MIDDELS SIM: FUNDAMENTERING, KLARGJØRING OG BRUK - BIOLOGI - 2026

Den SIM medium er et halvfast materiale og differensial agar, spesielt utformet for å bidra til å identifisere noen bakterier, spesielt Enterobacteriaceae. Det er sammensatt av triptein, pepton, jernsulfat, ammoniumsulfat, natriumtiosulfat og agar.

Dette mediet tillater utførelse av tre viktige tester: produksjon av hydrogensulfid (H ₂ S), dannelse av indol og bevegelighet, derav forkortelsen SIM. På grunn av sin store nytte kan den ikke være fraværende i et bakteriologilaboratorium.

A. Kommersiell SIM-medium B. SIM H2S (-), Indole (-) og Motility (+) Test og SIM H2S (+), Indole (-), Motility (+) Test. Kilde: A. Foto tatt av forfatteren MSc. Marielsa Gil B. Mfloayza

I motsetning til andre medier, må det være halvfast for at bevegelseskapasiteten til noen bakterier skal kunne påvises. Slik sett fungerer denne testen veldig bra for Enterobacteriaceae, men ikke for ikke-fermenterende gramnegative stenger, der andre metoder er å foretrekke, for eksempel hengedrop.

SIM-mediet gjør det mulig å skille bestemte spesifikke egenskaper som kjennetegner noen bakterier i forhold til andre. For eksempel skilles Escherichia coli ved å være H ₂ S (-), Indole (+) og bevegelighet (+), mens Proteus mirabilis er H ₂ S (+), indole (-), motilitet (+).

Basis

Det er et kulturmedium som anses som forskjellig, fordi bruken skiller mellom mikroorganismer som er i stand til å produsere hydrogensulfid fra de som ikke gjør det; den fremhever også de som danner indol fra tryptofan fra de som ikke gjør det, og til slutt skiller motile bakterier fra ubevegelige.

Strømkilde

Som ethvert kulturmedium har det elementer som gir de nødvendige næringsstoffene slik at ikke-krevende mikroorganismer kan utvikle seg. Disse elementene er representert med peptoner og triptein.

Utviklingen av mikroorganismen i mediet er essensiell for å kunne observere tilstedeværelsen eller fraværet av egenskapene som dette mediet evaluerer.

Produksjon av hydrogensulfid

Bokstaven S i forkortelsen SIM refererer til produksjon av hydrogensulfid (H ₂ S). Bakterier som er i stand til å danne hydrogensulfid vil ta opp svovelen fra natriumtiosulfat.

Når H ₂ S -colourless gass- er dannet, reagerer det med jernsaltet er tilstede i mediet, danner jern-sulfid, klart synlig (svart bunnfall). Bakterier som ikke danner H ₂ S, etterlater mediet med den opprinnelige fargen (beige).

Tilstedeværelsen av det svarte bunnfallet kan hindre tolkningen av bevegelighet. Men de fleste H ₂ S- produserende Enterobacteriaceae er kjent for å være positivt motile, slik som Salmonella, Proteus, Citrobacter og. Videre antyder det svarte bunnfallet som dekker nesten hele mediet positiv bevegelighet.

Indolformasjon

Den andre bokstaven i forkortelsen SIM er "jeg", som representerer dannelsen av indol.

Sånn sett oppfyller Triptein, i tillegg til å være en kilde til næringsstoff, en annen grunnleggende funksjon. Denne peptonen er rik på en aminosyre som kalles tryptofan, derfor kan den vise bakterier som produserer tryptofanase.

Dette enzymet er ansvarlig for spaltning av aminosyren tryptofan, med den påfølgende dannelsen av indol (fargeløst stoff), pyruvinsyre og ammonium.

Derfor er det nødvendig å tilsette et avslørende stoff (Ehrlichs reagens eller Kovacs reagens) for å vise denne reaksjonen. Enten reagerer med indol, og danner et rødformet stoffformet stoff på overflaten av agaren. Hvis fuchsia-ringen vises, tolkes indoletesten som positiv.

Bakterier som ikke har dette enzymet vil ikke danne ringen, og det tolkes som en negativ indol-test.

Det er viktig å merke seg at indotesten bør være den siste som tolkes, siden når reagenset er tilsatt, blir mediet uklar, noe som gjør det vanskelig å visualisere bevegelighet.

motilitet

Endelig betyr bokstaven "M" for ordet SIM bevegelighet. For å evaluere bevegelighet er dette mediet strategisk halvfast, ettersom denne egenskapen er essensiell for å kunne observere om det er bakteriebevegelse eller ikke. Bakterier som har flagella er de som gir denne positive testen.

En positiv test vil være tydelig når uklarhet blir observert, både i det første inokulatet og rundt det. Mens ikke-motoriske bakterier bare utvikler seg i løpet av den første inokulum.

Forberedelse

Middels SIM

Vei 30 g av det dehydrerte mediet og oppløst i en liter destillert vann. Blandingen får stå i 5 minutter, og deretter oppvarmet til kokende under omrøring ofte til den er helt oppløst.

Fordel blandingen i prøverør med bomullshetter og autoklave ved 121 ° C i 15 minutter. Fjern rørstativet fra autoklaven og la det stivne i vertikal stilling, slik at mediet er i form av en blokk.

For bevaring oppbevares det i kjøleskapet til det brukes. Det tilberedte mediet må ha en slutt pH på 7,3 ± 0,2.

På tidspunktet for inokulering av mediet må det være i romtemperatur. Den midtre fargen er beige.

Kovacs reagens

Mål 150 ml amyl eller isoamyl eller butylalkohol. (Bruk en av de tre nevnte).

Løs opp 10 g p-dimetylaminobenzaldehyd. Tilsett deretter sakte 50 ml konsentrert saltsyre.

Reagenset som er klar til bruk er fargeløst eller lysegult. Den skal oppbevares i en ravflaske og oppbevares i kjøleskap. Ikke bruk hvis den blir mørkebrun; som indikerer at den er skadet. Dette reagenset er foretrukket når det gjelder Enterobacteriaceae.

Erlichs reagens

Vei ut 2 g p-dimetylaminobenzaldehyd og oppløs i 190 ml absolutt etylalkohol og bland sakte med 40 ml konsentrert saltsyre. Oppbevares på samme måte som Kovacs reagens. Ehrlichs reagens brukes mest til ikke-fermenterende og anaerobe bakterier.

applikasjoner

SIM-medium er høyt brukt i bakteriologilaboratorier. Fordelen er at tre essensielle egenskaper kan observeres i det samme røret ved identifisering av Enterobacteriaceae.

sådd

Den riktige måten å så dette mediet på er å bruke nålen, som en del av den rene kolonien som skal studeres tas med og settes loddrett inn i midten av mediet. En enkelt utfall bør utføres. Punkteringen skal ikke nå bunnen av røret, det riktige er å bare dekke to tredjedeler av dybden.

Gjenta inokulatet anbefales ikke, da dette kan føre til falske tolkninger av positiv bevegelighet. Det inokulerte mediet inkuberes aerobt ved 37 ° C i 24 timer.

Når tiden er avsluttet, blir det observert om det var produksjon av H ₂ S eller ikke, og bevegeligheten leses. Til slutt avsløres indolen, og tilsetter 3 til 4 dråper Ehrlich eller Kovacs reagens, bland forsiktig og tolker.

Kilde: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. utg. Redaksjonell Panamericana SA Argentina.

QA

Som en sterilitetskontroll inkuberes ett eller to rør uten inokulering i en ovn ved 37 ° C i 24 timer. Det forventes at det etter denne tiden ikke er noen vekst eller fargeendring.

Som kvalitetskontroll kan kjente sertifiserte stammer brukes, slik som: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

De forventede resultatene er: Escherichia coli H ₂ S negativ, indol og positiv bevegelighet, Enterobacter aerogenes bare positiv bevegelighet, Salmonella typhimurium H ₂ S og positiv bevegelighet, med negativ indol. Proteus vulgaris er alle positive, mens Klebsiella pneumoniae og Shigella alle er negative.

begrensninger

-Noen stammer av Morganella morganii, blant andre stammer, kan produsere et brunaktig pigment i dette mediet på grunn av produksjonen av melanin, dette bør ikke forveksles med bunnfallet av jernholdig sulfid. Hos uerfarne fagfolk kan denne situasjonen generere falske positiver i tolkningen av H ₂ S- testen .

-Strikke aerobe bakterier vil bare vokse på overflaten av røret, noe som gjør det vanskelig å tolke bevegelighet.

referanser

1. BD Laboratories. BBL SIM Medium. 2008. Tilgjengelig på: bd.com
2. Neogen Laboratories. SIM Medium. Tilgjengelig på: foodafety
3. Difco Francisco Soria Melguizo. SIM Medium. 2009. Tilgjengelig på: http://f-soria.es
4. Brizuela-Lab Laboratory. Middels SIM. Tilgjengelig på: .brizuela-lab.com
5. Britannia Laboratories. Middels SIM. 2015. Tilgjengelig på: studyres.es/doc
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. utg. Redaksjonell Panamericana SA Argentina.