KAPSELFARGING: BEGRUNNELSE OG TEKNIKKER - BIOLOGI - 2026

Den farging kapsel er en differensiert farging teknikk som har den egenskap at spennings polysakkarid struktur som omgir visse bakterier og gjær kalles kapsel. Det brukes i kliniske laboratorier for å hjelpe med å diagnostisere visse patologier forårsaket av kapslede mikroorganismer.

Det brukes også i undervisningslaboratorier for demonstrasjon av denne morfologiske strukturen for studenter i helsevitenskarrierer, for eksempel: medisin, bioanalyse, sykepleie eller cytoteknologi, blant andre.

Klebsiella pneumoniae-flekker farget med kapselbeis. Indisk blekkmetode med safranin. Kilde: А.А.В

Det er flere enkle teknikker for å demonstrere tilstedeværelsen av kapsel i mikroorganismer som har den, disse er: den negative flekken, Anthony flekken og en variant som kombinerer de to foregående.

Negativ farging brukes hovedsakelig i CSF-prøver når det er mistanke om tilstedeværelsen av gjæren Cryptococcus neoformans. Denne gjæren er en vanlig årsak til hjernehinnebetennelse.

Denne teknikken bruker nigrosin eller India blekk og er basert på å skape en kontrast mellom bakgrunnen til preparatet og den ugjennomtrengelige kapsel av mikroorganismen. Bakgrunnen blir mørk og kapselen er fargeløs. På denne måten blir denne strukturen avslørt.

Når det gjelder Anthony-teknikken, kan det sies at den mest brukes i undervisningslaboratorier for å demonstrere polysakkaridstrukturen i bakterier som Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae og Neisseria meningitidis.

Bruken av denne teknikken til diagnostiske formål er svært sjelden, siden det er andre rutinemessige tester som gjør det mulig å identifisere disse mikroorganismer.

Basis

Kapselen er en sterk struktur av polysakkarid karakter. Dette beskytter mikroorganismene mot fagocytose, og er derfor en vanskelig struktur å trenge gjennom.

Det er grunnen til at kapselflekker er basert på kontrast. Fargeleggene farger bunnen av preparatet mens kapsel forblir fargeløs.

Derfor er kapselen lett gjenkjennelig med disse teknikkene. Hvis mikroorganismen ikke har en kapsel, vil den ikke kunne skilles med denne typen farging, fordi alt vil være farget i samme farge.

Alle teknikkene som brukes til å fargelegge kapselen har samme begrunnelse til tross for at de bruker forskjellige fargestoffer og prosedyrer.

Teknikker par

-Anonyme flekk

Anthony flekker bruker krystallfiolett som flekk. Dette vil farge bakteriekroppen og bakgrunnen lilla.

På den annen side brukes 20% kobbersulfat. Dette fungerer som en vaskeoppløsning, det vil si at den fjerner overflødig fiolett krystall fra preparatet, noe som gjør kapslene klare, men uten at bakteriekroppen eller bakgrunnen mister farge.

materialer

- Iriserende melk.

- Lysbilde.

- 1% fiolett krystall.

- 20% kobbersulfat.

- Optisk mikroskop.

- Fordypningsolje.

Prosess

Denne teknikken består av:

1. Dyr mikroorganismen i iriserende melk i 36 timer.
2. Plasser en dråpe av kulturen på slutten av et lysbilde, og ved siden av legg en dråpe fiolett glass, bland og spred med enden av et annet lysbilde.
3. Lufttørk og ikke varm inn.
4. Vask med 20% kobbersulfatoppløsning, la lufttørke.
5. Observer under et mikroskop med et nedsenkingsmål. Søk mot endene av spredningen.

Det er viktig å ikke bruke varme verken for å fikse eller tørke, da dette skader kapselen. Vask heller ikke med vann.

Tolkning

Iriserende melk er et utmerket kulturmedium, da det gir de nødvendige næringsstoffene for mikroorganismen for å utvikle en fremtredende kapsel.

På den annen side vil den iriserende melken danne en tykk og kompakt bunn som vil være farget lilla sammen med bakteriekroppen, men kapselen som omgir mikroorganismen vil forbli fargeløs. Derfor observeres en tydelig glorie rundt bakteriekroppen.

Grafisk fremstilling av mikroskopisk observasjon av en Klebsiella pneumoniae-flekker farget med Anthony's flekk. Kilde: Laget av forfatteren MSc. Marielsa Gil.

Fordel

Det er en enkel teknikk å utføre. Krever ikke fiksering.

Det skal også bemerkes at andre kulturmedier kan brukes, men melkemediet er foretrukket fordi det har fordelen av å tilveiebringe mer fremtredende kapsler.

ulemper

Det er en litt mer arbeidsintensiv teknikk enn negativ farging, og visualisering av den krever at du venter på at preparatet skal tørke helt.

-Negativ farging

materialer

- Skyv lysbilder.

- Kulturmedium med mikroorganismen.

- Kinesisk blekk eller nigrosin.

- Optisk mikroskop.

- Fysiologisk saltløsning.

Prosess

Plasser en dråpe fysiologisk saltvann på dekkglasset og løs opp en liten del av mikrobkulturen. Det er viktig at preparatet ikke er for tykt. Legg deretter en dråpe kinesisk blekk eller nigrosin og bland.

Et dekkglassark blir deretter plassert over preparatet uten å strømme over væsken. Det blir observert under mikroskopet ved først å fokusere på et 10X mål og deretter flytte til 40X.

Denne teknikken kan også brukes direkte på CSF-prøver. Det vil si at i stedet for å plassere en dråpe mikrobiell kultur, plasseres en dråpe CSF.

Fordel

Det er en enkel metode å utføre og samtidig billig. Det krever ikke fiksering eller tørking av preparatet.

ulemper

Ulempen er at det må observeres under et mikroskop før preparatet tørker, for hvis dette skjer, vil mikroorganismer trekke seg sammen, noe som vil gjøre visualisering vanskelig.

På den annen side kan falske positiver oppstå hvis analytikeren er uerfaren, siden leukocytter ofte blir forvekslet med gjær.

Observasjonen av gjærkapsler med den kinesiske blekk- eller nigrosin-teknikken bør betraktes som en formodende diagnose av Cryptococcus neoformans inntil det demonstreres med kulturen.

Dette er fordi det er andre gjær som kan være årsaken til hjernehinnebetennelse og ikke bare Cryptococcus neoformans, for eksempel de av slekten Candida og Rhodotorula, så vel som andre arter av Cryptococcus.

Tolkning

Hvis det er kapslede mikroorganismer, vil en mørk bakgrunn observeres, med gjennomsiktige legemer som flyter i væsken, noe som fremhever tilstedeværelsen av kapselen.

Cryptococcus neoformans kapsel farget med kinesisk blekk. Kilde: Fotokreditt: Innholdsleverandører (r): CDC / Dr. Leanor haley

-Indisk blekk teknikk

Denne teknikken kan også gjøres med nigrosin. Det er en kombinasjon av teknikkene tidligere forklart. Denne teknikken bruker krystallfiolett og indisk blekk eller nigrosin.

Bakteriekroppen blir lilla fra krystallfiolett fordi den er negativt ladet, mens nigrosin farger bunnen av smøret. Hvis bakteriene har en kapsel, vil den fremstå som en gjennomsiktig glorie rundt mikroorganismen.

Krystallfiolett kan erstattes av hvilken som helst av disse fargene: safranin, basisk fuchsin eller metylenblått.

materialer

- Fiolett glass.

- Nigrosin eller indisk blekk.

- Skyv lysbilder.

- Mikroskop.

Prosess

- Dyrka mikroorganismen i et kulturmedium.

- Plasser en dråpe av kulturen på slutten av et lysbilde, og ved siden av, legg en dråpe med indisk krystall i India eller nigrosin, bland og spred med enden av et annet lysbilde.

- Lufttørk og ikke fiks til varme.

- Dekk til med en fiolett krystallløsning i 1 minutt, vask med destillert vann, men veldig forsiktig (myk stråle), la det tørke i friluft.

- Observer under mikroskopet med et nedsenkingsmål. Søk mot endene av spredningen.

Tolkning

En lilla bakteriekropp og en mørk bakgrunn vil bli sett. Kapslen, hvis den er til stede, vil fremstå fargeløs rundt bakteriene.

referanser

1. Covadonga A, Silóniz M, Serrano S. Grunnleggende teknikker for mikrobiologi. Observasjon av bakterier. Reduca (biologi). Mikrobiologiserie. 2010; 3 (5): 15-38. D
2. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas R. Grunnflekker i mikrobiologilaboratoriet. Mediagraphic.org. 2014; 3 (1): 10-18. Tilgjengelig på: medigraphic.com
3. Gil M. Negativ farging: begrunnelse, teknikk, fordeler og ulemper. Lifeder.com.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12 utg. Argentina. Redaksjonell Panamericana SA
5. Tankeshwar A. Capsule Stain: Prinsipp, prosedyre og resultater. 2019. Medical Microbiology Guide. Tilgjengelig på: microbeonline.com