MALONATE BULJONG: FUNDAMENTERING, KLARGJØRING OG BRUK - BIOLOGI - 2026

Den malonat kjøttkraft er det flytende dyrkningsmediet som anvendes for den diagnostiske test (malonat), som brukes til å differensiere noen slekter av familien Enterobacteriaceae. Det ble opprettet av Leifson i 1933 og senere modifisert av Ewing, som la en liten mengde dekstrose og gjærekstrakt til den opprinnelige formelen.

Mediet er for tiden sammensatt av gjærekstrakt, ammoniumsulfat, dipotassium fosfat, monopotassium fosfat, natriumklorid, natriummalonat, dekstrose og bromothymolblått. Denne testen er vanligvis inkludert i det biokjemiske identifiseringsbatteriet for Enterobacteriaceae, og hjelper til med å differensiere visse slekter og arter.

Grafisk fremstilling av malonatetesten. A. Negativ test, B. (Forsuring) Negativ test, C. (Middels alkalisering) Positiv test. Kilde: Color tubes publicdomainpictures.net

Malonat-testen er hovedsakelig basert på noen mikroorganismeres evne til å bruke natriummalonat som deres eneste karbonkilde og ammoniumsulfat som nitrogenkilde.

Malonat-testen er vanligvis positiv hos noen arter av slektene Enterobacter, Klebsiella og Citrobacter. Mens de fleste artene av slekten Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus og Providencia gir en negativ reaksjon.

Basis

Malonat-testen består av å vise de bakteriene som er i stand til å bruke natriummalonat som eneste karbonkilde og ammoniumsulfat som nitrogenkilde.

De fleste av Enterobacteriaceae som ikke bruker malonat, er i stand til å vokse i dette mediet, og tar dekstrose og gjærekstrakt som næringsstoffer.

I dette tilfellet vil ethvert forsøk på å alkalisere ved bruk av peptoner motvirkes av produksjonen av syrer generert ved gjæring av dekstrose. På samme måte fungerer dipotassium og monopotassium fosfater som en buffer, og holder pH på 6,7.

Derfor er buljongen den samme originale fargen (grønn) når testen er negativ. I sjeldne tilfeller kan mediet bli surt på grunn av fermentering av dekstrose; uten bruk av peptonene og pH-indikatoren ville det vri fargen på mediet mot gult. For at dette skal skje, må pH-verdien synke til 6.

Når denne testen er positiv, sies det imidlertid at mikroorganismen brukte henholdsvis malonat og ammoniumsulfat som karbon- og nitrogenkilder, uten å gjøre bruk av de andre komponentene.

I dette tilfellet blir mediet alkalisk på grunn av frigjøring av natrium og den påfølgende dannelse av NaOH. På denne måten gjør pH-indikatoren (bromotymolblå) fargen på mediet fra grønt til blått når pH er lik eller større enn 7,6. Blått kan være lett eller intenst (preussisk blått).

Endelig opprettholder natriumklorid osmolariteten til mediet, og vannet er fortynningsmidlet for alle komponentene.

Tolkning

Same Color buljong (grønn) - negativ test

Gul buljong: negativ test

Lys eller dyp blå buljong: test positiv

Det er en variant som kalles fenylalaninmalonatbuljong, også kalt Shaw og Clarkes medium. I dette tilfellet kan to tester analyseres, bruk av malonat som karbonkilde og produksjon av pyruvinsyre fra fenylalanin.

Forberedelse

Malonate buljong

Antallet gram som er spesifisert av innsettet til det valgte kommersielle selskapet veies (det kan variere fra ett til et annet). De veide gram ble suspendert i en liter destillert vann. Varm litt til helt oppløst. Fordel 3 ml av mediet i 13/100 prøverør med bomullshetter.

Steriliser i autoklav ved 121 ° C i 15 til 20 minutter.

Avkjøl før bruk. Hvis de ikke skal brukes umiddelbart, må du oppbevare i kjøleskapet til bruk. Ta buljongen til romtemperatur før inokulering.

PH i mediet bør være 6,7 ± 0,2. Fargen på det tilberedte mediet er flaskegrønn.

Fenylalaninmalonatbuljong

Vei 11 g av det dehydrerte mediet og oppløs i 1 liter destillert vann. Resten av preparatet er det samme som tidligere beskrevet.

Det kan også fremstilles ved å tilsette 2 g / l fenylalanin til malonatbuljongmediet før det steriliseres.

Bruk

Det brukes som en del av batteriet til biokjemiske tester som er satt sammen for identifisering av bakterier i familien Enterobacteriaceae.

Hjelper med å skille mellom:

-Slekten Klebsiella og Enterobacter (+) til slekten Escherichia og Serratia (-).

-Arten Salmonella enterica ssp arizonae, Salmonella enterica ssp salame og Salmonella enterica ssp diarizonae (+), av arten Salmonella enterica ssp enterica (-).

-Fra slekten Klebsiella generelt (+) fra slekten Actinobacillus (-).

-Andre kan det hjelpe differensieringen av slekter og arter av bakterier som ikke tilhører Enterobacteriaceae-familien, for eksempel blant de ikke-gjærende Gram-negative bacilliene Alcaligenes faecalis (+) og Acinetobacter sp (-).

Kilde: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. utg. Redaksjonell Panamericana SA Argentina.

Prosess

Under en lighter tas en del av en ren köln ved bruk av et riktig sterilisert og avkjølt platinahåndtak. Prøven som ble tatt (lett inokulum) blir oppløst i malonatbuljongen. Inkuber med lokket løst i aerobiose ved 35 ° C ± 0,2 i 24 til 48 timer.

Malonatbuljong kan også inokuleres fra en 18-24 timers kultur i trypticase soyabuljong. I dette tilfellet blir 0,01 ml tatt med en steril pipette og malonatbuljongen inokulert. Inkuber med lokket løst i aerobiose ved 35 ° C ± 0,2 i 24 til 48 timer.

På slutten av tiden tolkes resultatene. Ethvert spor av blå farge etter 48 timers inkubasjon bør anses som positivt. Testen skal ikke tolkes som negativ før 48 timers inkubasjonstid har gått.

Når det gjelder bruk av fenylalaninmalonatbuljongvarianten, tolkes først malonatet, og deretter tilsettes 5 dråper IN HCl og 3-5 dråper 8% jernklorid. En mørkegrønn farge tolkes som en positiv test for fenylalanin. Hvis mediet derimot blir blekblått, er testen negativ for fenylalanin.

QA

For å utføre sterilitetskontrollen av mediet, bør en eller to buljonger inkuberes ved 35 ° C ± 0,2 i 24 timers inkubasjon. Etter denne tiden skal det ikke være sky eller fargeendring.

For kvalitetskontroll kan kjente eller sertifiserte stammer brukes, for eksempel: Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, Salmonella enterica ssp arizonae ATCC 13314 og Escherichia coli ATCC 25922.

De forventede resultatene er:

• Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae og Salmonella enterica ssp arizonae gir en positiv reaksjon (medium blå farge).
• For Escherichia coli bør resultatet være negativt, det vil si at det forventes at det ikke vil være noen fargeendring (grønt) eller at det blir gult på grunn av glukosegjæring.

begrensninger

Ikke bruk buljong som viser turbiditet, bunnfall, fargeendring eller tegn på forverring.

referanser

1. Pedraza J, Sanandres N, Varela Z, Aguirre E, Camacho J. Mikrobiologisk isolasjon av Salmonella spp. og molekylære verktøy for deteksjon. Uninorte helse. Barranquilla (Col.) 2014; 30 (1): 73-94. Tilgjengelig på: scielo.org.co
2. BBL. Malonate Broth, Ewing modifisert. 2007. Tilgjengelig på: bd.com
3. Senna Laboratories. Malonato buljong. Tilgjengelig på: cientificasenna.com
4. RenyLab. Malonato buljong. 2013. Tilgjengelig på: es.renylab.ind.br
5. Mbiolog Diagnostics. Malonato buljong. Tilgjengelig på: mbiolog.com
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. utg. Redaksjonell Panamericana SA Argentina.
7. Conda Pronadisa Laboratories. Fenylalaninmalonatbuljong. Tilgjengelig på: condalab.com