KONGO RØD: EGENSKAPER, KLARGJØRING OG APPLIKASJONER - BIOLOGI - 2025

Den kongorødt er et azo-fargestoff for proteiner som er dannet ved kopling av et diazoniumsalt og en aktiv aromatisk ring. Dette stoffet er i stand til å absorbere elektromagnetisk stråling i det synlige spekteret, og det er derfor det har en intens farge.

Det er negativt ladet. Derfor har det en affinitet for positivt ladede cellulære komponenter, for eksempel visse proteinstoffer. Fargen varierer i henhold til pH. I denne forstand, hvis mediet er surt (<enn pH3), er fargen intens blå. Mellom pH3 - pH 5.2 er det fuchsia (vendingssone), og med> pH 5.2 er fargen dyp rød.

Dehydrert Kongo Red og Kongo Red kolloidal løsning. Kilde: Pixinio.com og Wikipedia.com

Det er et veldig allsidig stoff, siden det har flere bruksområder. Det har blitt brukt som et fargestoff i tekstilindustrien, og også for celler og stoffer.

Også for å lage kulturmedier som måler enzymatisk virkning, som en pH-indikator, som et kontrollstoff i evalueringen av spektrofotometers funksjon, i studiet av biofilmdannelse, eller i diagnosen amyloider.

På samme måte har det gjort det mulig å skille bakterie- og soppserotyper ved å identifisere spesifikke strukturer i deres vegg (lipopolysakkarider).

Kjennetegn på Kongo rød

Dette stoffet ble oppdaget av Böttiger i 1884. Det er et diazoniumderivat dannet av bis-diazosyren av benzidin med naftionsyre. Kongos røde molekyl måler 21 Armstrong og molekylvekten er omtrent 8000 g / mol.

Kongorød kjennetegnes ved å være løselig i vann, og enda mer i organiske løsningsmidler som etanol, og danner en kolloidal løsning.

Det har en affinitet for cellulose, for amyloid vev og for positivt ladede cellulære komponenter.

Forberedelse

Congo Red tilberedes i forskjellige konsentrasjoner avhengig av teknikken som skal brukes. De fleste bruker Kongo rød på blant 1%, 2%, 0,1%.

For å tilberede 2% Kongo rød, bør for eksempel 2 g dehydrert konditorfarge veies ut og 100 ml destillert vann tilsettes. Den blir deretter oppbevart i en rav flaske.

applikasjoner

Som fargestoff i tekstilindustrien

For en tid tilbake ble den mye brukt i tekstilindustrien på grunn av dens fiksering på bomull, men for tiden er den i bruk fordi den er kreftfremkallende og også fordi fargen ikke er stabil, og blir misfarget av friksjon.

Bestemmelse av biofilmdannelseskapasitet

Den biofilmdannende kapasiteten til mikroorganismer har vist seg å være en virulensfaktor.

I denne forstand brukes Kongo-røde fargestoff som en metode for å bestemme dannelse av biofilm. Kongo rød binder seg til eksopolysakkarider som er til stede i biofilmen. Sammenlignet med andre metoder er det imidlertid minst anbefalt på grunn av høye falske negativer som oppstår.

Metoden bruker Kongo rød agar, denne er sammensatt av blodagar som base, glukose (10 g / l) og Kongo rødfargestoff (0,4 g / l). Stammene som skal evalueres, blir podet i mediet og inkubert i 24 timer ved 37 ° C og deretter inkubert i 48 timer ved romtemperatur.

En positiv test er påvist hvis krystallinske kolonier med svart farge og tørt utseende blir observert.

Kvalitetskontroll av spektrofotometre

For å vurdere om et absorbans- eller transaksjonsmåleutstyr samsvarer med de fotometriske parametere som er fastsatt i internasjonale forskrifter, kan en enkel teknikk brukes for å fastslå om utstyret avgir resultater innenfor akseptabilitetsområdene.

En av evalueringsteknikkene er å bruke Kongo rød, basert på det isosbestiske punktet.

Det isosbestiske punktet er bølgelengden som Kongo rød avgir den samme absorbansen uavhengig av pH, konsentrasjon og temperatur. Absorpsjonsverdien er fast og kan brukes som referanse.

Det teoretiske isosbestiske punktet for Kongo rød er kjent for å være 541 nm. Hvis den oppnådde verdien er forskjellig, er det kjent at utstyret har problemer med bølgelengden, og det må sjekkes av en spesialisert tekniker.

Utarbeidelse av kulturmedier

Ortiz et al. Beskriv et kulturmedium fremstilt med Kongo-rødt fargestoff og karboksymetylcellulose kalt CMC-agar for å påvise cellulitt-mikrobielle stammer; det vil si cellulaseprodusenter (endogluconeses, exoglucanases og ß-glukosidase).

Dette mediet har en intens farge. Fargen blir spredt ved virkningen av endoglucanase-enzymet som bryter strukturen til karboksymetylcellulose. Dette antyder en positiv reaksjon.

Nedgangen i viskositet og absorbanse gjør det mulig å kvantifisere enzymaktiviteten. For eksempel i stammer av Streptomyces sp.

Identifisering av mikroorganismer

Kongo rød har en tilhørighet for polysakkaridstrukturer av visse stammer, og oppnår dermed identifisering av disse mikroorganismer. Blant dem er Escherichia coli, og Shigella flexneri.

Kongo røde agarplater brukes også til å skaffe karakteristiske kolonier, som tilfellet er med Azospirillum sp, som blant annet gir skarlagensrøde kolonier.

Celle og vev flekker

En av de vanligste bruksområdene av Kongo red er dens nytteverdi i diagnosen amyloidose. Denne merkelige sykdommen består av den ekstracellulære opphopningen av et unormalt protein i forskjellige organer. Dette unormale proteinet er laget i benmargen og kalles amyloid.

Kongo rød har en høy affinitet for dette stoffet. Denne egenskapen har blitt brukt for å vise sin tilstedeværelse i histologiske vevsseksjoner. Congo Red brukes sammen med Hematoxylin / Eosin til dette formålet.

Forbindelsen av amyloidvevet og Kongo-rødt skjer gjennom ikke-polære hydrogenbindinger, mellom karboksylgruppene og aminogruppen. Amyloidprotein gir karboksylgruppene (COOH) og Kongo rød aminogruppen.

Amyloid vev er farget i forskjellige nyanser som spenner fra rosa til dyp rød når det sees under lysmikroskopet. I mikroskoper med dobbelt polarisert lys blir disse preparatene observert med en patognomon eplegrønn birefringence.

Det vil si at de presenterer dikroisme, siden amyeloidfibrene er anisotrope. Denne observasjonen bekrefter diagnosen.

Vevsfarging med Kongo rød er kompatibel med andre diagnostiske metoder, for eksempel immunocytokjemiske metoder, og kan til og med fargelegges.

Som en pH-indikator

Egenskapen til å vri seg mot endringer i pH brukes av teknikken kalt kromoendoskopi.

Denne teknikken bruker fargestoffer og pH-indikatorer som gjør det mulig å oppdage visse patologier. Blant dem er bruken av Kongo rød, som kan avsløre tidlig kreftfoci i mageslimhinnen, og brukes som en markør for surhet.

Teknikken er basert på det faktum at Kongo rød ved sur pH er svart. Derfor, etter å ha lagt en løsning av Kongo rød på mageslimhinnen, vil områdene der det er blekhet bli valgt å ta prøven for biopsien, det vil si der det ikke er syreproduksjon. Dette antyder tilstedeværelsen av et kreftfokus eller tap av parietalceller.

referanser

1. "Kongo Red." Wikipedia, The Free Encyclopedia. 8. mai 2019, 12:13 UTC. 16. mai 2019, 04:08, es.wikipedia.org.
2. Ortiz M, Uribe D. Ny metode for kvantifisering av endoglucanaseaktivitet basert på det røde cellulose-Kongo-komplekset. Orinoquia. 2011 juni; 15 (1): 7-15. Tilgjengelig fra: scielo.org.
3. Peña J, Uffo O. Biofilmproduksjon i genotyper av Staphylococcus aureus isolert fra bovin mastitt på Cuba. Rev Salud Anim. . 2013 des; 35 (3): 189-196. Tilgjengelig på: scielo.s
4. Fich F, Chahuán M, Farías M, Cárdenas C, Abarzúa A, Araya G et al. Kutane manifestasjoner av systemisk amyloidose som en diagnostisk nøkkel: Klinisk tilfelle. Rev medic. Chile. 2012 apr; 140 (4): 499-502. Tilgjengelig i: scielo.
5. Duymovich C, Acheme R, Sesini S, Mazziotta D. Spektrofotometre og fotoklormetre Praktisk oppdateringsveiledning. Acta Bioquímica Clínica Latinoamericana 2005, 39 (september-desember): Tilgjengelig på: redalyc.org
6. Marín J, Díaz J og Solís J. Kromoendoskopi ved Helicobacter pylori-infeksjon: er det reaksjonstid? Rev Esp Enferm Dig 2012; 104 (1): 1-3
7. Fieser L, Fieser M. 1985. Organisk kjemi. Redaksjonell Reverté. Barcelona, ​​Spania. Tilgjengelig på: books.google.co.ve
8. Murillo M. Histologiske vevfargingsteknikker. Universitetet i Guadalajara, Mexico. Tilgjengelig på: academia.edu
9. Paillié M. Bestemmelse av cellulolytisk, ligninolytisk og amylolytisk aktivitet av Actinobacteria isolert fra rhizosfærisk jord av hvitkløver (Trifolium repens). 2012. Pontificia Universidad Javeriana Det teknisk-naturvitenskapelige fakultet Industriell mikrobiologi Bogotá DC Tilgjengelig på: repository.javeriana.edu.co
10. Cárdenas, D, Garrido M, Bonilla R, & Baldani V. Isolering og identifisering av Azospirillum sp. på Guinea-gress (Panicum maximum Jacq.) fra Cesar Valley. Beite og grovfôr, 2010; 33 (3): 1-8 Tilgjengelig i: scielo.