TIOGLYKOLLATBULJONG: BEGRUNNELSE, KLARGJØRING OG BRUK - BIOLOGI - 2026

Den tioglykollat-buljong er et medium anriket flytende konsistens. Det er kjent av forkortelsen FTM for sin forkortelse på engelsk Fluid Thioglycollate Medium. Det ble opprettet av Brewer og modifisert i 1944 av Vera, som la kaseinpepton til det.

Dette mediet har et lite oksidasjonsreduksjonspotensial, derfor anbefales det ikke for utvikling av strenge aerobe bakterier, men det er ideelt for å utvinne fakultative aerobe, strenge anaerobe og krevende mikroaerofile bakterier.

Tioglykollatbuljong uten indikator. Viser vaginal utflod. Kilde: Bobjgalindo

Den høye ytelsen som er observert med dette mediet i isolasjon og utvinning av et bredt utvalg av mikroorganismer, har gjort at det ble akseptert av United States Pharmacopeia (USP), av Official Association of Agricultural Chemists (AOAC) og av European Pharmacopoeia ( EP).

Disse organisasjonene anbefaler det for sterilitetskontrolltesting av farmasøytiske produkter og for berikelse av forskjellige typer prøver.

Cado-thioglycolate består av gjærekstrakt, bukspyttkjertelen fordøyelse av kasein, vannfri dekstrose, L-cystin, natriumklorid, natrium thioglycollate, resazurin og agar i liten mengde.

Det er flere versjoner av dette mediet, blant dem er: tioglykollatbuljong med indikator, tioglykollatbuljong uten indikator, tioglykollatbuljong med indikator beriket med hemin og vitamin K _1, og tioglykollatbuljong med kalsiumkarbonat.

Spesielt tjener tioglycollate-buljongvarianten beriket med hemin og K-vitamin for å øke veksten av faste anaerober, og tioglycollate-buljongvarianten som inneholder kalsiumkarbonat er nyttig for å motvirke syrene produsert under mikrobiell vekst.

Basis

Thioglycollate buljong regnes som et ikke-selektivt berikingsmedium da det tillater vekst av de fleste ikke-fastidiske bakterier. Ernæringsbehovene blir gitt av gjærekstraktet, bukspyttkjertelen og glukose.

På den annen side inneholder dette mediet, til tross for at det er en buljong, en liten mengde agar; Dette betyr at det har et lavt oksidasjonsreduksjonspotensial, på grunn av det faktum at det bremser oksygeninntreden, på en slik måte at oksygen avtar når det går dypere inn i røret.

Derfor er dette mediet ideelt for utvikling av fakultative aerobe, mikroaerofile og strenge anaerobe bakterier, de siste 2 uten behov for å inkuberes under disse forhold. Det samme mediet regulerer mengden oksygen i mediet, og er fraværende i bunnen av røret og i tilstrekkelig mengde på overflaten.

På samme måte fungerer tioglykollat ​​og L-cystin som reduksjonsmidler, og hjelper til med å forhindre ansamling av stoffer som er skadelige for bakterieutvikling, for eksempel peroksyd. I tillegg inneholder disse forbindelsene sulfhydrylgrupper (-SH-), og nøytraliserer de hemmende virkningene av kvikksøllderivater, arsenikaler, blant andre tungmetaller.

Resazurin er på sin side en indikator på oksydreduksjon. Dette stoffet er fargeløst når det reduseres og rosa når det oksideres. Det finnes indikator- og ikke-indikator-tioglykollatbuljong-varianter. Bruken avhenger av prøvetypen og laboratoriets preferanse.

I mellomtiden opprettholder natriumklorid den osmotiske balansen i tioglykollatbuljongen og bruk av glukose i vannfri form forhindrer overflødig fuktighet i det dehydrerte mediet.

Forberedelse

Thioglycollate buljong med indikator

Vei ut 29,75 g av det dehydrerte mediet og oppløs i 1 liter destillert vann. Blandingen får stå i omtrent 5 minutter. Ta den til en varmekilde og rør ofte til den er helt oppløst.

Hell mediet i prøverørene og autoklaver ved 121 ° C i 15 minutter. La avkjøle før bruk. Sjekk innlegget til næringshuset for å bevare det. Noen anbefaler å oppbevare ved romtemperatur på et mørkt sted, og andre i et kjøleskap beskyttet mot lys.

PH for det tilberedte mediet er 7,1 ± 0,2.

Fargen på det dehydrerte mediet er lys beige og det tilberedte mediet er lys rav med noe opalescens.

Tioglykollatbuljong med indikator beriket med hemin og K-vitamin

Det er kommersielle medier som allerede inneholder hemin og vitamin K ₁ , spesielt for dyrking av anaerober.

Hvis du ikke har det berikede mediet for anaerober, kan du tilberede den grunnleggende tioglykollatbuljongen. For dette _tilsettes 10 mg heminhydroklorid og 1 mg vitamin K ₁ for hver liter medium. Hvis blod eller serum tilsettes thioglycollate-buljongen, er imidlertid ikke tilsetning av hemin eller K-vitamin nødvendig.

Tioglykollatbuljong med kalsiumkarbonat

Den kommer kommersielt og er forberedt ved å følge instruksjonene på innsatsen.

Tioglykollatbuljong uten indikator

Dette har den samme sammensetningen av det grunnleggende tioglykollatet, men inneholder ikke resazurin.

Vei 30 g av det dehydrerte mediet og oppløst i en liter destillert vann. Resten av preparatet er det samme som beskrevet i tioglykollatbuljongen med indikator.

Bruk

Tioglykollatbuljong er nyttig for berikelse av kliniske prøver, spesielt de fra sterile steder. Det er også nyttig for ikke-kliniske prøver, for eksempel kosmetikk, medikamenter, etc.

For inokulering av væskeprøver (som CSF, synovialvæske, blant andre), blir prøvene først sentrifugert og deretter tatt 2 dråper av sedimentet og plassert i thioglycollate-buljongen. Inkuber ved 35 ° C i 24 timer. Hvis det i denne tiden ikke er noen vekst (turbiditet), inkuberes den opp til maksimalt 7 dager.

Hvis prøven blir tatt med en vattpinne, blir kulturmediet først inokulert i plater, og til slutt ført vattpinnen inn i buljongen, den fremspringende delen deles og røret blir lukket, slik at vattpinnen blir liggende inne. Inkuber ved 35 ° C i 24 timer, maksimalt 7 dager.

For faste prøver, homogeniseres i fysiologisk saltløsning (SSF) og inokuler deretter thioglycollat-buljongen med 2 dråper suspensjon.

Det kan noen ganger brukes som et transportmedium for prøver der det er mistanke om strenge anaerober eller som en berikingsbuljong.

Thioglycollate-buljongvarianten med kalsiumkarbonat brukes til å opprettholde kontrollstammer over lengre tid, fordi den har muligheten til å nøytralisere syrene som produseres ved bruk av glukose; Disse syrene er giftige for visse bakterier.

Vekst i tioglykollatbuljong vil bli observert av turbiditeten til mediet. Det anbefales å utføre en Gram-flekk og deretter subkultur i ikke-selektive og selektive medier, avhengig av prøvetype og de mistenkte mikroorganismer.

QA

For sterilitetskontroll anbefales det å inkubere en eller to buljonger uten inokulering. Det forventede resultatet er en klar buljong uten fargeendring, selv om det er normalt å se en svak rosa farge på overflaten av røret.

For kvalitetskontroll bør mellom 10 - 100 CFU av sertifiserte kontrollstammer inokuleres, som Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCCes 19404 Bacteroides vulgatus ATCC 8482.

Inkuber ved 30-35 ° C i aerobiose i 24 timer opp til maksimalt 3 dager, siden disse mikroorganismene vokser raskt.

Det forventes god utvikling i alle tilfeller, bortsett fra Micrococcus luteus og Bacillus subtilis, der det kan være moderat utvikling.

For kvalitetskontroll av tioglykollatbuljong beriket med hemin og vitamin K ₁ , kan kontrollstammene Bacteroides vulgatus ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 og Bacteroides fragilis ATCC 25285 brukes. Det forventede resultatet er tilfredsstillende vekst.

anbefalinger

-Andre kan det observeres at overflaten av tioglykollatbuljongen med indikator blir lyserosa; Dette skyldes oksidasjon av mediet. Hvis den rosa fargen dekker 30% eller mer av den totale buljongen, kan den varmes opp i vannbad i 5 minutter, avkjøles igjen og brukes.

Dette vil fjerne det absorberte oksygenet og gi mediet tilbake til sin opprinnelige farge. Denne prosedyren kan bare gjøres en gang.

-Kubber med lokket litt løs for å forbedre veksten av aerobe bakterier. Imidlertid er det foretrukket å bruke for dette formålet en infusjonsbuljong i hjernen eller tryptikase soyabuljong for riktig utvikling av strenge aerobes.

-Frysing av mediet eller overoppheting bør unngås, da begge forhold skader mediet.

-Direkte lys skader kulturmediet, det må lagres beskyttet mot lys.

referanser

1. Britannia Laboratories. Thioglycollate USP med indikator. 2015. Tilgjengelig på: labBritania.com.
2. Chios Sas Laboratories. 2019. Thioglycollate buljong. Tilgjengelig på: quios.com.co
3. Laboratories BD Fluid Thioglycollate Medium (FTM). 2003. Tilgjengelig på: bd.com/Europe
4. BBL-medier tilberedt i rør for dyrking av anaerobe mikroorganismer. Thioglycollate media. 2013. Tilgjengelig på: bd.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 utg. Redaksjonell Panamericana SA Argentina.