HEMATOKSYLIN-EOSINFARGING: EGENSKAPER, BRUK, TEKNIKKER - KJEMI - 2026

Den hematoxylin - eosin er et farveteknikk ved å bruke en kombinasjon av fargestoffer hematoxylin og eosin. Dette parfargestoffene er en perfekt duo, da hematoksylin fungerer som et grunnleggende fargestoff og eosin er et surt fargestoff.

Betegnelsen på basiske fargestoffer eller syrefargestoffer refererer ikke til pH oppnådd i oppløsning, men snakker snarere om den rådende andel når det gjelder de anioniske eller kationiske ladningene de har eller av plasseringen av kromoforegruppen.

Hematoxylin - eosin (HE) farget ciliated columnar epitel Kilde: Todd Straus og Vladimir Osipov

I denne forstand regnes hematoksylin som et grunnleggende (kationisk) fargestoff og har derfor en affinitet for syrestrukturer, for eksempel kjernen i celler. Mens eosin, som et surt (anionisk) fargestoff, har en affinitet for alkaliske eller basiske strukturer, for eksempel celleplante.

Av denne grunn er denne kombinasjonen av fargestoffer mye brukt for vevsfarging, ettersom den gjør det mulig å skille kjerner og cytoplasmer tydelig. Kjernene flekker mørk blå eller lilla og cytoplasma rosa.

Hematoksylin-eosinfarging er en av de mest brukte fargeteknikkene innen histologi og cytologi på grunn av enkel håndtering og lave kostnader. Det brukes til å visualisere celler, tykke nervefibre og tilstedeværelsen av visse mikroorganismer i vev, for eksempel: parasitter, sopp og bakterier, blant andre.

kjennetegn

hematoxylin

Hematoksylin er et nøytralt fargestoff. Imidlertid er komponenten som gir fargen (kromofor) lokalisert i molekylets kationiske eller basiske sentrum. Derav sin tilknytning til sure strukturer. Den kjemiske formel er C ₁₆ H ₁₄ O ₆ og dens vitenskapelige navn er 7,11b-dihydrogenindeno kromen-3, 4,6a, 9,10 (6 H) -pentol.

Det flekker hovedsakelig kjernen i celler, siden de er veldig rike på nukleinsyrer. Det kan også flekker cytoplasmatiske inneslutninger av viral opprinnelse.

For at hematoksylin skal farge, må det være i oksidert tilstand og bundet til et metall. Det siste vil tjene til å fiksere til vevet, det vil si at det vil fungere som en mordant.

Når hematoksylin oksideres, kalles det hematein. Oksidasjon oppnås ved eksponering for oksygen (aldring) av reagenset eller av stoffer som hjelper oksydasjon (kjemisk oksidasjon).

eosin

Eosin er et fargestoff som farger rødt eller rosa. Det er uoppløselig i vann, selv om det er en vannløselig versjon. Generelt fremstilles eosin ved å oppløse i alkohol (95 ° etanol).

Det flekker cytoplasmer, muskelfibre, cytoplasmatiske organeller og kollagen, men flekker ikke cellekjerner. Dette er fordi det er negativt ladet, derfor har det en tilhørighet til positivt ladede strukturer.

Det er to typer eosin "Y" og "B". Eosin "Y" er kjent som gult eosin. Det vitenskapelige navnet er tetrabromo-fluorescein og den kjemiske formelen er C ₂₀ H ₈ Br ₄ O ₅ .

På den annen side kalles eosin "B" noen ganger blålig erytrosin B. Dets vitenskapelige navn er dibromodynitro-fluorescein og formelen er C ₂₀ H ₈ Br ₂ N ₂ O ₉ . Begge er veldig like, og forskjellen mellom å bruke den ene eller den andre er ikke virkelig merkbar. Imidlertid er den mest populære eosin "Y".

Eosin har egenskapen å skille mellom en levende og en død celle, da den bare er i stand til å krysse membranen for å flekker dens cytoplasma når celler er døde, og etterlater cytoplasmaet til cellen fargeløs hvis den forblir i live.

applikasjoner

Nervefiberfarging

Tykke nervefibre kan farges og identifiseres med hematoxylin-eosin. Det er imidlertid ikke nyttig for farging av tynne nervefibre, siden en sølvfarging er nødvendig for å visualisere sistnevnte.

Histologiske flekker i hudsnittet

Ved farging av det kåte laget av huden er fargestoffet som virker eosin, siden cellene på dette nivået ikke har en kjerne.

I det granulære laget av huden flekker hematoksylin sterkt keratohyalinkornene i granulatcellene. Tvert imot, det spinøse laget av huden er svakt beiset med hematoxylin, mens basal- eller germinallaget er ganske beiset.

Eosin farger cytoplasmaet til alle celler, og fargenes intensitet kan variere fra lag til lag.

Hematoksylin-eosinfarging av avføringsprøver

Gómez et al., I 2005 demonstrerte at hematoksylin-eosinfarging var mer effektivt når det gjaldt å identifisere amøbiasis på grunn av Entamoeba histolytica og Entamoeba dispar enn den ferske visualiseringsmetoden (saltvann og lugol) hos pasienter med akutt diaré sykdom.

Det har også vist seg å være svært følsom når det gjelder ereksjon av erytrofagocytose (amøber som har oppslukt erytrocytter).

Farging av histologiske seksjoner for diagnostisering av infeksjon

Walwyn et al., Foreslo i 2004 bruk av histologiske flekker for å oppdage infeksjonsfremkallende mikroorganismer.

Ved hjelp av hematoksylin-eosinfarging var de i stand til å visualisere infeksjoner forårsaket av Clostridium, Actinomyces, spirillae eller Candida. De var også i stand til å observere tilstedeværelsen av parasitten Sarcoptes escabiei i hudseksjoner og virale inneslutninger av cytomegalovirus og herpes i seksjoner av forskjellige vev.

teknikker

For histologiske prøver

Histologisk seksjonsfarging gjennomgår en serie trinn. Den første tingen er å få tak i den histologiske delen. Dette må vokses for senere å oppnå kuttene (ultrafint) med et mikrotom. Teknikken består av følgende trinn:

1-eliminering av overflødig parafin : for dette kan du bruke xylol eller Heme-D, senke i 3-5 minutter.

2-Rehydrering av prøven: dette oppnås ved å senke prøven i forskjellige konsentrasjoner av alkoholer (etanol) i synkende rekkefølge (100 °, 90 °, 70 °). I alle tilfeller i 7 minutter.

3-eliminering av overflødig alkohol: for dette er den nedsenket i vann i 7 minutter.

4-farging med hematoksylin: prøven senkes i 6-10 minutter i et brett som inneholder hematoksylin. Eksponeringstiden avhenger av størrelsen og tykkelsen på prøven.

5-eliminering av overflødig hematoksylin: det vaskes med vann i 5 minutter og deretter gjennomføres en rask passering (10-20 sekunder) gjennom sur alkohol. Senere vaskes det med vann igjen i 5 minutter. Deretter senkes den i etanol ved 96 ° i 1 minutt.

6-farging med eosin: for dette senkes prøven i 5 minutter i eosinbrettet.

7-Dehydrering av prøven : for å gjøre dette, går den gjennom alkoholbrettene (etanol), men denne gangen i stigende rekkefølge. (70 °, 90 °, 100 °). (I henholdsvis 5 sekunder, 5 sekunder, 1 minutt).

8-Avklaring av prøven : for dette blir den utsatt for xylol i 5-10 minutter og tørket for å forsegle permanent med Canada balsam eller annet lignende materiale.

For avføringsprøver på jakt etter

Det smøres på et lysbilde med pasientens avføring og fikses med 80% alkohol i 5 minutter. Arket nedsenkes i hematoksylin i 5 minutter og vaskes umiddelbart med vann.

Deretter blir den raskt nedsenket i sur alkohol og deretter i ammoniakkvann. Det vaskes med vann. Den er farget i 5 minutter i eosin. Prøven dehydratiseres som forklart i kjent teknikk og skylles til slutt med xylen.

Fremstilling av reagenser

- Hematoksylin

I en liter destillert vann løses opp 50 gram kalium eller ammoniumaluminiumsulfat. Når du er helt oppløst, tilsett 1 gram krystallisert hematoksylin. Ved fullstendig oppløsning tilsettes 1 g sitronsyre sammen med 50 g klorhydrat og 0,2 g natriumjodat.

Blandingen blir kokt i 5 minutter, deretter avkjølt og filtrert for å fjerne eventuelle faste partikler som har blitt igjen. Det således fremstilte reagenset kan brukes umiddelbart.

- Eosin

Det kan tilberedes med en alkoholholdig base eller med en vannbase.

Alkoholisk eosin

I 100 ml etanol ved 95 ° oppløses 0,5 gram eosin "Y". Tilsett så noen dråper iseddik.

2% vandig eosin

I 1250 ml destillert vann løses opp 25 gram vannløselig eosin "Y". Tilsett så noen dråper iseddik.

Syreholdig alkohol

Mål 0,5 ml konsentrert saltsyre og fyll opp til 100 ml med absolutt alkohol.

Ammoniakkvann

Mål 0,5 ml konsentrert ammoniakk og fyll opp til 100 ml med destillert vann.

referanser

1. Navarrete, G. Histologi i huden. Rev Fac Med UNAM 2003; 46 (4): 130-133. Tilgjengelig på: medigraphic.com
2. Gómez-Rivera N, Molina A, García M, Castillo J, Castillo J, García R, Fonseca I, Valenzuela O.
3. Identifikasjon av Entamoeba histolytica / E. Dispar med den ferske amebeteknikken vs dets farging med hematoksylin-eosin i akutt diaré. Rev Mex Pediatr 2005; 72 (3); 109-112. Tilgjengelig på: medigraphic.com
4. Walwyn V, Iglesias M, Almarales M, Acosta N, Mera A, Cabrejas M. Nytten av histologiske teknikker for diagnostisering av infeksjon i anatomiske prøver. Rev Cub Med Mil, 2004; 33 (2). Tilgjengelig på: scielo.sld
5. PanReac AppliChem ITW-reagenser. Hematoxylin-eosin flekk. 2017, Spania. Tilgjengelig på: itwreagents.com
6. Eosin. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 7. nov 2018, 08:18 UTC. 4. august 2019, 22:13 en.wikipedia.org
7. "Hematoxylin." Wikipedia, The Free Encyclopedia. 3 mai 2019, 11:23 UTC. 4. august 2019, 22:48 wikipedia.org