BLODUTSTRYKING: KJENNETEGN, TYPER, TEKNIKKER OG HISTOLOGI - BIOLOGI - 2025

Den blodutstryk er et utstryk av perifert blod som brukes til å analysere komponentene i blodsirkulasjonen. Observasjonen av en blodutstryking gir hematologiske data som er veldig nyttige for diagnose og oppfølging av mange patologier.

Blodutstryningen gjør det mulig å kvantifisere antall forskjellige typer hvite blodlegemer (leukocyttformel), samt tillater analyse av morfologien og formen til erytrocytter, leukocytter og blodplater.

Forberedelse av blodutstryningen. Kilde: Blod i et laboratoriumglass. Public DomainPictures.net

I den kan abnormiteter i antall celler oppdages, for eksempel: leukocytose eller leukopenier, lymfocytose eller lymfopeni, nøytrofili eller neutropeni, trombocytose eller trombocytopenier og eosinofili. Cellestørrelse og form abnormiteter kan også sees.

I tillegg er det mulig å oppdage forskjellige typer anemier, leukemier og bakterie- eller blodparasittinfeksjoner.

For dette er det forskjellige typer utstryk som utføres avhengig av formålet med studien. Det er tynt utstryk og tykt utstryk. Disse smørene er forskjellige i utførelsesteknikk og studiens formål.

De med fine dråper brukes som et supplement til fullstendig hematologi. Dette gir data om leukocyttformelen, i tillegg til analysen av formen og morfologien til de tre celleseriene som utgjør blodet: rød serie, hvite serier og blodplater. Selv om de også fungerer som et supplement til studien av tykk blodfilm.

Den tykke filmen brukes til diagnostisering av sykdommer forårsaket av hemoparasitter, som malaria eller malaria, toxoplasmosis, leishmaniasis, Chagas sykdom, babesiose og mikrofilariasis.

Kjennetegn på en blodutstryking

En god blodutstryking må oppfylle visse egenskaper. Blant dem kan vi nevne:

-Prøven må oppfylle minimumskravene for kvalitet for å være representative.

- Prøvetakingen må utføres godt.

-Gjennomføring av smøringen.

-Hvis det er utført med venøst ​​blod, bruk en antikoagulant som ikke deformerer cellene og bland røret før du smører.

-Hvis det gjøres med kapillærblod, kast den første dråpen.

-Spredningen må være homogen. Dette sikrer at cellene er jevnt fordelt og at blodcellene kan analyseres for form og antall.

-Sidene på utstrykningen skal være glatte fra begynnelse til slutt.

-Smøret må respektere en margin på 1 til 2 mm til sidene av lysbildet.

-Smurtlaget skal gradvis avta i tykkelse fra begynnelse til slutt (smøre med et fint fall etter glidemetoden).

-Det må være riktig merket for å unngå forveksling av prøver.

-Fikser og beis ordentlig for tydelig observasjon av blodelementer.

-La smøret tørke veldig godt før du monterer preparatet under mikroskopet. Å plassere fordypningsolje på en våt smøre vil føre til dannelse av miceller som forhindrer at cellene blir sett.

Typer blodsmør

Perifert blodutstryk kan klassifiseres til tynt utstryk og tykt utstryk. De med et tynt lag brukes til undersøkelse av leukocyttformelen og morfologisk observasjon av blodceller. Ekstracellulære bakterier som borrelia og intracellulære hemoparasitter, som for eksempel plasmodium, kan også sees.

I den fine klatt kan parasittenes arter identifiseres, derfor er det en mer spesifikk teknikk enn den tykke klisen, men den tykke klisen er mer følsom, siden det er en konsentrasjonsteknikk som brukes til uttømmende leting etter ekstracellulære hemoparasitter.

Det er to typer fine-drop smears: de som blir utført på lysbilder og de som blir utført på dekkglass. De tykke utstrykene utføres på lysbilder.

Teknikker for å ta blodprøver

Blodutstryk kan lages fra en kapillærpunksjon eller en venøs prøve tatt med antikoagulant. Hvis det utføres fra blod med antikoagulant, kan utstrykningen tilberedes inntil 2 timer etter at prøven er tatt.

Forsiktighet bør utvises ved bruk av antikoagulantia som ikke deformerer blodceller. Det beste alternativet er EDTA. Tvert imot, bruk av antikoagulantia som trinatriumcitrat bør unngås.

Hvis prøven tas med kapillær punktering, bør smøret forlenges umiddelbart, før blodet koagulerer.

Den første dråpen bør kastes, slik at den neste dråpen kan slippe ut spontant for å unngå fortynning av prøven med vevsvæske. Det er den mest anbefalte teknikken for observasjon av cellemorfologi, siden blodet ikke har noen tilsetningsstoffer.

For observasjon av hemoparasitter, konkluderte Solari et al. I forskningsarbeidet med at begge teknikkene (venipunktur og kapillær) er like effektive.

Typer blodprøvetaking: A. Kapillær punktering. B. Venøs punktering. Kilde: A. Flickr.com B. Pxhere.com

Teknikker for å klargjøre blodutstryningen

Blodutstrykningen kan utføres manuelt på mikroskopsklier eller på dekkglass eller lysbilde. Det er også mulig gjennom automatisert utstyr.

-Slides smører

Det er teknikken som de fleste laboratorier foretrekker på grunn av den enkle håndteringen.

Bruk en Pasteur-pipette, plasser en ikke veldig tykk eller veldig fin bloddråpe i midten av den ene enden av et rent mikroskopskred.

Smøret lages ved hjelp av et annet lysbilde med en bakkeende. Det markerte glassglidet er plassert vinkelrett på den motsatte enden av der dråpen befinner seg.

Den vipper i en vinkel mellom 30 - 45 ° og glir mot dråpen; Når den berøres, utvides den lineært over kanten av bakkeskjermen og med en konstant og definert bevegelse kommer arket tilbake; før du når slutten løftes lysbildet.

På denne måten blir et homogent lag spredt over overflaten av mottaksgliden.

Smøret får tørke. Den blir deretter fikset og farget med den foretrukne flekken. La det tørke godt før du ser det under mikroskopet. En dråpe olje blir plassert på ansiktet som viser smøringen og observert under et lysmikroskop.

Blodsmøring på lysbildet. Toppbilde: usminket smøre. Nedre bilde: flekkete flekker. Kilde: Coinmac

Deler av utstryking laget på lysbilder

I denne typen utstryk kan tre definerte områder skilles: hodet, kroppen og halen. Hodet tilsvarer området der smøret starter, det er det tykkeste området og det er ikke bra å observere.

Kroppen er den sentrale eller mellomliggende delen av smøret, det er det beste området å observere under mikroskop, fordi der er cellene jevnt fordelt og deres morfologi er bevart.

Halen tilsvarer den siste delen av smøret; her er distribusjonen ikke lenger ensartet og erytrocytmorfologien har en tendens til å gå tapt.

Kvalitetskontroll i lysbildeteknikken

I denne teknikken spiller det en grunnleggende rolle:

-Rengjøring og avfetting av lysbildet: det garanterer god glidning av prøven.

-Størrelsen på dråpen: med veldig store dråper oppnås en tykkere og lengre smøre, med en veldig liten dråpe blir spredningen kortere og ekstremt fin.

-Hastigheten som brukes i forlengelsen: jo lavere hastighet smøret blir tynnere, jo høyere hastighet vil det være tykkere.

-Gjennomføringsvinkelen: jo mindre vinkelen er, jo finere smøre, jo større er vinkelen.

-Trykk på coverslip

Det er ikke mye brukt fordi håndteringen av skjøre dekkglass er tungvint, men det gir store fordeler, siden en bedre fordeling av celler oppnås gjennom smøringen.

En ikke veldig tykk, ikke veldig fin dråpe plasseres i midten av en dekkglass. Umiddelbart plasseres et annet dekkglass på toppen av dette på en slik måte at spissene til begge dekkglassene stikker ut og danner en stjerne.

Dråpen spres spontant over overflaten på begge dekkglassene. På slutten av forlengelsen skyves hvert lysbilde raskt til motsatt side av hverandre (den ene til høyre og den andre til venstre).

Teknikken gir to utstryk i stedet for en.

De legges til tørk med spredningssiden opp. Når den er tørr, er den fikset og beiset med den valgte teknikken. La det tørke. En dråpe nedsenkingolje blir plassert på et lysbilde, smøret blir plassert med smøresiden ned og sett under et mikroskop.

Kvalitetskontroll i coverslip-teknikken

For å få et godt utstryk for denne teknikken er det viktig å:

-Rengjør dekkglassene (hjelper prøven med å gli glatt).

-Størrelsen på dråpen (påvirker smørets tykkelse).

-Hastigheten som dekkglassene er atskilt med (påvirker homogeniteten til spredningen).

-Med automatisert utstyr

De kan gjøres gjennom et av disse lagene: Spinner og Autoslide.

Spinner består av å plassere et lysbilde med en dråpe blod på en spesiell sentrifugeplate. Prøven sentrifugeres med høye hastigheter; på denne måten dannes en homogen og fin utstryking av prøven. Det har ulempen med muligheten for hemolyse av prøven.

Autoslide er et instrument som mekanisk utfører bevegelsene for utførelse av smøre på lysbilder. Du kan også fikse og flekker utstrykningen. Det kan til og med tilpasses noen automatiske hematologiteller.

Tykk smear teknikk

For å søke etter hemoparasitter anbefales to utstryk: en med en fin dråpe og en med en tykk dråpe.

Utfør en kapillærpunksjon, rengjør den første dråpen. Plasser en fin dråpe på et lysbilde og smør som tidligere forklart. For den tykke perlen må du plassere en stor perle på et annet lysbilde og spre det til en firkant på 1,55 mm. La de to smørene tørke.

Smørefarging

Giemsa eller Wright flekker, blant andre, kan brukes til fine dråper. Giemsa eller May-Grunwald Giemsa flekker anbefales for tykk utstryk.

Giemsa flekk

Smøringen fikseres i 3 minutter med metanol, tappes og får tørke igjen. Smøret blir deretter dekket med Giemsa-flekker i 10-15 minutter. Den vaskes med destillert vann og får tørke. For å observere under mikroskopet plasseres en dråpe nedsenningsolje.

Wrights flekk

Smøret er dekket med Wrights flekk i 5 minutter. Kast og plasser bufferløsningen ved pH 6,8 i 6 minutter. Blås preparatet for å homogenisere. Vask med destillert vann og la tørke. Observer under mikroskopet.

Typer mangelfull utstryk

Det forekommer hos praktikanter i findråpeteknikken med lysbilder.

Utseende med områder med ulik tykkelse (tynt og tykt ispedd)

Det er fordi bevegelsen som ble utført ikke var konstant under spredningen, noe som gjorde stopp og startet på nytt.

Veldig kort utstryking

De har to årsaker: den ene skyldes at bakkeskredet er løftet før du kommer til den andre enden av lysbildet. I dette tilfellet er det ekstremt tykt og kort.

På den annen side, hvis utstrykningen er kort, men tynn, skyldes det at dråpens størrelse var veldig liten.

Smør med et raket område mot slutten av smøret

Det har flere årsaker: den ene er at bakkanten er mangelfull, at trykket som utøves på mottaksgliden økes ved spredningstidspunktet eller at jordkanten på sliden er slitt.

Smør med vakuoldannelse eller klare avrundede eller elliptiske områder

De skyldes bruk av fettete utstryk (dårlig vasket og avfettet).

Veldig tykk eller veldig tynn utstryk

Dråper som er for store vil gi veldig tykke utstryk fra start til slutt og veldig små dråper vil gi veldig fine utstryk.

histologi

Blodcellene kan sees i en blodutstryking. Blant dem er:

-Erytrocytter eller røde blodlegemer

Menneskelig blod, erytrocytter eller røde blodlegemer og to hvite blodlegemer. Tatt og redigert fra: Viascos. Din observasjon er av største viktighet. På dette nivået kan det påvises anemier, talassemi, benmargsykdommer, etc.

Antallet erytrocytter eller røde blodceller er ca 5 x 10 ⁶ mm3 hos menn og 4,5 x 10 ⁶ hos kvinner. Røde blodlegemer er formet som biconcave plater, med en sentral fysiologisk blekhet. De kan sees separat (normal) eller danne rouleaux-stabler (unormale).

Utstryk viser også poikilocytose (røde blodlegemer i forskjellige former), anisocytose (røde blodlegemer i forskjellige størrelser), anisopoikilocytose (forskjellige former og størrelser), anisochromia (forskjellige farger), erytroblaster (umodne røde blodlegemer), mikrocytose (mindre røde blodlegemer) ) og makrocytter (større erytrocytter).

Når de gir mangel på mengden hemoglobin og den sentrale bleken øker, sies det at det er hypokromi. Når en normal rød serie observeres, vil den bli rapportert som normocytisk og normokrom.

-Vite blodceller eller leukocytter

hvite blodceller

Den normale mengden varierer fra 5 000 til 10 000 mm ³ . De endres i smittsomme prosesser, i allergier og i leukemi. Flere typer kan skilles i blodutstryningen, som er forklart nedenfor.

Segmenterte nøytrofiler

De representerer 55-65% av de totale leukocytter. De måler mellom 10-15 mikrometer. De har en segmentert eller lobet kjerne som tar i bruk forskjellige morfologier, og derfor kalles den polymorfonukleær.

De har rikelig med neutrofile korn i deres cytoplasma og noen azurofiler. De øker i bakterielle infeksjoner (nøytrofili), reduserer virusinfeksjoner (nøytropeni).

Morfologiske avvik som pleokaryocytose (hypersegmenterte kjerner), buer (umodne celler) eller makro-poliser (ovalformet og stor) kan observeres.

Andre endringer:

-Toksiske granulasjoner

-Pseudo Pelger-neutrofiler (kjernen har ikke lobulasjoner, eller de er bilobet).

-Döhle kropper: mørkeblå cytoplasmatiske inneslutninger.

- Økt cytoplasmatisk basofili.

-Intracytoplasmatiske vakuoler.

-Cellular picnosis (tap av internukleære broer).

Segmenterte eosinofiler

De representerer 1-3% av de totale hvite blodcellene. De måler 9-10 mikrometer. De er preget av tilstedeværelsen av rikelig acidofile cytoplasmatiske granuler og få azurofiler. Kjernen har to lobuleringer. Deres antall øker i allergier og sykdommer med parasittisk opprinnelse.

Segmenterte basofiler

De er ekstremt sjeldne, og representerer 0-1% av leukocytter. De måler 10-12μm. Kjernen er vanligvis uregelmessig i grenser og kan være bilobed, men den sees ikke på grunn av det store antallet grove basofile granulater i dens cytoplasma. Svært sjelden kan basofili sees.

lymfocytter

De er små celler med basofil cytoplasma, med en kjerne, veldefinert, rund, med kondensert kromatin. Kjernen omfatter nesten hele cellen. De representerer 26-40% av blodleukocytter. De øker i virusinfeksjoner (lymfocytose). Reaktive lymfocytter kan sees.

monocytter

Celler større enn lymfocytter, med større cytoplasma og løsere, ovale kromatinkjerner. De måler 9-12μm. Cytoplasmaet er rikelig og virker vanligvis blekgråblå med standard fargeteknikker. Vakuolerte monocytter og monocytose kan observeres blant endringene.

-Platelets

De måler mellom 1,5-3 um. Formen er rund eller oval. Normalverdien varierer fra 150 000 til 350 000 blodplater / mm3. De kan avta i noen virusinfeksjoner. De har ikke en kjerne og er farget lilla. Unormaliteter kan sees i denne serien, så som makro- eller mikroplatformer, trombocytose eller trombocytopeni, og blodplaterfragmenter.

Patologiske elementer

Blodparasitter

Hemoparasitter, som forårsakende middel av malaria eller malaria (parasitter av slekten Plasmodium), kan sees i blodutstryk. Av denne grunn er det viktig at smøret blir analysert manuelt, siden automatisert utstyr savner dette funnet.

Bakterie

Ved patologier som tilbakefallende feber eller Lyme-sykdom, kan dets forårsakende middel observeres. I dette tilfellet tilsvarer det Borrelia recurrenti spirochetes og Borrelia burgdorferi i blodet.

Umodne celler

Alvorlige tilfeller observeres blant annet i leukemier, leukemoidreaksjoner og leukoerythroblastisk reaksjon. Ved bakterieinfeksjoner kan det være svake avvik til venstre (tilstedeværelse av kjeltringer). Erythroblasts kan også sees i noen anemier.

referanser

1. Blod og hematopoietisk vev. Tilgjengelig på: sld.cu
2. Gomez A, Casas M. 2014. Angel. Klinisk laboratorietolkning. 8. utgave. Redaksjonell Médica Panamericana.
3. Solari Soto L, Soto Tarazona A, Mendoza Requena D, Llanos Kontoer A. Sammenligning av parasittiske tettheter i tykk venøs bloddråpe kontra akupressur i diagnosen Malaria vivax. Rev Med Hered 2002; 13 (4): 140-143. Tilgjengelig på: scielo.org.
4. Terry Leonard Nelson, Mendoza Hernández Carlos. Betydningen av studien av perifert blodsmøre hos eldre. Medisur 2017; 15 (3): 362-382. Tilgjengelig på: scielo.sld
5. Grinspan S. Studien av perifert blodsmøre. Fortsettelse av medisinsk utdanning. Tilgjengelig på: bvs.hn/RMH