TRYPTICASEIN SOYABULJONG: FUNDAMENTERING, TILBEREDNING OG BRUK - BIOLOGI - 2026

Den soyamedium trypton er et flytende kulturmedium, med høyt næringsinnhold, ikke-selektive. På grunn av sin store allsidighet er det et av de mest brukte flytende kulturmediene i mikrobiologilaboratoriet.

Det er også kjent under navnet tryptisk soyabuljong eller fordøyd kasein-soya, hvis forkortelse er TSB for dets forkortelse på engelsk Tryptic Soy Broth eller CST for dets akronym på spansk. Bruksområdene er veldig varierte på grunn av sammensetningen. Det er sammensatt av triptein, soyapepton, natriumklorid, dipotassium fosfat og glukose.

Trypticasein soyabuljong frøet med en stamme av Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 hvor pigmentproduksjon observeres. Kilde: Foto tatt av forfatteren MSc. Marielsa Gil.

Den er i stand til å reprodusere klinisk viktige patogene bakterier, inkludert de som er ernæringsmessige krevende og anaerobe bakterier. Noen opportunistiske og forurensende sopp kan også utvikle seg i dette miljøet.

På grunn av sin høye ernæringskraft har den høye følsomhet for å oppdage mikrobiell forurensning, av denne grunn ble den valgt av USDA Animal and Plant Health Inspection Service for den mikrobiologiske analysen av vaksiner.

På samme måte oppfyller trypticasein soyabuljong kravene fra de forskjellige farmakopéene (europeisk EP, japansk JP og Nordamerikansk USP) for mikrobiologisk studie av produkter på industrielt nivå, for eksempel kosmetikk og mat.

På den annen side er det verdt å nevne at til tross for dets store nytteverdi, er dette mediet relativt billig, noe som gjør det rimelig for de fleste mikrobiologiske laboratorier. Det er også veldig enkelt å tilberede.

Basis

Triptein, pepton og glukose gir viktige ernæringsegenskaper for å gjøre det til et ideelt medium for rask mikrobiell vekst.

På omtrent 6 til 8 timers inkubasjon kan man allerede se vekst hos de fleste mikroorganismer. Imidlertid er det langsomtvoksende stammer som kan ta dager å vokse.

Natriumklorid og dipotassium phosphate fungerer som henholdsvis osmotisk balanse og pH-regulator. Tilstedeværelsen av vekst er påvist av utseendet til uklarhet i mediet; hvis det ikke er noen vekst, forblir mediet gjennomskinnelig.

På grunn av sin lette farge er det mulig å observere produksjonen av pigmenter, slik som den som er vist på bildet som ligger i begynnelsen av artikkelen, som tilsvarer pigmentet produsert av Pseudomonas aeruginosa.

Forberedelse

-Triptysein soyabuljong

For å fremstille tryptisk soyabuljong må 30 g av det dehydrerte kommersielle mediet veies i digital skala. Deretter løses den opp i en liter destillert vann som finnes i en kolbe.

Blandingen får hvile i 5 minutter og deretter føres den til en varmekilde for å hjelpe med å oppløse mediet. Det bør røres ofte mens det kokes i 1 minutt.

Når den er oppløst, fordeles den i rør av passende størrelse etter behov. Rør med bomullsplugger eller med Bakelite-lokker kan brukes. Deretter steriliseres rørene med mediet i autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter.

PH i mediet må forbli på 7,3 ± 0,2

Det skal bemerkes at fargen på det dehydrerte dyrkningsmediet er lys beige og bør oppbevares mellom 10 og 35 ° C, på et tørt sted. Mens den tilberedte buljongen er lys ravfarget og bør oppbevares i kjøleskap (2 til 8 ° C).

-Varianter av trypticasein soyabuljong

Modifisert trypticasein soyabuljong kan fremstilles ved å tilsette gallesalter og novobiocin for å gjøre den selektiv for isolering av E. coli. Et annet alternativ for samme formål er å tilberede trypticase soyabuljong supplert med vankomycin, cefixime og telluritt (2,5 ug / ml).

På den annen side kan mer glukose (0,25%) tilsettes til trypticasein soyabuljong når målet er å stimulere dannelsen av biofilmer.

Bruk

Det er næringsrikt nok til å tillate vekst av raske eller kvisende bakterier som Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp og Brucella sp, uten å måtte supplere med blod eller serum.

På samme måte kan noen sopp utvikle seg i denne buljongen, for eksempel Candida albicans Complex, Aspergillus sp og Histoplasma capsulatum.

Videre er dette mediet under anaerobe forhold ideelle for å utvinne bakterier som tilhører slekten Clostridium, så vel som ikke-sporulerte anaerobe bakterier av klinisk betydning.

Hvis 6,5% natriumklorid tilsettes, kan det brukes til vekst av Enterococcus og annen gruppe D Streptococcus.

På forskningsnivå har det vært veldig nyttig i forskjellige protokoller, spesielt i studiet av biofilm eller biofilmdannende bakterier. Det brukes også til å fremstille den 0,5% Mac Farland-bakteriesuspensjonen som er nødvendig for å utføre antiogrammet ved Kirby og Bauer-metoden.

I dette tilfellet tas 3 til 5 kolonier med lignende utseende og emulgeres i 4-5 ml trypticasein soyabuljong. Deretter inkuberes det i 2 til 6 timer ved 35-37 ° C og deretter justeres til ønsket konsentrasjon ved bruk av sterilt saltvann. Trypticasein soyabuljong bør ikke brukes fra 18 til 24 timers inkubasjon.

sådd

Prøven kan seedes direkte, eller rene kolonier hentet fra selektive medier kan subkultureres. Inokulatet skal være lite for ikke å sky på mediet før inkubering.

Normalt blir det inkubert ved 37 ° C i aerobiose i 24 timer, men disse forholdene kan variere avhengig av hvilken mikroorganisme som ønskes. Det kan også inkuberes under anaerobe forhold ved 37 ° C i flere dager om nødvendig. For eksempel kan hurtigvoksende eller raske mikroorganismer inkuberes i opptil 7 dager.

I den mikrobiologiske analysen av farmasøytiske stoffer - for eksempel vaksiner - er protokollene strengere. I disse tilfellene kastes ikke buljongen uten vekst før den når 14 dager med kontinuerlig inkubering.

QA

Fra hver forberedt batch skal 1 eller 2 uinokulerte rør inkuberes for å demonstrere deres sterilitet. Det må forbli uendret.

Kjente stammer kan også plantes for å vurdere deres oppførsel. Blant anstrengelsene som kan brukes er:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 eller 25923, Escherichia coli ATCC 8739, Streptococcus pyogenes ATCC 19615, ATreCeCeCeCeCeCeCeCeCeC8eC, ATCCC5C8CC, PSA.

I alle tilfeller må veksten være tilfredsstillende under passende atmosfære og temperaturforhold for hver mikroorganisme.

begrensninger

-Fermenteringen av glukose forårsaker en reduksjon i pH i mediet på grunn av produksjonen av syrer. Dette kan være ugunstig for overlevelsen av noen mikroorganismer som er følsomme for surhet.

-Det anbefales ikke for vedlikehold av stammer, fordi i tillegg til surhet, tømmer bakterier næringsstoffer etter noen dager med den påfølgende ansamlingen av giftige stoffer som gjør miljøet ugjestmilde.

-Du må jobbe med å ta vare på alle sterilitetsprotokoller, siden buljongene lett er forurenset.

-Etter å ha tilberedt soybuljongene med trypticasein, bør du ikke prøve å overføre buljongen til et annet sterilt rør, fordi denne typen manøvrer er veldig sårbare for forurensning.

referanser

1. Cona E. Betingelser for en god mottakelighetsundersøkelse ved agar-diffusjonstest. Pastor chil. infectol. 2002; 19 (2): 77-81. Tilgjengelig på: scielo.org
2. Britannia Laboratory. Triptein soyabuljong. 2015. Tilgjengelig på: britanialab.com
3. MCD Laboratory. Trypticasein Soy buljong. Tilgjengelig på: electronic-systems.com
4. Neogen Laboratory. Triptych Soy buljong. Tilgjengelig på: foodsafety.neogen.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 utg. Redaksjonell Panamericana SA Argentina.
6. Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. Evaluering av magnetisk immunoseparasjonsteknikk for utvinning av Escherichia coli O157: H7 i melkekremer. ALAN. 2006; 56 (3): 257-264. Tilgjengelig på: scielo.org.ve
7. Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Finol M. Biofilmformasjon i Staphylococcus aureus isolater i henhold til antimikrobiell mottakelighet og klinisk opprinnelse. Vitae. 2015; 62 (1): 1-8. Tilgjengelig på: saber.ucv.ve
8. Narváez-Bravo C, Carruyo-Núñez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T. Isolasjon av Escherichia coli O157: H7 i dobbelt formål Bovine feces Prøver fra Miranda kommune, Zulia delstat, Venezuela. Pastor Cient. (Maracaibo), 2007; 17 (3): 239-245. Tilgjengelig på: scielo.org