NEUBAUER KAMMER: HISTORIE, EGENSKAPER, BRUKSOMRÅDER - BIOLOGI - 2026

Den Neubauer kammer , hematometer eller hemocytometer, er en laboratorieinstrument bestående av en spesiell tykk glassplate. Dette kameraet brukes til å telle noen celletyper som røde blodlegemer, hvite blodlegemer og blodplater, selv om det kan brukes til å telle sporer, sædceller, parasitter, etc.

Den har noen veldig særegne egenskaper, ettersom den består av 3 soner, en sentral for telling og to støttesoner. Hvert kammer har to tellesoner eller tverrstoler, ett øverst og ett nederst.

Neubauer kammer. Kilde: SantiBadia. Redigert bilde.

Disse har flere divisjoner i en rutenettform. Telleområdene er de middels firkanter som finnes i de 4 hjørnene av begge rister, pluss den sentrale firkanten.

Montering av kameraet må gjøres med stor forsiktighet, da enhver detalj påvirker celletallet. Det er mange feil som kan gjøres, men hvis noen av dem oppstår, må kameraet demonteres, rengjøres og settes sammen igjen. De viktigste feilene inkluderer følgende:

Overløp kammeret eller underfylling, la kammeret tørke, prøver å fjerne overflødig væske med gasbind, vippe kammeret når du transporterer det, fyller et skittent eller vått kammer, blander ikke fortynningen eller prøven godt. Alle disse feilene vil resultere i en uvirkelig verdi.

Historie

Neubauer-kammeret er et presisjonsinstrument, og produksjonsprosessen gjennomgår streng kvalitetskontroll. Den ble opprettet for nøyaktig telling av partikler eller dannede elementer per mm ³ , for eksempel celler i forskjellige væsker. Den delikate grafikken er skåret med en diamantblyant.

Neubauer kammeregenskaper

Hele kammeret er på størrelse med et vanlig lysbilde slik at det kan plasseres på mikroskopet.

Kammeret består av tre sentrale rektangulære flater (a, b, c). I sone “b” er R-sonen eller tellesonen, også kalt retikulum. En på hver side av kameraet, atskilt med sone "d".

Grafisk diagram av Neubauer Chamber. Kilde: Praktisk guide til hematologi. School of Bioanalysis ved University of Carabobo, Venezuela.

Hver graticule er et polert område som inneholder telleområdet inngravert. Den består av et kvadrat med et overflateareal på 9 mm ² og er innvendig delt inn i 9 firkanter med et overflateareal på 1 mm ² hver. De fire hjørnetidene er delt inn i 16 mindre firkanter (0,0625 mm ² i areal).

Disse rutenettene er dannet av en serie millimeterlinjer som krysser hverandre, og utgjør perfekt graferte rutenett avgrenset til målingene som er spesifisert. Disse linjene er gravert med en diamantspiss.

Forbedret Neubauer-pensum. Kilde: Praktisk guide for hematologi ved School of Bioanalysis ved University of Carabobo, Venezuela.

De fire sidene tilsvarer telleområdet. Det er på disse sidene eller hjørnene at flertallet av cellene (røde blodlegemer og leukocytter) telles, mens blodplater telles i det sentrale området.

Den sentrale sonen har flere inndelinger, den består av en 1 mm ² kvadrat fordelt på 25 firkanter som har et overflateareal på 0,04 mm ² hver. Disse igjen er delt inn i 16 rutenett med et areal på 0,0025 mm ² .

Beskrivelse av forbedret Neubauer-retningsplan. a) Hjørnet torg, b) sentralt torg, c) median torg for det sentrale torg. Kilde: Praktisk guide for hematologi ved School of Bioanalysis ved University of Carabobo, Venezuela.

Sone “a” og “c” fungerer som støtte for å plassere et spesielt dekkeobjekt kalt et hematometrisk lysbilde eller hematimeterdeksel.

Høyden mellom folien og telleflaten er 0,1 mm. Målinger av overflatearealet til tallyboksene, samt høyden på kammeret og fortynning av prøven, er data som er nødvendige for å gjøre de endelige beregningene.

applikasjoner

Den brukes til celletelling. Det er spesielt nyttig på hematologiområdet, siden det gjør det mulig å telle de 3 blodcelleseriene; dvs. røde blodlegemer, hvite blodlegemer og blodplater.

Imidlertid kan den brukes i andre områder, for eksempel til å telle sæd, sporer, bakterier eller andre gjenstander av betydning avhengig av prøvetype.

Hvordan å bruke?

Prøveforberedelse

For å utføre celletallet startes det vanligvis fra en tidligere fortynning. Eksempel: for å telle hvite blodlegemer, forbered en fortynning på 1:20 med Turk's væske. Fortynningen blandes godt før du legger i pipetten og monterer Neubauer-kammeret.

Det er tider hvor en fortynning på 1:20 ikke er nok til å telle. For eksempel hos pasienter som lider av visse typer kroniske leukemier. I disse tilfellene bør det gjøres høyere fortynninger som 1: 100.

Hvis tellingen derimot er veldig lav, som ved alvorlige leukopenier, kan det gjøres mindre fortynninger for å konsentrere prøven. Eksempel: du kan gjøre en fortynning på 1:10.

Endringene som gjøres påvirker beregningene.

Neubauer kammermontering

Neubauer-kammeret er satt sammen ved å plassere det hematometriske lysbildet i det sentrale området. Begge må være veldig rent og tørt. For å plassere lamellen tas den i kantene og slippes forsiktig ned på kameraet.

Dette fylles ved å plassere tuppen av en Thoma automatisk pipette eller pipette i en vinkel på 35 ° i kanten av lastesonen. Væsken ledes ut jevnt og lasteområdet fylles av kapillaritet. Dette gjøres fra begge sider for å laste de to korsstolene.

Reticles bør ikke være overbelastet, og de skal heller ikke nektes væske. Belastningen må være nøyaktig. Det er viktig at fyllingen gjøres homogent, det vil si at det ikke skal være noen bobler.

Når kammeret er satt sammen, får det hvile i 2 minutter slik at cellene faller til bunnen og visualiseringen og tellingen av dem blir lettere.

Etter hviletiden er det montert på scenen til lysmikroskopet for observasjon. Først er det fokusert med et 10X mål og om nødvendig så går det til 40X.

For å forbedre visualiseringen reduseres lysgjennomgangen fra mikroskopet. For å gjøre dette senkes kondensatoren og membranen er litt lukket.

Counting

For telling av hvite blodlegemer eller leukocytter må hele overflaten av de fire median hjørne firkanter og den sentrale firkanten av hvert retikulum telles.

Tellingen starter på torget i øvre venstre hjørne. Du starter fra den første firkanten av den første raden, det vil si fra venstre mot høyre til du kommer til motsatt ende.

Der går du ned og ser tilbake fra høyre til venstre til du kommer til den andre enden, og så videre, cellene i hvert rutenett telles på en sikksakk-måte. De 16 rutenettene for hver median firkant teller.

For å unngå å telle en celle to ganger, er det regler om cellene som er plassert på grenselinjene til hvert rutenett. Celler på venstre og øverste linje telles, og celler på høyre og bunnlinje blir ignorert.

En manuell celleteller må være tilgjengelig slik at operatøren trykker på enhetstasten så mange ganger som det er observert celler. Med bruk av telleren kan operatøren telle uten å måtte slå opp fra det mikroskopiske feltet. På slutten av tellingen vil du se det totale antallet celler som er telt.

beregninger

For beregningene kan du fortsette på flere måter. En enkelt graticule kan telles eller begge kan telles og begge er gjennomsnitt. I disse to situasjonene må de tellede celler multipliseres med en faktor, som i dette tilfellet vil være 40. Og dermed ^oppnås det totale antallet per mm ³ .

Men hvis de to rutenettet telles og gjennomsnittet ikke tas, må det multipliseres med en annen faktor, i dette tilfellet med 20.

-Multiplikasjonsfaktor

Slik beregnes multiplikasjonsfaktoren.

Ulike data blir tatt i betraktning for beregningene, inkludert fortynningstiter, høyden på kammeret og det tellede området.

fortynning

Standard fortynning som er brukt er 1:20 for leukocyttantellingen.

Kammerhøyde

Høyden mellom kammeret og blodcellearket er 0,1 mm.

Opptalt område

Hvis 5 kvadrater med 1 mm ^2- område telles , betyr det at det totale telleområdet er 5mm ² . Disse dataene må multipliseres med høyden på kammeret for å oppnå det totale antall volum. Det vil si 5 mm ² x 0,1 mm = 0,5 mm ³ .

Formler og beregninger

Med dataene vi har sies det:

Hvis det er 0,5 mm ³ - er det --- antall celler

I 1 mm ³ --- vil det være - X n ° av celler

X antall celler = (antall celler talt x 1) / 0,5 mm ³

Men fortynning må også tas med i betraktningen. Derfor er formelen som følger:

(antall celler talt x 1) x 20 / 0,5 mm ³

Til slutt, for å oppsummere, kan antall tellede celler multipliseres med 40. Dermed ^oppnås verdien av leukocytter per mm3 .

Hvis de to retiklene telles, endres dataene for det tellede området, som i dette tilfellet vil være 10 kvadrater, det vil si 10 mm ² . Og et totalt antall volum på 1 mm3. Formelen vil være:

(antall celler talt x 1) x 20/1 mm ³

Derfor ville multiplikasjonsfaktoren i dette tilfellet være 20.

feil

-Hvis du legger i kameraet blir det overskredet eller overskredet med væske, vil høyden på kameraet variere. Dette resulterer i at tellingen er høyere enn den virkelige tingen. Hvis du prøver å fjerne overflødig med gasbind eller bomull, er dette en enorm feil. Denne handlingen vil føre til at cellene konsentrerer seg, og øker tellingen.

-Hvis det er lastet dårlig, vil tellingen være lavere enn den ekte.

-Hvis kameraet er montert og får tørke, er det ikke lenger mulig å telle fordi det vil gi gale resultater.

-Hvis fortynningen av prøven ikke blandes godt før kammeret legges inn, er det fare for en feil i avlesningen, da cellene ikke blir homogent fordelt. Derfor vil det være en lavere eller høyere konsentrasjon av celler, avhengig av om prøven er tatt fra overflaten av væsken eller bunnen av røret.

-Tilstedeværelsen av bobler reduserer væskemengden som må inn i retikulumet, og forstyrrer riktig visualisering og distribusjon av cellene. Alt dette påvirker resultatene betydelig.

-Under telling, må du ikke slå opp fra mikroskopet før hver store firkant er fullført for å unngå å gå seg vill.

-En grunn til feil er å vippe kameraet etter montering. Av denne grunn må trinnet i mikroskopet løftes nøye.

Anbefaling

Hvis du av en eller annen grunn oppdager en unormalitet i fyllingen av kammeret, anbefales det at du demonterer preparatet, rengjør kammeret og monterer fra bunnen av igjen.

Vær forsiktig når du rengjør kameraet for å unngå å klø i tverrhårene. Vær derimot oppmerksom på at det hematometriske lysbildet er delikat og skjørt. Feil håndtering kan ødelegge det.

Før du begynner å telle, må du sørge for at cellene er godt fordelt. En ujevn fordeling av celler oppstår fra dårlig prøveblanding eller fortynning. Hvis dette skjer, må monteringen gjentas.

En måte å vite om cellene er godt fordelt er ved å sammenligne antallet av hvert stort kvadrat, antallet celler som telles for hvert kvadrat, skal ikke overdrives forskjellig fra det ene til det andre.

-Hvis det antall hvite blodlegemer er over 50 000 mm ^3, anbefales det å gjenta tellingen og gjøre en større fortynning.

-Hvis du endrer fortynningen, må du beregne multiplikasjonsfaktoren på nytt, da dette påvirker formelen.

referanser

1. Cardona-Maya W, Berdugo J, Cadavid A. Sammenligning av sædkonsentrasjonen ved bruk av Maklers kammer og Neubauer-kammeret. Actas Urol Esp 2008; 32 (4): 443-445. Tilgjengelig i: scielo.
2. Neubauer kammer. (2018, 27. mars). Wikipedia, The Free Encyclopedia. Høringsdato: 04:10 23. juni 2019 fra es.wikipedia.org
3. Meneses A, Rojas L, Sifontes S. Anvendelse av en alternativ tellemetode i Neubauer Chamber for å bestemme konsentrasjonen av Trichomonas vaginalis. Rev Cub Med Trop 2001; 53 (3): 180-8. Tilgjengelig på: researchgate.net
4. Gómez-Pérez Roald E. Analyse av spermogrammet. Pastor Venez. Endocrinol. Metab. 2007; 5 (2): 19-20. Tilgjengelig i: ve.scielo
5. Hematologi praktisk guide til School of Bioanalysis ved University of Carabobo. Venezuela 1998