VOGES-PROSKAUER TEST: FUNDAMENTERING, KLARGJØRING OG BRUK - BIOLOGI - 2026

Den Voges-Proskauer -testen er en biokjemisk test anvendes for å hjelpe til med identifisering av bakterier som tilhører familien Enterobacteriaceae. Det er spesielt nyttig for å differensiere stammer av Escherichia coli fra Klebsiella og Enterobacter, blant andre.

Testen utføres i et flytende dyrkningsmedium kalt Methyl Red - Voges Proskauer, bedre kjent av forkortelsen RM / VP. Dette mediet er sammensatt av bufret polypepton, glukose, dipotassiumfosfat og destillert vann.

Metyl Red-Voges Proskauer (RM / VP) kommersielt medium / VP test henholdsvis positive og negative. Kilde: Foto tatt av forfatteren MSc. Marielsa Gil / Sudipta.nov15, fra Wikimedia Commons

Det nåværende RM / VP-mediet er en modifisering av Clark og Lubs-mediet, som opprinnelig inneholdt en lavere konsentrasjon av peptoner og glukose. Dermed ble mindre av hydrogenionet, som var nødvendig for den positive Voges-Proskauer-reaksjonen, produsert.

Testen er basert på mikroorganismens evne til å bruke glukose gjennom butylenglykolveien, og danne et nøytralt sluttprodukt kalt acetoin, i nærvær av oksygen og en alkalisk pH.

I RM / VP-mediet, i tillegg til å kunne avsløre Voges-Proskauer-testen, kan også metylrødtesten avsløres.

Basis

Voges-Proskauer testgrunnlag

Pluripeptonene som er tilstede i mediet tilveiebringer de essensielle ernæringskravene for bakterievekst. For sin del er glukose hovedforbindelsen. Mange bakterier har evnen til å metabolisere glukose og danne pyruvinsyre.

Pyruvinsyre er et midtpunkt i glukosemetabolismen og derfra kan hver mikroorganisme ta forskjellige veier. Noen vil danne blandede syrer, som melkesyre, eddiksyre, maursyre og ravsyre, og andre vil danne nøytrale produkter som 2,3-butandiol.

Voges-Proskauer-testen avslører mikroorganismens evne til å danne acetylmetylkarbinol (acetoin), et mellomprodukt av 2,3-butandiol under aerobe forhold.

Acetoin reduseres og danner 2,3-butandiol, men denne reaksjonen er reversibel, derfor dannes acetoin hvis 2,3-butandiol oksideres. Derfor er oksygen viktig.

Dipotassium phosphate er bufferen som buffrer blandingen ved pH 6,9 ± 0,2.

Bevisavslørings- og tolkningsgrunnlag

For å demonstrere reaksjonen må en utvikling utvikles ved å bruke to reagenser (Barrit-reagenser), kjent som Voges A og Voges B.

Voges A er en 5% løsning av a-naftol, og Voges B er et 40% kaliumhydroksydpreparat. Hvis kaliumhydroksyd ikke er tilgjengelig, kan det erstattes av 40% natriumhydroksyd.

Α-Naphthol er en katalysator som vil øke intensiteten på reaksjonsfargen, og gjøre testen mer følsom. Α-naftolen må alltid tilsettes først og riste røret slik at mediet kommer i kontakt med oksygenet. På denne måten oksyderes det tilstedeværende acetoinet til diacetyl, og 2,3-butandiol oksideres for å danne acetoin, og fører dette til diacetyl.

Slik vil a-naftol binde seg til diacetyl, som igjen har gått sammen med guanidinkjernen som er til stede i aminosyren arginin, sistnevnte kommer fra pluripeptoner.

For sin del er kalium eller natriumhydroksyd ansvarlig for å absorbere CO ₂ og reagere med peptoner. Denne reaksjonen forårsaker dannelse av en lakserosa farge, tydelig synlig etter å ha ristet røret veldig godt.

Rettige mengder diacetyl, pepton og α-naftol må blandes for at farge skal skje øyeblikkelig. Hvis dette ikke skjer, får røret hvile i 15 minutter før det tolkes.

Testen er vanligvis positiv etter 2 til 5 minutter, når en svak rosa farge kan sees. Hvis du får stå i 30 minutter til 1 time, vil fargen være maksimal (intens rød).

En negativ test vises når buljongen blir gul. Etter en time, hvis testen er negativ, kan det dannes en kobberfarge som et resultat av reaksjonen av kaliumhydroksyd på a-naftol.

Forberedelse

Middels MR / VP

Vei 17 g av det dehydrerte kulturmediet og oppløst i en liter destillert vann. La stå i 5 minutter. Varm opp til koke for å løse opp fullstendig. Server 3 til 4 ml i rør og steriliser i autoklav ved 121 ° C i 15 minutter.

Det dehydrerte dyrkningsmediet er beige i fargen og det tilberedte mediet har lys ravfarget farge.

Den endelige pH for mediet er 6,9 ± 0,2.

Voges Et reagens

Vei 5 g a-naftol og oppløs i 50 ml etylalkohol (absolutt). Fortsett deretter å tilsette etylalkohol til den når 100 ml.

Voges B-reagens

Vei 40 g kaliumhydroksyd og oppløs i 50 ml destillert vann i et begerglass. Glasset må legges i et kaldt vannbad for å kontrollere temperaturen, for når preparatet er oppløst, stiger temperaturen kraftig.

Etter at løsningen er kald, overføres den til en volumetrisk kolbe og fylles opp til 100 ml med destillert vann.

Voges-Proskauer testprosedyre

For å utføre Voges-Proskauer-testen inokuleres en RM / VP-buljong med mikroorganismen som er studert, fra en ren kultur i 18 til 24 timer.

Inokulatet skal ikke være veldig tett. Det inkuberes ved 35-37 ° C i 24 til 48 timer, selv om inkubasjon i flere dager noen ganger er nødvendig. Cowan og Steel er av den oppfatning at 5 dager er den minste inkubasjonstiden som er nødvendig for å oppdage alle positive Voges-Proskauer (VP) arter av Enterobacteriaceae-familien.

Testutvikling

Skill en 1 ml alikvot i et rør og utvikle som følger: Plasser 12 dråper (0,6 ml) Voges A-reagens og 4 dråper (0,2 ml) Voges B. Bland til lufting og la sette seg i 5 - 10 minutter før du tolker. Hvis testen fortsatt er negativ, la den sitte og observere røret etter 30 minutter til 1 time.

Utseendet til en rosa-rød farge indikerer at Voges-Proskauer-reaksjonen er positiv. Hvis mediet forblir gult, er reaksjonen negativ.

Å legge til utviklere i angitt rekkefølge og mengde er viktig for å unngå falske negativer.

Bruk

Voges-Proskauer-testen er nyttig for å skille mellom stammer av E. coli som er VP-negative, av slektene Klebsiella, Enterobacter, Serratia, blant andre, som er VP-positive.

Kilde: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. utg. Redaksjonell Panamericana SA Argentina.

QA

Kontrollstammer kan brukes til å teste kvaliteten på det tilberedte mediet, inkludert Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Proteus mirabilis ATCC 43071, Salmonella typhimurium og Enterobacter cloacae ATCC 13047.

De forventede resultatene er positive Voges-Proskauer-reaksjoner bare for K. pneumoniae og E. cloacae. Resten gir negative reaksjoner.

referanser

1. Britannia Laboratories. MR-VP Medium. 2015. Tilgjengelig på: www.britanialab.com
2. Microkit Laboratories. M-Ident Voges Proskauer. 2014. Tilgjengelig: http://www.medioscultivo.com
3. Mac Faddin J. (2003). Biokjemiske tester for identifisering av bakterier av klinisk betydning. 3. utg. Redaksjonell Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 utg. Redaksjonell Panamericana SA Argentina.
5. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. utg. Redaksjonell Panamericana SA Argentina.