TETRATHIONATE BULJONG: BEGRUNNELSE, KLARGJØRING OG BRUK - BIOLOGI - 2026

Den tetrationat kjøttkraft eller kjøttkraft TT er et selektivt flytende kulturmedium for anrikning og utvinning av slekten Salmonella-stammer. Den ble opprettet av Müeller og senere modifisert av Kauffmann, og det er derfor det er de som kaller det Müeller-Kauffmann buljong.

Det opprinnelige mediet inneholdt proteosepeptoner, kalsiumkarbonat og natriumtiosulfat. Kauffmann la gallesalter til det og skapte en annen modalitet med lysegrønt. Disse stoffene hemmer veksten av coliforms, og lar mediet være fritt for utvikling av sykdomsfremkallende bakterier, i dette tilfellet Salmonella.

Tilsetning av jod-jodløsningen i tetrathionat-buljongen. Kilde: Manuel Almagro Rivas

Modifiseringen var veldig vellykket fordi den økte medias følsomhet betydelig. Av denne grunn er det for tiden nyttig for leting etter Salmonellas i alle typer prøver, men spesielt for fast eller flytende avføring og mat.

Forberedelsen består av to faser; Det kommersielle mediet er en base for å fremstille tetrationatbuljongen, og deretter tilsettes en jodert jodoppløsning for å fullføre mediet, slik at tetrationatet kan dannes.

American Public Health Association (APHA) anbefaler bruk av Tetrathionate Bouillon supplert med knallgrønt for berikelse av prøver for Salmonella, da det er mer selektivt enn Tetrathionate Bouillon og Selenite Broth.

Generelt er tetrathionate-buljong ideell når det er mistanke om tilstedeværelse av bakterier i slekten Salmonella i små mengder, eller når de misbrukes av eksponering for hemmende stoffer eller ved industrielle prosesser som minimerer deres levedyktighet.

Basis

Tilstedeværende peptoner tilsvarer pancreas fordøyelse av kasein og peptisk fordøyelse av dyrevev. Disse gir kilden til karbon, nitrogen og generelle næringsstoffer for bakterievekst.

Natriumtiosulfat reagerer på sin side med den joderte løsningen for å danne tetrationat. Dette hemmer veksten av coliforms og favoriserer utviklingen av bakterier som inneholder enzymet tetrathionate reductase, blant dem er slekten Salmonella, men også Proteus.

Galgesalter fungerer også som et hemmende stoff for de fleste Gram-positive og noen Gram-negative bakterier (coliforms).

Kalsiumkarbonat absorberer de giftige stoffene som genereres ved nedbrytning av tetrationat, som danner svovelsyre. I denne forstand nøytraliserer kalsiumkarbonat surhet og holder pH i mediet stabilt.

Når det gjelder den lysegrønne modaliteten øker dette stoffet den selektive kraften til tetrathionatbuljong ved å hemme andre mikroorganismer enn Salmonella-slekten.

Forberedelse

-Tetrationionate buljong

Jod-oppløsning

Å veie:

• 6 gram jod.
• 5 g kaliumjodid.

Kaliumjodidet blir oppløst i omtrent 5 ml sterilt destillert vann, deretter tilsettes jod litt etter litt mens blandingen blir oppvarmet. Etter at det er fullstendig oppløst, fylles det opp til merket med sterilt destillert vann til det når et sluttvolum på 20 ml.

Base medium for tetrathionate buljong

Vei 46 gram av det dehydrerte mediet og suspenderes i 1 liter sterilt destillert vann. Bland og varm til det er helt oppløst, det kan koke bare i noen minutter. Ikke autoklaver. Basen til mediet får avkjøle seg til omtrent 45 ° C, og på det tidspunktet tilsettes 20 ml av den joderte løsningen.

Etter å ha tilsatt den joderte løsningen til mediet, bør den brukes umiddelbart. Hvis du ikke vil bruke hele blandingen, fortsett som følger:

10 ml av basemediet fordeles i rør, og bare til de som skal inokuleres med prøver tilsettes 0,2 ml av den joderte løsningen.

De som ikke skal brukes, kan fremdeles lagres i kjøleskapet, men da mediet ikke er sterilisert, er idealet å tilberede den nøyaktige mengden som trengs.

Fargen på mediet før tilsetning av den joderte jodoppløsningen er melkehvit med et hvitt bunnfall og etter tilsetning er det brunt med et tett bunnfall. Det observerte bunnfallet er normalt og tilsvarer kalsiumkarbonat som ikke løses opp. Den endelige pH for mediet er 8,4 ± 0,2.

-Tetrationionate buljongvariant med knallgrønt

For å fremstille den lysegrønne tetrationionatbuljongen, blir alle trinnene beskrevet ovenfor utført, men i tillegg vil 10 ml av den lysegrønne oppløsningen fremstilt ved 0,1% bli tilsatt til blandingen.

Skinner grønt

Denne løsningen blir fremstilt som følger:

Vei 0,1 g lysegrønn og suspendere i 100 ml destillert vann. Varm opp til kokende for å oppnå total oppløsning. Oppbevares i ravflaske.

Bruk

For avføringsprøver (avføringskultur) er protokollen som følger:

Inokuler 1 g fast avføring eller 1 ml flytende avføring i et rør med 10 ml klar-til-bruk tetrathionat-buljong. Rist kraftig og inkuber aerobt ved 43 ° C i 6-24 timer.

Deretter tar du en 10 til 20 ul alikvot av buljongen og subkulturen i et selektivt medium for Salmonella, for eksempel SS-agar, XLD-agar, lysegrønn agar, Hektoen enterisk agar, blant andre.

Parallelt bør selektive medier for Salmonella inokuleres med den direkte prøven (avføring) uten berikelse. For prøver av rektal vattpinne, tøm det oppsamlede materialet i røret og fortsett som beskrevet ovenfor.

For matprøver må du veie 10 g fast mat eller 10 ml flytende mat og inokulere en flaske med 100 ml klar til bruk tetrathionatbuljong. Fortsett på samme måte som beskrevet ovenfor, men inkuber ved 37 ° C.

Som det fremgår vil forholdet mellom prøven og buljongen alltid være 1:10.

QA

Kjente kontrollstammer kan brukes til å teste kulturmediet. De mest brukte er ATCC-sertifiserte stammer.

Stammene som skal brukes er Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 og Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Det forventes utmerket vekst for Salmonella-stammer, mens Escherichia coli kan ha svak eller regelmessig vekst, og Gram-positive stammer (Enterococcus og Staphylococcus) er delvis eller fullstendig hemmet.

anbefalinger

-Som dette mediet ikke hemmer veksten av Proteus, bruker noen laboratorier 40 mg / l novobiocin for å forhindre utvikling av denne mikrobielle stammen. Antibiotikumet må tilsettes før jodløsningen.

-Etter tilberedning av mediet inkludert jod-jodoppløsningen, bør det ikke ta mer enn 2 timer å bli inokulert.

-Når man fordeler mediet i rørene, må blandingen kontinuerlig homogeniseres for å resuspendere det dannede bunnfallet.

-I mindre kontaminerte prøver inkuberes tetrathionatbuljong ved 35-37 ° C, og i sterkt forurensede prøver anbefales inkubering ved 43 ° C.

referanser

1. Conda Pronadisa Laboratory. 2010. Tetrathionate buljongbase i følge Müeller-Kauffmann. Tilgjengelig i:
2. BD Laboratories. 2003. Tetrathionate Broth Base. Tilgjengelig i:
3. Britannia Laboratories. 2015. Tetranate-basjong. Tilgjengelig i:
4. BBL Media. 2005. Forberedt i rør for kulturen av Salmonella-arten.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 utg. Redaksjonell Panamericana SA Argentina.
6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Sammenligning mellom kulturmedier av natriumselenitt og natriumtetrationat, begge inkubert ved 37 ° C og 42 ° C for isolasjonen av Salmonella spp fra avføringen til bærere. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220