SELENBULJONG: FUNDAMENTERING, KLARGJØRING OG BRUK - BIOLOGI - 2026

Den selenitt er et selektivt flytende kulturmedium. Det ble designet av Leifson for berikelse av prøver der det er mistanke om tilstedeværelse av enteropatogene bakterier i slekten Salmonella.

Dette mediet oppfyller kravene fra American Public Health Association (APHA), og er derfor akseptert for undersøkelse av tilstedeværelsen av Salmonella i prøver av avføring, urin, flytende eller fast mat, vann, blant andre.

Selenbuljong. Kilde: Foto tatt av forfatteren MSc. Marielsa gil

Den kjemiske sammensetningen favoriserer utvinningen av disse mikroorganismene og inhiberer igjen andres vekst. Det er først og fremst giftig for de fleste bakterier som tilhører Enterobacteriaceae-familien. Imidlertid tillater det også utvinning av Shigella-stammer og hemmer ikke veksten av Pseudomonas og Proteus.

Den er sammensatt av vannfri natriumhydrogen selenitt, vannfri natriumfosfat, peptoner og laktose. Det er også en variant som cystin blir lagt til, derav navnet selenitt-cyste buljong.

Foreløpig foretrekkes bruk av selenitt-cystinbuljong, ettersom en høyere prosentandel av utvinning av Salmonella oppnås, tilsvarende det som observeres med andre selektive medier for samme formål, så som natrium-tetrionionat-buljong.

Basis

Peptonene i buljongen fungerer som næringsstoffer for riktig utvikling av mikroorganismer. Salmonella-stammer bruker peptoner som en kilde til nitrogen, vitaminer og aminosyrer.

Laktose er det gjærbare karbohydratet, mens natriumselenitt er det hemmende stoffet som stopper veksten av Gram-positive bakterier og de fleste bakteriene som finnes i tarmfloraen, spesielt av Enterobacteriaceae-familien. Natriumfosfat er bufferen som stabiliserer pH i mediet.

Når det gjelder selenbuljongvarianten som inneholder L-cystin, er denne tilleggsforbindelsen et reduksjonsmiddel som minimerer toksisiteten til selenitt, noe som øker utvinningen av Salmonella.

Forberedelse

-Selenitt buljong

Hvis du har komponentene i blandingen, kan du veie:

4 g vannfri natriumhydrogen-selenitt.

10 g vannfri natriumfosfat.

5 g peptoner.

4 gram laktose.

Løs opp forbindelsene i 1 liter sterilt destillert vann. Den kan varmes opp litt for å oppløses fullstendig.

Noen laboratorier utsetter mediet i 10 minutter i flytende damp for å sterilisere det, da en autoklav ikke bør brukes. Hvis mediet er sterilisert, kan det oppbevares i kjøleskapet til bruk.

Den kan også tilberedes ikke-steril og serveres direkte 10 til 15 ml i sterile prøverør.

I dette tilfellet bør det hvile og bruke umiddelbart. Siden mediet ikke er sterilt, kan det ikke oppbevares i kjøleskap for senere bruk.

- Forberedelse av det kommersielle miljøet

Hvis det kommersielle mediet er tilgjengelig, veier du 23 g av det dehydrerte mediet og løser det opp i en liter sterilt destillert vann. Varm kort opp for å fullføre oppløsningen. Ikke autoklaver. Server aseptisk 10 eller 15 ml i sterile prøverør.

Den endelige pH for mediet bør være 7,0 ± 0,2.

Det skal bemerkes at fargen på det dehydrerte mediet er beige og preparatet er lett og gjennomskinnelig rav.

Selenitt-cyste buljongvariant

Den inneholder de samme forbindelsene som selenittbuljong, men 10 mg cystin tilsettes. Resten av prosedyren er nøyaktig den samme som beskrevet ovenfor.

applikasjoner

Dette mediet er spesielt å bruke i epidemiologiske studier, i tilfeller der sykdommen ikke er i sin akutte fase, asymptomatiske pasienter eller friske bærere.

Isolering av slekten Salmonella er generelt vanskelig, siden de vanligvis bare er forurensende prøver. Når det er i små mengder, overlappes det lett av veksten av andre bakterie-slekter som finnes i større mengde.

På den annen side blir råmaterialet som bearbeidet mat blir laget ofte utsatt for varme, dehydratiseringsprosesser, bruk av desinfeksjonsmidler, stråling og konserveringsmidler, blant andre.

Derfor blir laksemellasene som er tilstede i råstoffet mishandlet ved å utsette produktet for de nevnte industrielle prosesser. På samme måte, i tilfelle av kliniske prøver som feces, kan stammene være svake hvis de kommer fra pasienter som har blitt behandlet med antibiotika.

Derfor bør enhver prøve der det er mistanke om tilstedeværelse av Salmonella, forhåndsanrikes i laktosebuljong og deretter anrikes i selenittbuljong for å optimalisere utvinningen i selektive medier, for eksempel SS-agar, xylose-agar, lysin-deoksykolat (XLD) ), enterisk Hektoen-agar (HE) og knallgrønn agar, blant andre.

sådd

For avføringsprøver ta 1 g prøve og suspendere i et rør med 10 til 15 ml selenittbuljong. Hvis avføringen er flytende, ta 1 ml og suspendere i buljongen. For rektal vattpinner, tøm du vattpinnematerialet i buljongen.

I faste matprøver ta 1 gram og suspendere i selenbuljong.

I flytende mat blandes i like deler med selenbuljongen i dobbel konsentrasjon.

For urinprøver, sentrifuger, kast supernatanten, ta alt sedimentet og suspendert det i selenitt-buljongen.

Buljongene inkuberes ved 37 ° C i 24 timers inkubasjon. Bakteriell vekst er påvist av turbiditet. Et ekstra rør per prøve kan også inkluderes for inkubering ved 42 ° C. Deretter såing av selektive faste medier fra selenbuljong.

QA

For å kontrollere sterilitet inkuberes en selenittbuljong fra hver uinokulert sats ved 37 ° C i 24 timer. Det forventes at det ikke er noen turbiditet eller fargeendring av mediet.

Kjente stammer kan brukes til å kontrollere riktig funksjon av mediet, for eksempel:

Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 og Proteus mirabilis ATCC 43071.

De forventede resultatene er:

• For de tre første bakteriestammene må veksten være tilfredsstillende.
• For Escherichia coli delvis hemning.
• For Proteus moderat vekst.

begrensninger

Selenitt buljong er giftig for menneskets hud, derfor bør direkte kontakt unngås.

referanser

1. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Sammenligning mellom kulturmedier av natriumselenitt og natriumtetrationat, begge inkubert ved 37 ° C og 42 ° C for isolasjonen av Salmonella spp fra avføringen til bærere. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220
2. Britannia Laboratories. Selenito Bouillon. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
3. Neogen Laboratories. Selenbuljong. Tilgjengelig på: foodsafety.neogen.com
4. González -Pedraza J, Pereira-Sanandres N, Soto -Varela Z, Hernández -Aguirre E, Villarreal- Camacho J. Mikrobiologisk isolasjon av Salmonella spp. og molekylære verktøy for deteksjon. Helse, Barranquilla 2014; 30 (1): 73-94. Tilgjengelig fra: http://www.scielo.org.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 utg. Redaksjonell Panamericana SA Argentina.