EC BULJONG: GRUNNMUR, KLARGJØRING OG BRUK - BIOLOGI - 2026

Den EC-buljong eller buljong Escherichia coli er en selektivt flytende kulturmedium. Dette mediet anbefales av standardmetodene for å telle totale og fekale koliforme former, med den mest sannsynlige tallteknikk (MPN) i vann og matprøver, hvor hovedmidlet som er involvert er Escherichia coli.

EC buljong består av triptein, laktose, gallesalter, dipotassium fosfat, monopotassium fosfat, natriumklorid og vann. Formelen er strategisk designet for å favorisere veksten av totale og fekale koliformer og forhindre utvikling av andre medfølgende mikroorganismer.

Figurativ fremstilling av preparatet av EF-buljongen. Kilde: Pixabay.com

Escherichia coli-bakterien er den viktigste fekale koliformen som er til stede i en forurensning i vann og matkilder, og er årsaken til viktige gastrointestinale lidelser.

Det skal bemerkes at det er mange serotyper av Escherchia coli; Blant dem kan vi nevne enterohemorrhagic (EHEC), enteroinvasive (EIEC), enteopathogenic (EPEC), enterotoxigenic (ETEC) og enteroaggregative (EAEC).

Dette mediet har muligheten til å tillate utvikling av dem alle, men uten å kunne skille dem fra hverandre. Dette krever ytterligere testing.

Den mikrobiologiske studien av vann og mat etter det mest sannsynlige antall (MPN) for å søke etter totale og fekale koliformer er en protokoll som består av flere faser; presumptiv fase, bekreftende fase og kompletteringsfase. EC-buljongen brukes i den bekreftende fasen.

Basis

EC buljong

EC-mediet er basert på å tilveiebringe næringselementene som er nødvendige for optimal utvikling av totale og fekale koliformer, der Escherichia coli-bakteriene er inkludert.

Disse ernæringselementene er levert av triptein, og er en utmerket kilde til peptider og aminosyrer. I tillegg inneholder den også laktose, et gjærbart karbohydrat som gir energi og gjør det mulig å vise om bakteriene produserer gass.

På den annen side inneholder mediet gallesalter som gir den selektive karakter, siden det hemmer veksten av Gram-positive mikroorganismer som kan være til stede i prøven.

På samme måte fungerer dipotassium-fosfat og monopotassium-fosfat som et pH-balanseringssystem. Dette systemet er nødvendig fordi laktosen i buljongen har en tendens til å forsure mediet når det fermenteres av mikroorganismer, men dette blir kompensert av fosfatsaltene.

Derfor er disse elementene essensielle, siden ukontrollert surhet kan påvirke riktig utvikling av de ønskede mikroorganismer.

For sin del stabiliserer natriumklorid mediet osmotisk, mens vann er løsningsmidlet for de tilstedeværende oppløste stoffer og gir væskekonsistensen til mediet.

Novobiocin-modifisert EC-buljong

Okrend og Rose skapte en rekke EF-buljonger, kalt novobiocin-modifisert EC-buljong. Modifikasjonen besto i å redusere konsentrasjonen av gallesalter og tilsette 20 mg / dl novobiocin.

Denne modifikasjonen favoriserer utvinning av enterohemorrhagic Escherichia coli-stammer (O157: H7).

Denne bakterielle serotypen forårsaker alvorlig hemorragisk kolitt som kan føre til hemolytisk uremisk syndrom (HUS); som igjen kan generere akutt nyresvikt, med en høy dødelighet som kan komme opp til 50% hos eldre.

På grunn av den årlige sykeligheten og dødeligheten forårsaket av denne bakterien på grunn av inntak av forurenset mat, anbefaler USAs landbruksdepartement (USA) sterkt bruk av dette mediet.

Forberedelse

EC buljong

Vei 37,4 g av det dehydrerte mediet og oppløst i 1 liter destillert vann. Blandingen skal få stå i 5 minutter. Deretter, i en varmekilde, blir den ferdig oppløst ved å røre ofte.

Når den er oppløst, blir den distribuert til ferdigkondisjonerte prøverør med et Durham-rør inni. Steriliser i autoklav ved 121 ° C i 15 minutter.

PH i mediet bør være 6,9 ​​± 0,2. Fargen på det dehydrerte mediet er beige og det tilberedte mediet er lys rav.

Buljongen holdes i kjøleskapet til bruk. Ved bruk må buljongen være i romtemperatur.

På den annen side kan EF-buljongen også tilberedes med dobbel konsentrasjon.

Novobiocin-modifisert EC-buljong

Vei 36,7 g dehydrert medium og oppløs i 1 liter vann. Resten av preparatet er det samme som beskrevet ovenfor.

Bruk

Total og fekal coliform analyse

EC-buljong er ideell for den bekreftende fasen av studien av coliforms ved NMP-metoden, både i vannprøver, så vel som i farmasøytiske produkter og mat.

Grumsete, gassproduserende laktosebuljong oppnådd i den antatte fasen bør føres inn i 2% lysegrønne buljonger og EC-buljong.

For totale koliforme inkuberes buljongterninger aerobt i 24 til 48 timer ved 37 ° C, og for fekale koliformer inkuberes de aerobt i 24 til 48 timer ved 44 ° C.

I begge tilfeller tolkes det slik: grumsete rør med gassproduksjon anses som positive. Hvis det ikke er gassproduksjon på 24 timer, fortsetter inkubasjonen i opptil 48 timer.

EC-positive buljonger går til full bekreftende fase, som består av resedning på selektive medier som Mac Conkey-agar, EMB-agar eller Endo-agar.

Hvis buljongen som er brukt er novobiocinmodifisert EC, anbefales positive rør å flyttes på Mac Conkey-agar med sorbitol.

QA

Hvert parti med forberedt medium må være kvalitetskontrollert. Først må steriliteten til mediet evalueres. I denne forstand inkuberes en eller to buljonger uten inokulering i aerobiose i 24 timer ved 37 ° C. Det forventede resultatet er en gjennomsiktig buljong, uten turbiditet eller fargeendring.

For det andre må veksten av kjente stammer evalueres, for dette kan følgende bakterier brukes: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

I alle tilfeller forventes det en tilfredsstillende mikrobiell utvikling ved å observere en overskyet buljong med gassproduksjon for E. coli og ingen gass for Salmonella.

Andre stammer som kan inkluderes i kontrollen er: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Disse stammene må inhiberes totalt.

anbefalinger

-Plasseringen av Durham-rørene er avgjørende for studiet av coliforms.

-Distribuer mediet i prøverørene før sterilisering, aldri etter.

-Bruk ikke hvis mediet er mer enn 3 måneder gammelt.

-Bruk ikke hvis noen endring i de vanlige egenskapene til mediet er observert.

referanser

1. Britannia Laboratories. EC Medium. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
2. Enterohemorrhagic E. coli. Senter for matsikkerhet og folkehelse. 2010. Tilgjengelig på: cfsph.iastate.edu
3. Neogen Corporation. EC medium. Tilgjengelig på: foodsafety.neogen.com
4. Neogen. Novobiocin modifisert EC medium. Tilgjengelig på: foodsafety.neogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, de Castillo M. Påvisning, isolering og karakterisering av Escherichia coli som produserer Shiga-toksin fra ferskt malt kjøtt fra slaktere i Concepción, provins fra Tucumán. Microbiol Rev Arg; 2010, 42 (4): 284-287. Tilgjengelig på: www.scielo.org.