LAKTOSERT BULJONG: FUNDAMENTERING, KLARGJØRING OG BRUK - BIOLOGI - 2026

Den laktose buljong er et middel av ikke - selektivt flytende dyrkningsmedium som anvendes først og fremst som et pre-anrikning i isolering av Salmonella-stammer fra mikrobiologisk analyse med bearbeidet mat, meieriprodukter eller vann. Dette anbefales av Den internasjonale kommisjonen for mikrobiologiske spesifikasjoner for matvarer (ICMPF).

Mediet inneholder enzymatisk fordøyelse av gelatin, kjøttekstrakt og laktose, stoffer som er nødvendige for bakterievekst. Videre er laktose et gjærbart karbohydrat, derfor er noen koliforme i stand til å bryte det ned ved produksjon av gass.

Ammede buljonger med uklarhet. Kilde: Foto tatt av forfatteren MSc. Marielsa gil

Av denne grunn er laktosebuljong anbefalt av American Public Health Association (APHA) for den antatte studien av totale og fekale koliforme bakterier, og kvalifiserer den som et utmerket alternativ til å erstatte tryptose laurylsulfatbuljong i standardteknikken til mest sannsynlige nummer (MPN). ), brukt til mikrobiologisk analyse av mat, melk og overflatevann, underjordiske, rekreasjons-, husholdnings- og industrielle avfallsprøver.

Basis

For den mikrobiologiske analysen av noen prøver er pre-anrikingstrinnet viktig for å kunne gjenvinne en spesifikk mikroorganisme som kan være i veldig liten mengde eller under ugunstige forhold som bryter eller minimerer dens levedyktighet.

Slik er tilfellet med tørket og bearbeidet mat, muligens forurenset med Salmonellas sp. I disse tilfellene, hvis bakteriene er til stede, har de lidd fysisk og kjemisk misbruk under produktproduksjonsprosessen.

På en slik måte at mikroorganismer blir utsatt for uheldige faktorer som dehydrering, eksponering for hemmende eller giftige produkter, og overlappingen generert av tilstedeværelse av andre bakterier i større mengde, blant andre.

I denne forstand har laktosebuljong en reparerende effekt på de skadede strukturene i mikroorganismen, og får den til å gjenopprette og reprodusere seg, på en slik måte at den kan oppdages.

Likeledes har laktosebuljongen evnen til å fortynne de inhiberende stoffene som kan påvirke dens levedyktighet, og tillater dens utvikling. I tillegg er ernæringssammensetningen til laktosebuljongen strategisk for å favorisere veksten av Salmonella sp over andre mikroorganismer.

For endelig identifisering må den subkultureres til andre definitive kulturmedier.

På den annen side gjør sammensetningen av mediet det også mulig å oppdage laktosegjærende mikroorganismer som produserer gass.

Forberedelse

For å fremstille en liter laktosebuljong, må 13 gram av det dehydrerte mediet veies og oppløses i 1000 ml destillert vann.

For å hjelpe med å oppløse mediet i vannet, kan løsningen varmes opp litt, men ikke for mye.

Når den er homogen, tilberedes løsningen på følgende måte: hvis buljongen skal brukes til å søke etter koliforme, blir et rekk med prøverør tilberedt, hvori et Durham-fermenteringsrør settes opp ned.

Durham-røret er en veldig viktig detalj, fordi det vil tillate deteksjon av gassdannelse, en data av stor verdi i jakten på koliformer.

Når rørene er klare, blir 10 ml av laktosebuljongen utdelt i dem, en mengde som må være tilstrekkelig for å dekke hele Durham-røret.

Hvis laktosebuljongen skal brukes som en anrikningsbuljong, er det ikke nødvendig å plassere et Durham-fermenteringsrør. I dette tilfellet er det nødvendig med en større mengde medium (225 ml), som skal serveres i 500 ml flasker, bred munn og med en termobestandig skrukork.

Deretter autoklaveres rørene eller kolbene ved 121 ° C i 15 minutter.

Mediet må forbli ved en endelig pH på 6,9 ± 0,2 ved 25 ° C.

Buljongen holdes i kjøleskapet til bruk.

Før bruk må buljongen bringes til romtemperatur.

På den annen side kan laktosebuljong også tilberedes i dobbel konsentrasjon.

Noen laboratorier legger bromokresol lilla til laktosebuljongen som en pH-indikator for å vise rørene der det har vært laktosegjæring på grunn av fargeendringen. I dette tilfellet tar buljongen en lilla farge, og hvis det er gjæring, blir den gul.

applikasjoner

I mikrobiologilaboratorier brukes laktosebuljong mye, da det er et relativt billig medium som gir pålitelige og raske resultater (24-48 timer).

Det kan brukes til analyse av totale og fekale koliformer i vann og mat eller som en pre-anrikningsbuljong for Salmonella.

Pre-berikelse

Forberikelsen er et trinn før anrikningen av prøven, noe som forbedrer utvinningen av bakterier av slekten Salmonella i bearbeidet mat.

For å gjøre dette blir den faste matprøven (25 gram) eller væske (25 ml) frøet i 225 ml laktosebuljong, inkuberende i 24 til 48 timer. Deretter vil den bli underdyrket i et anriket medium slik som selenitt cystinbuljong eller tetrathionatbuljong. Gå deretter videre til XLD og SS-selektive medier.

Total og fekal coliform analyse

Det er et utmerket medium som indikator på fekal forurensning.

Av denne grunn er laktosbuljong ideell for den antatte fasen av koliformundersøkelsen etter metoden Most Probable Number.

For prøver der det er mistanke om en stor mengde coliforms, vil en mindre mengde av det inokuleres (1 ml), mens for prøver der det er mistanke om en lavere mengde coliforms, vil et større volum av prøver (10 ml) inokuleres.

For analysen blir 10 ^-1 , 10 ^-2 , 10 ^-3 fortynninger laget og danner et batteri på 3-5 rør for hver konsentrasjon som brukes.

Fra hver fortynning sås det samme volumet inn i laktosebuljongene.

Rørene blir inkubert i 24 timer. Negative buljonger inkuberes i ytterligere 24 timer.

Tolkningen av resultatene gjøres ved å observere to egenskaper: den første er tilstedeværelsen eller fraværet av uklarhet, og da dette mediet ikke inneholder en pH-indikator, vil det ikke være noen fargeendring.

Det andre er produksjon eller ikke av gass. Gass kan lett påvises i Durham-røret ved utseendet til en eller flere luftbobler inni den.

Det anses som positivt hvis begge egenskapene blir observert, det vil si uklarhet ved gassproduksjon. Positive rør bør sås på nytt i bekreftende medier (2% Brilliant Green Bile-buljong og EC-buljong).

Kvalitetskontroll av mediet

- Når du forbereder mediet er det viktig å ikke glemme å plassere Durhams-rørene hvis formålet med det samme er å studere coliforms.

- Ikke overopphetes mediet før sterilisering.

- Distribuer i prøverør før sterilisering, aldri etter.

- Ikke bruk hvis mediet er mer enn 3 måneder gammelt.

- Ikke bruk hvis du observerer noen endring i de vanlige egenskapene til mediet.

- Når du tilbereder en gruppe laktosebuljong, må du teste kvaliteten ved å så kjente stammer som Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Citrobacter freundii og Klebsiella pneumoniae. De vokser veldig bra, med gassproduksjon (positiv kontroll).

- Det kan også omfatte Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium eller Enterococcus faecalis, som vokser godt, men uten gassproduksjon (Negativ kontroll).

- Det skal bemerkes at den opprinnelige fargen til det dehydrerte mediet er beige og at det tilberedte mediet er veldig lys og gjennomsiktig gult. Hvis en endring i farge eller utseende observeres, kan det forringes.

referanser

1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Miljøbiologi og mikrobiologi. (2013) 1. utgave. University of Cartagenas, Colombia.
2. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B og Velázquez O. (2009). Teknikker for mikrobiologisk analyse av mat. 2. utg. Fakultet for kjemi, UNAM. Mexico.
3. Conda Pronadisa Laboratories. 2017. Dobbeltkonsentrasjon av laktosebuljong (European Pharm.)
4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Sammenligning av teknikker for ekstraksjon av koliforme bakterier fra sedimentet av innsjøen Xochimilco, Mexico. Pastor argent. Microbiol. 2013; 45 (3): 180-184. Tilgjengelig på: scielo.org.
5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Bestemmelse av den mikrobiologiske kvaliteten på artesisk brønnfarvann i distriktene i Central, Cordillera og Capital Municipality. Mem. Inst. Investig. Vitenskap. Helse 2013; 11 (1): 5-14. Tilgjengelig fra: scielo.iics.