Reyes H. et al. Bruk av Stuarts ureabuljong til ureasetest, som test i diagnostisering av gjær. Pastor Ven. Microbiol. 2002; 22 (2): 136-140. Tilgjengelig på: Scielo.org.
2. Mac Faddin J. (2003). Biokjemiske tester for identifisering av bakterier av klinisk betydning. 3. utg. Redaksjonell Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 utg. Redaksjonell Panamericana SA Argentina.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. utg. Redaksjonell Panamericana SA Argentina.
5. Britannia Laboratories. Christensen Medium (Urea agar base) 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com