KOAGULASETEST: BEGRUNNELSE, PROSEDYRE OG BRUK - BIOLOGI - 2026

Den koagulase-testen er en laboratorieteknikk som brukes for å avsløre tilstedeværelsen av enzymet koagulase. Dette enzymet har egenskapen å koagulere plasma. Loeb i 1903 var den første som beskrev dette enzymet.

Denne testen blir utført på Gram-positive, katalasepositive kokker, og gjør det mulig å skille Staphylococcus aureus-stammene fra resten av stafylokokkene, siden det er den eneste mikroorganismen av klinisk betydning som produserer den.

Begge bildene avslører en positiv koagulasetest. Kilde: Venstre bilde: Philippinjl. Høyre bilde: Bilde tatt av forfatteren MSc. Marielsa Gil.

I denne forstand blir medlemmer av Staphylococaceae-familien som tester negative ofte referert til som koagulase-negative Staphylococcus.

Det er noen andre stammer enn S. aureus som kan produsere koagulase, for eksempel Staphylococcus schleiferi spp coagulans, S. hyicus, S. intermedius og S. delphini.

Imidlertid er de tre første av klinisk betydning på veterinærnivå og kunne svært sjelden bli funnet som et årsaksmiddel for infeksjoner hos mennesker, mens S. delphini bare finnes i marine miljøer.

Videre er de lett differensiert fordi S. hyicus og S. intermedius ikke gjærer mannitol og S. schleiferi spp coagulans ikke gjærer maltose eller trehalose, mens S. aureus gjærer disse karbohydratene.

Tilstedeværelsen av koagulase-enzymet har blitt koblet til virulensen av stammen. Imidlertid har denne teorien falt fra hverandre, da andre virulente koagulase-negative arter som er i stand til å produsere betydelige infeksjoner, blir observert.

Basis

Tolkning

Agglutinasjon innen 5-20 sek (sterk positiv test).

Variabel agglutinering som skjer mellom 20 sekunder og ett minutt (forsinket positiv test).

Noe grad av agglutinasjon etter ett minutt (tvilsomt bevis). Det anbefales å gjenta testen eller bekrefte med rørmetoden.

Det er ingen agglutinering (negativ test).

Resultat med SSF. Det må alltid gi negativt, hvis det gir positivt automatisk blir testresultatet ugyldig.

-Tube koagulasetest

materialer

-Sterilt prøverør

Plasma

-Bath of Mary ved 37 ° C

Teknikk

Pipetter 0,5 ml plasma i et 12 x 75 reagensglass med en steril pipette. Legg platineløkken i med 2 til 4 rene kolonier for å studere fra en fast kultur i 18 til 24 timer og oppløses i plasma bland og inkuber forsiktig ved 37 ° C i 4 timer.

Undersøk røret den første timen uten å riste, bare vipp det forsiktig. Hvis en koagulering fortsatt ikke sees, kan den fortsette å bli observert hvert 30. minutt til de 4 timene er fullført. Hvis det fortsatt er negativt etter 4 timer, kan det stå i opptil 24 timer, men ved romtemperatur. Observer og rapporter resultatet.

Basert på erfaring, anbefaler noen mikrobiologer å bruke 500 ul av en bakteriesuspensjon fra en 18-timers kultur i flytende medium for å utføre testen.

Det ser ut til å gi raskere og mer pålitelige resultater enn når emulgerende kolonier fra faste medier, spesielt hvis humant plasma oppnådd fra blodbanken har blitt brukt.

Bruken av stammer fra en buljong bidrar til å fortynne den mulige tilstedeværelsen av humane anti-stafylokokker antistoffer i plasma som kan hemme virkningen av koagulase.

Tolkning

Hvis det sees en koagulasjon som omfatter alt væsken (fullstendig koagulering) eller koagulasjon uten noe i den gjenværende væsken (delvis koagulering), bør det betraktes som en positiv test.

Hvis ingen koagulater dannes, det vil si at suspensjonen forblir homogen, er testen negativ.

-Coagulase test ved bruk av fibrinogen

Fibrinogen brukes på samme måte som plasma og brukes til både glide- og rørprøver. Fortsett som beskrevet for plasma og tolke på samme måte.

Bruk

Det brukes til å skille Staphylococcus aureus fra koagulase-negative stafylokokker.

QA

Ha friske kulturer av en S. aureus-stamme tilgjengelig som kan brukes som en positiv kontroll. En S. epidermidis-stamme er også tilgjengelig som en negativ kontroll.

begrensninger

-En positiv test bør ikke etterlates i inkubasjon i 24 timer, siden S. aureus produserer et fibrinolysin som løser blodproppen.

-For en pålitelig test, bør fersk eller nykonstituert plasma brukes, i tillegg til at det er viktig å bruke ferske bakteriekulturer (18 til 24 timer). Dette unngår falske negativer.

-Testen må utføres sammen med en negativ og en positiv kontroll.

-Noen faste medier kan forstyrre koagulasetesten. Det anbefales ikke å bruke kolonier fra salt mannitol-agar.

-Hvis sitrert plasma brukes, anbefales det å plassere 5 enheter heparin per ml plasma for å unngå falske positiver. Dette er fordi noen andre mikroorganismer enn S. aureus kan bryte ned sitrat og føre til at plasmaet koagulerer. I dette tilfellet er det tilrådelig å gjøre en Gram- og en katalasetest.

-Det er viktig, i rørprøven, å overvåke reaksjonen hvert 30. minutt, siden det er stammer av S. aureus som produserer høye konsentrasjoner av fibrinolysin og vil fortynne den nydannede blodproppen raskt. Unngå falske negativer.

-Når du overvåker testen, unngå å riste brått, kan dette ødelegge begynnelsen på koagulasjonsdannelsen som ikke vil bli gjenopprettet senere, og forårsake falske negativer.

referanser

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. utg. Redaksjonell Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 utg. Redaksjonell Panamericana SA Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Biokjemiske tester for identifisering av bakterier av klinisk betydning. 3. utg. Redaksjonell Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
4. Pro-Lab Laboratories. Kanin koagulerer plasma. Tilgjengelig på: pro-lab.com
5. "Koagulasepositive." Wikipedia, The Free Encyclopedia. 12 feb 2019, 04:23 UTC. 22. april 2019, 15:50 wikipedia.org.