FORBEREDELSE AV KULTURMEDIER: MÅL OG TRINN - BIOLOGI - 2026

Den Fremstillingen av kulturmedia er en rutinemessig metodikk som brukes i laboratorier for vekst av de ønskede mikroorganismer. Kulturmedier er faste, flytende eller halvfaste preparater som har alle nødvendige næringsstoffer for utvikling av en mikrobiell populasjon.

Generelt er virkemidlene for dyrking av mikroorganismer rike på proteiner og aminosyrer og inneholder vanligvis en komponent som favoriserer veksten av organismen som skal studeres, så som vitaminer, blod, serum, blant andre.

Kilde: pixabay.com

Det er ikke noe generelt eller universelt kulturmedium, siden sammensetningen varierer avhengig av behovene til mikroorganismen av interesse. Noen bakterier kan vokse i et hvilket som helst kulturmedium, men andre har spesielle krav.

Hva består den av?

Mikroorganismer, som sopp og bakterier, kan ikke studeres individuelt på grunn av deres ørsmå størrelse. Av denne grunn må de dyrkes med kunstige midler som tillater en betydelig økning i befolkningen.

For eksempel, hvis vi ønsker å studere bakterier, må vi gi dem de rette forholdene slik at de kan spre seg og danne en koloni (som kan observeres med det blotte øye).

Forberedelsen av kulturmediene varierer mye avhengig av typen mikroorganisme som skal dyrkes. Før du forbereder den, er det nødvendig å kjenne de grunnleggende ernæringsbehovene til arbeidsorganismen.

De vanligste komponentene som brukes i kulturmedier vil bli beskrevet nedenfor for å få en generell ide om deres forberedelse:

agar

Det brukes i kulturer som et geleringsmiddel og tilsettes når du leter etter et fast eller halvfast medium. Det første størkningsmiddelet som ble brukt ved fremstilling av medier var gelatin, men i 1883 ble agar introdusert til bakteriologiens verden av W. Hesse.

Bakteriologisk agar har som hovedkomponent et polysakkarid med komplekse grener utvunnet fra alger. Denne forbindelsen brukes som fortykningsmiddel i vanlige matvarer som is og syltetøy.

Det er et veldig verdifullt element i mikrobiologi av flere grunner. Hovedsakelig fordi mikroorganismer ikke kan forringe den, kondenserer den ved en temperatur på 100 ° C og forblir i flytende tilstand til den når 45 ° C eller mindre.

I tilfelle du ønsker å tilberede et fast medium, bør agarkonsentrasjonen være rundt 1,5%, mens semisolidene bør tilberedes fra 0,3 til 0,5%.

væsker

Dyrking av sykdomsfremkallende organismer trenger kroppsvæsker slik at de kan utvikle seg som de ville gjort i sitt naturlige miljø. Av denne grunn tilsettes hele eller defibrillert blod. Væsken tas fra et sunt dyr, og når den er sterilisert, blir den tilsatt til kulturmediet.

utdrag

De er oppnådd fra forskjellige dyredeler (for eksempel kjøtt eller lever) eller grønnsaker (frø) og behandles for å oppnå et fast konsentrat i form av en pasta eller pulver. De vanligste er gjær, malt og kjøtt.

peptones

Disse organiske forbindelsene oppnås ved enzymatisk eller kjemisk hydrolyse av dyre- eller plantevev. Hensikten er å tilsette innhold rik på aminosyrer, som er de grunnleggende enhetene til proteiner.

Støtdempere

"Bufferne" eller buffersystemene unngår plutselige endringer i pH og bidrar til å opprettholde det optimale området som kroppen tåler.

De fleste organismer kan trives godt ved en pH på 7, selv om noen bakterier foretrekker alkaliske medier. Imidlertid er det bakterier som motstår pH-variasjoner mellom verdiene på 6 og 9.

Hos pH-følsomme arter produseres ikke skaden av den store mengden hydrogen eller hydroksylioner, men av økningen av svake syrer eller baser som kan komme inn i cellen.

På samme måte tilsettes pH-indikatorer for å overvåke det og unngå avvik forårsaket av gjæring eller andre prosesser.

mål

Hovedmålet når du forbereder et kulturmedium er å tilsette alle nødvendige komponenter for å la den vellykkede utviklingen av organismen isoleres. Den mest effektive kombinasjonen av komponenter og næringsstoffer for å oppnå ønsket medium må identifiseres.

Både fremstilling og lagring av mediet er avgjørende for å sikre vellykket vekst, ettersom sammensetningen av mediet og tilgjengeligheten av næringsstoffer er avhengig av disse trinnene.

Det må tas med i betraktningen at dyrking av mikroorganismer er en oppgave som påvirkes av flere faktorer utenfor kulturmediet, slik som intensiteten på mottatt lys, temperatur og surhetsnivå eller alkalitet i mediet. Derfor må hver av disse variablene tas med i betraktningen.

Medietyper

Basert på sammensetningen

Basert på deres sammensetning er det tre hovedtyper avlinger: naturlige eller empiriske, halvsyntetiske og definerte syntetiske eller kjemiske medier.

Naturlige omgivelser

I naturlige omgivelser er den eksakte sammensetningen ukjent. Disse inkluderer ingredienser som melk, utvannet blod, grønnsaksjuice, ekstrakter og infusjoner av kjøtt og peptoner. Av økonomiske årsaker tilsettes ofte billige komponenter som soyaekstrakt, myse, melasse, etc.

Semisyntetiske medier

Det kalles et semisyntetisk medium hvis sammensetningen er delvis kjent. Ethvert medium som inneholder agar blir et halvsyntetisk medium.

Blant dem har vi potetdekstroseagar, czapek-doxagar, havregar, kjøttpeptonagar, blant andre eksempler.

Syntetisk eller kjemisk definert medium

I dette tilfellet er sammensetningen av mediet - når det gjelder mengden kilder til karbon, nitrogen, svovel, fosfor og andre nødvendige vekstfaktorer - kjent. Det er veldig nyttig hvis du vil oppnå reproduserbare resultater for andre forskere.

For de såkalte "mikroorganismer med spesielle vekstkrav" er det nødvendig å tilsette nødvendige komponenter. Et eksempel på denne typen er Lactobacillus.

Basert på typen mikroorganisme

Tilsvarende er det en annen klassifisering for kulturmedier basert på typen mikroorganisme som kan vokse på den. Etter dette prinsippet har vi følgende generelle, berikende, selektive og differensielle midler. Hver og en er beskrevet nedenfor:

Generelle medier

Disse støtter utviklingen av et bredt utvalg av mikroorganismer. Hvis noen organisme trenger spesielle betingelser for vekst, vil den ikke kunne utvikle seg vellykket i denne typen kultur.

Berikelsesmedier

Anrikningsmediet støtter veksten av en viss type mikroorganisme, men det er ikke tilsatt noe stoff for å forhindre at andre typer mikrober vokser i den.

Selektive medier

De ser etter den spesifikke veksten av en mikroorganisme, kaller det sopp, bakterier, protozoer, blant andre. For å gjøre dette hemmer de andres utvikling.

For å oppnå dette målet kan det tilsettes kjemiske forbindelser som er dødelige for en bred gruppe av mikroorganismer og ufarlige for organismen av interesse, eller energikilder som bare kan assimileres av målmikroben kan tilsettes.

Selektive medier brukes når man tar medisinske prøver for å dyrke en sykdomsfremkallende mikroorganisme. Her er det nødvendig å fremme veksten av patogenet og hemme utviklingen av den normale mikrobielle floraen fra pasienten.

Vismutsulfitt-agar tillater for eksempel ikke vekst av gram-positive bakterier og et stort antall bakterier som finnes i mage-tarmhulen. Av denne grunn brukes den til å dyrke de gramnegative bakteriene som forårsaker tyfoidfeber, Salmonella typhi i fekale prøver.

Differensialmedier

Denne typen bruker noen diagnostiske kjennetegn for organismen av interesse (særegenheter i metabolismen, for eksempel) for å kunne identifisere dem mot en annen art som vokser i samme miljø.

Både differensialmedier og selektive medier er veldig nyttige innen klinisk mikrobiologi og folkehelse, siden disse fagområdene trenger å oppdage tilstedeværelsen av spesifikke mikroorganismer relatert til patologier eller dårlige hygieniske forhold.

Indikatorstoffer kan tilsettes kulturen som gir en særegen egenskap til den søkte kolonien. For eksempel blir laktose og en pH-indikator tilsatt agar-eosin-metylenblått (forkortet EMB) og MacConkey-agar.

Når en koloni utvikler seg i disse mediene med evnen til å gjære laktose og produsere aldehyder, kan de observeres i en spesiell farge.

Steps

For tiden kan kulturmedier kjøpes i lyofilisert form. Derfor er preparatet enklere, og det eneste som gjenstår å gjøre er å hydratere produktet. Innholdet må veies (under hensyntagen til den endelige mengden som skal tilberedes) og løses i destillert vann etter alle indikasjoner på produktet.

Innholdet i det flytende mediet må deles i de ønskede beholderne (petriskåler, rør osv.) For etterfølgende sterilisering. For å fordele det faste mediet er det nødvendig å smelte det ved hjelp av en mikrobølgeovn eller utsette materialet for et vannbad. PH i mediet må justeres.

Vanligvis brukes agaren i prøverør eller petriskåler. Hvis agaren stivner i en skrå stilling, med den rette vinkelen slik at den endelige endekanten er diagonal, er dette arrangementet kjent som nebb eller skrå rør. Når agaren stivner i en helt vertikal stilling, kalles den "dyp".

Etter sterilisering av mediet - ved hjelp av en autoklav - får de avkjøle seg. Disse må håndteres i et miljø fritt for mikroorganismer, det vanligste er å jobbe med en tent lighter som sikrer et aseptisk miljø i deres nærhet.

referanser

1. Celis, JE (2006). Cellebiologi: en laboratoriehåndbok (bind 2). Elsevier.
2. Finegold, SM, Bailey, WR, Baron, EJ, Fineglod, SM, & Scott, EG (1991). Bailey Scott: mikrobiologisk diagnose. Panamerikansk medisinsk.
3. Olivas, E. (2004). Manual of Practices of Microbiology I and II and Parasitology. Det autonome universitetet i Ciudad Juarez.
4. Schlegel, HG, & Zaborosch, C. (1993). Generell mikrobiologi. Cambridge University Press.
5. Tortora, GJ, Funke, BR, & Case, CL (2007). Introduksjon til mikrobiologi. Panamerican Medical Ed.