MEDIO MIO: FOUNDATION, KLARGJØRING OG BRUK - BIOLOGI - 2026

Den MIO medium er en biokjemisk test anvendes for å hjelpe til med identifisering av arter av bakterier som tilhører familien Enterobacteriaceae. Den er ganske næringsrik og består av glukose, gjærekstrakt, pepton, triptein, L-ornitinhydroklorid, bromokresol-lilla og agar.

Betydningen av forkortelsen (MIO) beskriver hver av parametrene som kan observeres i dette mediet; bevegelighet, indol og ornitin. Motilitet er mikroorganismens evne til å bevege seg på grunn av tilstedeværelsen av flagella. For at denne egenskapen skal overholdes, må konsistensen til mediet være halvfast, slik at preparatet inneholder mindre agar.

Oversikt over tolkning av resultater i MIO-mediet. Kilde: Utarbeidet av forfatteren MSc. Marielsa gil

Produksjonen av indol viser tilstedeværelsen av enzymet tryptofanase som virker på aminosyren tryptofan, og krever bruk av et avslørende reagens for å synliggjøre produksjonen av indol.

Til slutt bestemmer ornitin om bakterien er i stand til å dekarboksylere aminosyren, det vil si om den har enzymet orinithin dekarboksylase.

Basis

Pepton, gjærekstrakt og triptein

Disse elementene bidrar til ernæringskraften til dette mediet. De fungerer som en kilde til næringsstoffer og essensielle aminosyrer for bakterieutvikling.

I tillegg er triptein en kilde til tryptofan for å vise tilstedeværelsen av enzymet tryptofanase, som nedbryter tryptofan ved reduktiv deaminering, frigjør indol, pyruvinsyre, ammoniakk og energi.

Indol er fargeløs, derfor avsløres nærværet ved å tilsette fem dråper Ehrlichs eller Kovacs reagens, begge med p-dimetylaminobenzaldehyd.

Aldehydgruppen til denne forbindelsen reagerer med indol, og frembringer et fuchsia-rødt, ringformet produkt på overflaten av agaren.

Alle spor av farger bør betraktes som en positiv test. Beviset bør leses umiddelbart, ettersom fargen over tid forringes.

Videre bør denne testen avsløres etter at mobilitet og dekarboksyleringsresultater av ornitin er blitt notert.

Tolkning

Positiv test: dannelse av en fuchsia rød ring når du tilsetter dråper Kovacs reagens.

Negativ test: ingen ringformasjon.

motilitet

Evnen til bakteriene å bevege seg vil være tydelig hvis et overskyet medium blir observert, eller hvis det er en tykk vekstlinje som ekspanderer rundt den første inokulasjonen.

En negativ motilitetstest vil bli påvist ved å observere en tynn vekstlinje, og alt rundt det vil være uten vekst.

Det er viktig at bevegeligheten leses før indolen blir avslørt, ettersom tilsetningen av reagenset skyer hele mediet.

Hos mobile, men saktevoksende bakterier er det vanskelig å demonstrere deres bevegelighet med dette mediet. I dette tilfellet anbefales det å bruke andre tester eller metoder, for eksempel medium bevegelighet eller drop-pending-metoden.

glukose

Glukose er det gjærbare karbohydratet som i tillegg til å tilveiebringe energi, forsurer miljøet, en nødvendig betingelse for at dekarboksylering av aminosyren ornitin skal oppstå.

Fermentering av glukose må alltid skje, med utgangspunkt i prinsippet om at alle bakterier som tilhører Enterobacteriaceae-familien gjærer glukose.

L-Ornithine

I tilfelle bakteriene produserer enzymet ornitindekarboksylase, kan dette virke når mediet er blitt surgjort ved gjæring av glukose.

Enzymet ornitindekarboksylase virker på karboksylgruppen i aminosyren og produserer et amin kalt putresin som igjen alkaliserer omgivelsene.

Denne testen bør leses etter 24 timers inkubasjon, fordi hvis du prøver å lese før, kan du tolke testen med en falsk negativ.

Det må huskes at den første reaksjonen som oppstår er gjæringen av glukose, slik at mediet blir gult i en startfase (første 10 til 12 timer). Hvis ornitindekarboksylering deretter skjer, vil mediet bli lilla.

Det er viktig å tolke ornitindekarboksyleringstesten før du avslører indol, ettersom tilsetningen av Kovacs 'reagens endrer fargen på mediet.

Tolkning

Negativ test: medium med gul farge eller med gul bakgrunn.

Positiv test: middels helt lilla.

PH-indikator

I dette tilfellet brukes bromokresol-lilla; den som har ansvaret for å avsløre når det er en endring i pH i mediet. Ved surgjøring blir indikatoren gul, og ved alkalisering blir den lilla.

Såing og utvikling av teknikk

For å så MIO-mediet brukes en rett sløyfe eller nål, og med den samles en del av kolonien som skal studeres.

En dyp punktering er laget midt i MIO i en rett linje. Det er ikke tilrådelig å utføre dobbel punktering, siden det kan gi et falskt bilde av bevegelighet hvis punktering ikke blir utført på samme sted.

Inkuber i 24 til 48 timer ved 37 ° C ved aerobiose. Se på resultatene i denne rekkefølgen: bevegelighet, dekarboksylering av ornitinet og avslør til slutt indolen.

Det anbefales å fjerne 2 ml av mediet aseptisk, overføre det til et sterilt rør og utføre indol-testen der, så hvis det er negativt, kan resten av det originale røret inkuberes i ytterligere 24 timer for å avsløre indolen igjen.

Utviklingen av indolen utføres på følgende måte: 3 til 5 dråper Kovacs reagens tilsettes MIO-mediet og omrøres kraftig. Det observeres om det kommer en rød-fuchsia-ring eller ikke.

Forberedelse

MIO medium

Vei ut 31 g MIO-medium og oppløst i en liter destillert vann.

Varm opp til blandingen koker i ett minutt, rist ofte til agaren er helt oppløst. Fordel 4 ml av mediet i 13/100 prøverør med bomullshetter.

Steriliser i autoklav ved 121 ° C i 15 minutter. Fjern fra autoklaven og la stå rett i et stativ, på en slik måte at det dannes en halvfast blokk.

Oppbevares i kjøleskap 2-8 ° C. La det varme opp før du sår bakteriestammen.

Fargen på det dehydrerte mediet er beige og fargen på det tilberedte mediet svakt opaliserende lilla.

Den endelige pH for det tilberedte mediet er 6,5 ± 0,2

Mediet blir gult ved sur pH og er lilla ved alkalisk pH.

Kovacs Reagent (Indole Test Developer)

Dette reagenset fremstilles som følger:

150 ml amyl, isoamyl eller butylalkohol (hvilken som helst av de tre) måles. I den oppløses 10 g p-dimetylaminobenzaldehyd. Deretter tilsettes 50 ml konsentrert saltsyre sakte.

Reagenset som fremstilles er fargeløst eller lysegult. Den skal oppbevares i ravflaske og oppbevares i kjøleskap. En mørkebrun farge viser dens forringelse.

Kovacs-reagenset kan også erstatte Ehrlich-reagenset. Sistnevnte, som er mer følsom, foretrekkes å avsløre indol hos bakterier som produserer det i små mengder, for eksempel i noen ikke-gjærende gramnegative stenger og visse anaerober.

Bruk

Dette mediet er en test som kompletterer et batteri med biokjemiske tester for identifisering av bakterier som tilhører Enterobacteriaceae-familien.

Ornitin-dekarboksyleringsdataene tjener til å skille Shigella sonnei, som tester positive, fra Shigella boydii, Shigella flexneri og S. dysenterieae, som tester negative.

Den skiller også slekten Klebsiella, som tester negativ, fra slekten Enterobacter, der de fleste av artene tester positive.

Kilde: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. utg. Redaksjonell Panamericana SA Argentina.

QA

Hver gang det utarbeides en gruppe MIO-medium, kan en kontrolltest utføres. For dette brukes kjente eller sertifiserte stammer for å observere oppførselen til mediet.

Stammene som kan brukes er Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes og Proteus mirabilis.

De forventede resultatene er E. coli og M. morganii. Dan M: +, I: + og O: +.

Klebsiella pneumoniae er alle negative (M: -, jeg: -, O :-). Proteus mirabilis og Enterobacter aerogenes gir M: + I: - og O: +.

referanser

1. Mac Faddin J. (2003). Biokjemiske tester for identifisering av bakterier av klinisk betydning. 3. utg. Redaksjonell Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 utg. Redaksjonell Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. utg. Redaksjonell Panamericana SA Argentina.
4. Britannia Laboratories. MIO Medio 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
5. BD Laboratories. BBL Motility Indole Ornithine (MIO) Medium. 2007. Tilgjengelig på: bd.com
6. Valtek Laboratories. Medium MIO Motility, Indole, Ornithine. 2010. Tilgjengelig på: andinamedica.com