XANTHOPROTEIN-REAKSJON: BEGRUNNELSE, PROSEDYRE, BRUK - KJEMI - 2026

Den xanthoprotein reaksjon er en kjemisk fremgangsmåte som brukes til å bestemme nærvær eller fravær av aromatiske aminosyrer, slik som tyrosin og tryptofan, som kan være i fri form eller utgjør løselige proteiner, peptider eller polypeptider.

Det har også blitt brukt til å oppdage giftige stoffer i blodet som inneholder en benzengruppe i strukturen. Denne testen er også kjent som xantoprotein Becher-reaksjonen.

Positiv xantroproteinreaksjon Kilde: Hentet fra videoen: https://youtu.be/GzGMbw5w4Wo

Xanthoprotein-reaksjonen bruker konsentrert salpetersyre, varme og et nøytraliserende alkali. Hvis løsningen blir fra gul til oransje etter nøytralisering av reaksjonen, anses testen som positiv. Den observerte fargen skyldes dannelsen av nitrogenholdige forbindelser avledet fra nitrifikasjonen av benzengrupper.

Hvis mengden av totalt protein må kvantifiseres, er det nødvendig å bruke andre proteinbestemmelsesmetoder, for eksempel Biuret.

Xanthoprotein-reaksjonen brukes hovedsakelig når stoffer blir analysert hvis kjemiske sammensetning ikke er kjent. Denne reaksjonen er vanligvis en del av et sett med tester som vil bidra til å bestemme den kjemiske sammensetningen av et bestemt stoff eller ekstrakt. Derfor er det mye brukt av forskere.

På den annen side brukes Becher xanthoprotein-reaksjon for å oppdage fenol- og indolstoffer i blodet, noe som gjør det mulig å forutsi utseendet til nefropati, før andre senere parametere økes.

Basis

Reaksjonen oppdager i utgangspunktet tilstedeværelsen av benzengruppen, både i aminosyrer, så vel som i proteiner og peptider. Salpetersyre virker på benzenringen til aminosyrer som har den, og danner fenoliske nitroforbindelser.

Reaksjonen trenger varme for å bli utført, generelt dannes det et bunnfall som skyer mediet, og gjør det melkeaktig. Bunnfallet kan være hvitt eller gult. Til slutt krever det et alkaliseringstrinn som fremhever fargen. For dette brukes en base slik som 40% natriumhydroksyd eller ammoniakk.

Reaksjonen vil bli tolket som positiv hvis en sterk gul farge blir observert under oppvarmingsprosessen eller mørk oransje når reaksjonen blir alkalisert. Aminosyrene som den oppdager er hovedsakelig tyrosin og tryptofan.

Xanthoprotein-reaksjon. Kilde: http://esteroisomeras.blogspot.com/2013/06/caracterizacion-de-proteinas.html

For fenylalanin, selv om det er en aromatisk aminosyre, er benzenkjernen til denne aminosyren vanskelig å nitreres i en enkel reaksjon, og derfor vil den avgi enten en negativ eller svak positiv reaksjon.

Generelt kan xantoproteintesten suppleres med Hopkins-Cole-testen, som brukes til spesifikt å identifisere tryptofan. Hvis xantoproteintesten er positiv og Hopkins-Cole-testen er negativ, utelukkes tilstedeværelsen av tryptofan i den løsningen, noe som peker på tilstedeværelsen av tyrosin. På samme måte kan den også kompletteres med Millon-reaksjonen for blant annet deteksjon av tyrosin.

Denne reaksjonen kan også brukes på prøver av blod, plasma eller desalbuminert serum for diagnostisering av uremi eller nyresvikt. I dette tilfellet er det som etterspørres deteksjon av giftige stoffer (fenol og indol) produsert fra tarmens nedbrytning.

Disse stoffene har benzengruppen og gir derfor en positiv xantoproteinreaksjon, selv om det reagerende stoffet verken er en aminosyre eller et protein.

Prosess

- Xanthoprotein-reaksjon for påvisning av aminosyrer med aromatiske grupper

Plasser 1 ml av prøven i et rent, tørt reagensglass.

-Tilsett 0,5 ml konsentrert salpetersyre.

-Kubber blandingen i et vannbad ved 70 ° C i 2 minutter. Tilbered tidligere vannbadet ved den nevnte temperaturen.

-Når du fjerner røret fra vannbadet, er det mulig å se at løsningen har blitt melkeaktig og har fått en viss gulahvit farge.

-Løsningen avkjøles ved å slippe kaldt vann ved bunnen av røret.

-Preparatet gjøres alkalisk ved sakte å tilsette (dråpe for dråpe) en 40% natriumhydroksydoppløsning til det er en endring i farge.

-Hvis testen er positiv, vil det danne seg en mørk oransje ring ved grensesnittet til væskene.

-Hvis reaksjonen er negativ, vil det ikke være noen fargedannelse.

- Xanthoprotein-reaksjon for å oppdage fenol- og indolstoffer i blodet

-Dispens 5 ml 20% trikloreddiksyre på 5 cm venøst ​​blod, plasma eller serum, hvor sistnevnte er det mest indikerte. Bland godt og filtrer.

-Ta 2 ml av filtratet og bland det med 0,5 ml salpetersyre. Deretter varmes den opp til koking, for dette plasseres røret direkte over den lysere flammen i 30 sekunder. Den avkjøles med vann og 1,5 av 33% natriumklorid tilsettes.

Det tolkes slik:

-Negativt resultat: gulaktig farge.

-Positivt (+) sitrongult resultat.

- (++) gylden gul.

- (+++) mørk gul til brun

Det kan også tolkes ved å bruke en referenserende autenrieth kolorimetrisk skala, bestående av forskjellige konsentrasjoner av kaliumdikromat. Dette blir fremstilt i 10 i 10 fortynninger fra en 0,03874% stamoppløsning. Hvert rør representerer en prosentandel.

Tolkningsskala

Det er to tolkningsskalaer som kalles eldgamle og moderne. De normale verdiene er:

Gammelt bord: mellom 75 og 85%

Moderne bord: mellom 15 til 25%

Hvis fargen på prøverøret er i midten av to standardrør, blir det gjort et gjennomsnitt mellom de to målingene.

Kaliumdikromatstandardoppløsningen fremstilles som følger: 7,9 ml 10 N kaliumdikromat måles og fylles opp til 100 ml i en volumetrisk kolbe. Fortynningene følges som vist i Autenrieth kolorimetriske tabell.

Autenrieth kolorimetrisk bord. Kilde: Vásquez A. Xanthoprotein-reaksjon. Spansk klinisk journal. 1949; 35 (5): 326-327. Tilgjengelig på: Elsevier

Bruk

Bruken av xantoproteinreaksjonen er en del av et sett med biokjemiske tester som hjelper deg med å kjenne den kjemiske sammensetningen til et ukjent stoff. Denne testen bidrar til den kjemiske analysen deteksjon av proteiner som inneholder benzengrupper i deres struktur.

Denne reaksjonen er mye brukt av forskere i forskjellige studier av stoffer av interesse.

I denne forstand brukte Vásquez-Jorge og samarbeidspartnere denne og andre reaksjoner for å undersøke proteininnholdet i væsker ekstrahert fra mangroveoksen (Crassostrea rhizophorae).

På samme måte brukte Rojas et al. (2009) en serie tester, inkludert xantoproteinreaksjonen, for å analysere glycomacropeptides i ricotta whey presipitater.

På den annen side ble Becher xantoproteinreaksjon modifisert av Volhard for å bli brukt til andre formål. I dette tilfellet for påvisning av fenol- og indolstoffer som kan stige mye tidligere (uker eller måneder) før nivåene av urea og gjenværende nitrogen i blodet øker.

Dette giftige avfallet dannes fra tarmens nedbrytning av mat.

Disse stoffene akkumuleres i blodet når de ikke elimineres riktig, derfor kan en positiv xantoproteintest forutsi tidlig begynnelse av riktig nyresvikt eller en tilstand av uremi.

Avhengig av intensiteten på fargen, kan du bestemme hvor avansert den er. I dette tilfellet er testen kvantitativ.

Hos friske mennesker gir denne testen en svak gul farge, tilsvarende de normale nivåene av tryptofan og tyrosin som kan være i blodet.

Hos nyrespasienter er xanthoprotein-reaksjonen sterkt positiv på grunn av tilstedeværelsen av følgende stoffer: fenol, indol, paracresol, aromatiske oksysyrer, blant andre.

Forholdsregler

Denne testen må utføres av trente fagfolk. Alle biosikkerhetsforskrifter må tas i betraktning, da reagensene som brukes er etsende syrer og baser.

Hvis det tilfeldigvis faller noen dråper salpetersyre på huden eller på neglene, blir de gule, siden begge strukturer inneholder proteiner. I tillegg forårsaker det hud og slimhinner alvorlige forbrenninger.

Hvis det oppstår hudkontakt, bør protokollen som følger, være å vaske området umiddelbart med såpe og vann i omtrent 20 minutter.

Hvis det spruter i øynene, bør det vaskes med mye ferskvann, og prøv å holde øynene åpne.

referanser

1. "Xanthoprotein reaksjon" Wikipedia, The Free Encyclopedia. 2. september 2019, 17:49 UTC. 21. oktober 2019, 20:31 wikipedia.org/
2. Vásquez-Jorge Y, Guerra-Molina L, Quintana-Tamayo J, Ramírez-Arzuaga J, Fernando-Ballesteros R, Vásquez-Jorge Y. Fysisk-kjemisk karakterisering og proteininnhold i væskeekstrakter av mangroveøsters (Crassostrea rhizophorae). Rev Cubana de Química, 2014; 26 (1): 66-74. Tilgjengelig i Redalyc.
3. Rojas E, Valbuena E, Torres G, García A, Piñero M, Galindo L. Isolering og ytelse av GMP ved utfelling av myse med trikloreddiksyre. Ektiv. (Maracaibo) 2009; 19 (3): 295-302. Tilgjengelig på: ve.scielo.
4. Vásquez A. Xanthoprotein-reaksjon. Spansk klinisk journal. 1949; 35 (5): 326-327. Tilgjengelig på: Elsevier
5. Gálvez I, Gárate O. Becher og Andrewes reaksjoner i urinoperasjoner. Urologitjeneste ved det spanske sykehuset. Argentinsk tidsskrift for urologi 395-404